专利名称：棉花叶片抗盐鉴定方法
技术领域：
本发明涉及植物生理学，具体地，涉及棉花叶片抗盐鉴定方法。
背景技术：
在棉花抗盐鉴定方面，大多采用氯化钠胁迫下沙培、水培或者是苗期施盐胁迫的方法，主要是对种子萌发期和植株苗期的研究。但是，首先，种子萌发鉴定法要求种子量足够大，苗期施盐要求各时期的苗量较大。其次，采用这些鉴定方法进行大量材料鉴定时，要求实验规模大，需大量的人力、物力。再次，这些方法所需时间较长，种子萌发鉴定法从播种到萌发需要10天左右。最后，低抗材料死亡率高，即使一些抗性材料的生长也会受到影响，不利于品种基因资源的利用及保存。 采用上述常用方法，对有限、珍贵或者难以收获种子的材料进行抗盐鉴定时，可能导致材料的死亡，使材料丢失，同时也不能找到材料的抗性水平。棉花的功能叶片是整个植株生理活性最高的叶片，可以代表棉株的生长状况。棉花叶片棉球定位鉴定法对棉花植株进行局部鉴定，不但快速、简单，而且可以有效的对棉花进行抗盐鉴定，又不影响植株正常生长。
发明内容
本发明的目的探索一种快速、简易、精准确定棉花抗盐水平的方法，以期弥补常用棉花抗盐鉴定方法的不足。本发明的目的是提供棉花叶片抗盐鉴定方法。根据本发明的棉花叶片抗盐鉴定方法，包括以下步骤I)选择苗龄大小一致的棉苗；2)选择完好无损，无受害现象的主茎(或侧枝)功能叶或其邻位叶；3)棉球定位处理在每株的功能叶或其邻位叶的正面自叶柄处开始顺时针或逆时针方向设定位置，将大小一致的近圆形棉球蘸满设定浓度的盐溶液，按固定方向依序放置于叶片表面的相应位置；4)抗性分级按照盐溶液浓度大小分级，观察处理部位是否反应确定其抗性水平。具体地，根据本发明的具体实施方式
的方法，包括1)棉花材料苗龄大小的选择该方法对棉花苗龄大小要求不太严格，在苗期、蕾期、花铃期等各时期都能进行。苗期植株幼嫩，生理代谢旺盛，反应较敏感；直至花铃期，植株逐渐衰老，生理代谢减慢，反应不敏感。但是，实验证明，棉花不同生育期的抗性水平趋势是一致的。所以，每次处理最好保证材料的苗龄大小一致。2)材料叶片的选择，处理时要选取叶龄大小一致的叶片，这里选择主茎的功能叶片或其邻位叶，从棉株顶部开始数，第三或第四个平展叶，即生理活性最强的叶片，该叶片可以代表整株棉花的生长状况。如果，选取的叶片过于幼嫩，施用较低浓度盐溶液时即表现出明显盐害症状，不能代表材料的真实抗性水平；而选取的叶片过于老化，处理后叶片没有反应，亦显示不出其真实的抗性水平；3)棉球定位处理根据不同盐溶液浓度，在每株的功能叶的正面自叶柄处开始顺时针或逆时针方向设定位置，将大小一致的近圆形棉球蘸满设定浓度的盐溶液，按照浓度依次增加的顺序，顺时针方向依序放置于叶片表面的相应位置。浸泡不同浓度盐溶液的棉球要按照固定的顺序进行放置，逆时针或者顺时针都可，这样方便结果调查；棉球大小要合适，直径为Icm左右的圆形棉球即可，不宜过大，有些棉花叶子较小，棉球过大会导致不同处理棉球的粘连；亦不易过小，棉球小，蘸取得盐溶液少，可能导致反应不明显；棉球溶液要充足，但切勿过量，当放置在叶片时，没有液体流出为宜。4)抗性分级按照盐溶液浓度大小分级，分为5个浓度级别，观察处理部位是否反应确定其抗性水平。在处理后的第三天进行调查，叶片表面出现的黄色干枯圆点即为盐害症状。然后根据实际反应情况确定其抗性水平。本发明提供了棉花抗盐研究方面的一种新方法，在国际和国内为独创，具有以下优点1、该方法大大缩短了实验周期，从开始处理到调查结束，3天时间即可完成。2、该方法采用局部处理法，大大节约材料，仅一片叶子即可，处理后的后期危害几乎没有，不会影响植株的正常生长。对于有限或者珍稀材料具有特别重要的意义。3、该方法采用浓度大小分级，处理部位是否反应为标准，减少了人为误差，操作。该方法操作简单，容易掌握和推广应用。
图I棉球定位法处理棉叶浸泡了 5个浓度盐溶液的棉球在叶片上位置，I (0%Nacl) ；2(0. 4% Nacl) ；3(1. 0% Nacl) ；4(1. 6% Nacl) ；5(22% Nacl) 图 2 棉球定位鉴定法观察结果从a-e为高抗至高感,其中,a.高抗,叶片无反应,I级；b.抗,5反应，1_4不反应，2级；c.耐，4-5有反应，1-3无反应，3级；d.感，3-5有反应，1-2无反应，4级；e.高感，2-5有反应，I无反应，5级；5个材料分别是阔叶棉101，阔叶棉9，中12，TM-1,阔叶棉4 ；苗龄65天，叶片是主茎上的功能叶(从棉株顶部开始数第4片平展叶)。图片3不同生育期处理结果a苗期(第30天)；b蕾期(第65天)。
具体实施例方式实施例I叶片棉球定位法鉴定中半野生棉对氯化钠的抗性1、材料、叶片的选择材料的种植、管理等没有具体要求。棉花苗龄的大小，即棉花生育期，没有严格要求，在苗期、蕾期、花铃期等各时期都能进行。但是，同一批次的处理要确保材料的苗铃大小一致。功能叶片所在棉株上的位置没有特殊要求，主茎和侧枝均可，但是为了确保功能叶片所处微环境的差异小，一次处理全部选择主茎或都选用侧枝。2、盐溶液的配制配制IOOmL氯化钠溶液，分别称取0. 4、1. 0、1. 6、2· 2g固体氯化钠(分析纯)，溶于IOOmL蒸馏水中，分别配制成0.4%,1.0%,1.6%,2.2%的氯化钠溶液，备用。3、棉球的准备准备好脱脂棉，撕成大小合适的圆形棉球，直径为Icm左右即可。
4、棉球定位处理根据不同盐溶液浓度，在每株的功能叶的正面自叶柄处开始顺时针方向设定位置，将大小一致的近圆形棉球蘸满设定浓度的盐溶液，按照浓度依次增加的顺序，顺时针方向依序放置于叶片表面的相应位置。如图I所示，浸泡了 5个浓度(I 0% Nacl ；2 :0. 4%Nacl ；3 1.0% Nacl ；4 1.6% Nacl ；5 2. 2% Nacl)盐溶液的棉球放在叶片上相应的位置上。图I中的材料是半野生棉-莫利尔棉15，苗龄是65天，叶片是主茎上的功能叶(从棉株顶部开始数第4片平展叶)。5、结果调查处理后第3天调查，棉球处理的部位，由于受盐胁迫，导致细胞失水死亡，外在表现就是叶片上棉球所在的位置开始变黄、干枯。不同材料的反应级别不同，从而确定出其抗性水平。如图2所示，从a-e为高抗至高感，其中，a.高抗，叶片无反应，I级；b.抗，位置5反应，1-4不反应，2级；c.耐，位置4、5有反应，位置1-3无反应，3级；d.感，位置3-5有反应，位置1-2无反应，4级；e.高感，2-5有反应，位置I无反应，5级。5个材料分别是阔叶棉101，阔叶棉9，中12，TM-I，阔叶棉4 ;苗龄65天，叶片是主茎上的功能叶(从棉株顶部开始数第4片平展叶)。另外，实验证明，不同生育期的棉苗的抗性水平趋势也是一致的。如图3所示，所选材料是莫利尔棉15，叶片是主茎功能叶(从棉株顶部开始数第4平展叶)，a是苗期(苗龄30天)的处理结果，b是蕾期(苗龄65天)的处理结果，两次处理的结果都表明半野生棉莫利尔15处于抗盐水平的第5级,属于高感材料。
权利要求
1.棉花叶片抗盐鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤 1)选择苗龄大小一致的棉苗； 2)选择叶龄一致的主茎或侧枝的功能叶或其邻位叶； 3)棉球定位处理根据不同盐溶液浓度，在功能叶或其邻位叶的正面自叶柄处开始顺时针或逆时针方向设定位置，将大小一致的棉球蘸满设定浓度的盐溶液，按固定方向依浓度顺序放置于叶片表面的相应位置； 4)抗性分级按照盐溶液浓度大小分级，观察处理部位是否反应确定棉花品种的抗性水平。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤I)中，选择处于苗期、蕾期或花铃期的棉苗。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述功能叶为从棉株顶部开始数第三或第四个平展叶。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述棉球的直径为lcm。
5.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤3)中，棉球盐溶液含量达到放置棉球在叶片上无液体流出的标准。
6.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤4)中，盐溶液浓度划分为5个等级。
全文摘要
本发明涉及植物生理学，具体地，涉及棉花叶片抗盐鉴定方法。所述方法包括步骤1)选择苗龄大小一致的棉苗；2)选择叶龄一致的主茎或侧枝的功能叶或其邻位叶；3)在叶片的正面自叶柄处开始顺时针或逆时针方向设定位置，将大小一致的棉球蘸满设定浓度的盐溶液，按固定方向依序放置于叶片表面的相应位置；4)按照盐溶液浓度大小分级，观察处理部位是否反应确定棉花品种的抗性水平。该方法可以在任何时期对棉花植株进行大量的鉴定和筛选，同时不影响植株的正常生长，大大节约实验材料，缩短实验周期，减小实验规模，其结果亦精准可靠，对精确评估材料抗性水平提供了技术支持，而且成本低、操作极其简单，容易掌握和推广应用。
文档编号A01G7/06GK102613017SQ201210053538
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月4日 优先权日2012年3月4日
发明者刘方, 张香娣, 王坤波, 王春英, 王玉红, 蔡小彦, 黎绍惠 申请人:中国农业科学院棉花研究所