专利名称：一种动物养殖用乳酸菌液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种动物养殖用乳酸菌液的制备方法。
背景技术：
乳酸菌是生猪和家禽养殖行业常用的有益菌。液体乳酸菌生产成本比较低，是一种应用比较广泛的活菌制剂，主要通过饮水体系供动物饮用。传统的乳酸菌制剂，不论是固态干粉还是瓶装或者桶装菌液，都是在纯培养环境下生产的，生产过程的无菌条件要求很高，设备投资大，能耗高，原料需要高温消毒灭菌，每吨液体制剂生产成本至少在5000元以上，导致乳酸菌制剂的推广应用存在很大困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种动物养殖用乳酸菌液的制备方法，包括如下步骤I)将乳酸菌发酵培养基加热至95— 100°C灭菌5 — 20分钟后，冷却至38°C以下；2)将同型乳酸发酵菌的种子液按I: (2—50)的体积比接种至经步骤I)冷却的所述发酵培养基中进行液体厌氧发酵；3)收集经步骤2)所述液体厌氧发酵的发酵液，获得所述动物养殖用乳酸菌液；所述发酵培养基为同型乳酸发酵菌的发酵培养基；在上述方法中，发酵培养基的灭菌温度为95— 100°C，不需要使用高压罐等设备；大比例接种同型乳酸发酵菌的种子液使杂菌不易繁殖。在上述方法中，在进行所述液体厌氧发酵前先将接种所述同型乳酸发酵菌的种子液的所述发酵培养基分装；由于同型乳酸发酵菌发酵不需氧气，且发酵过程中不产生二氧化碳气体，采用先分装后发酵的方式既可提高发酵效率，又可降低污染率。在上述方法中，所述同型乳酸发酵菌的种子液中的所述同型乳酸发酵菌浓度为2X 10lclcfu/L—2X 1012cfu/L。在上述方法中，为了进一步降低成本，所述发酵培养基具体可为将去皮豆柏、水、红糖或葡萄糖和糖蜜按35:400:20:20的质量比制成的溶液；具体可按照包括如下步骤的方法进行将所述去皮豆柏用水浸泡后磨成粉状，再用水提取，收集所有水提液与所述红糖或葡萄糖和所述糖蜜混合制成溶液；所述浸泡的温度可为常温(15 — 35°C)，时间可为20-30小时；另外，由于豆柏中含有丰富的植物蛋白，无抗生素成分，发酵后的产物用于饲喂动物更安全。在上述方法中，步骤2)所述液体厌氧发酵的温度为18 — 40°C，如18 — 28°C或28-40。。。在上述方法中，步骤2)所述液体厌氧发酵的时间可为4-21天，根据同型乳酸发酵菌种类和发酵温度的不同而不同。在上述方法中，步骤2)所述同型乳酸发酵菌的种子液是将所述同型乳酸发酵菌用所述发酵培养基进行液体厌氧发酵获得的所有发酵产物。
在上述方法中，所述同型乳酸发酵菌具体可为粪肠球菌(Enterococcusfaecal is)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)或屎肠球菌(Enterococcusfaecom)。实验证明利用本发明方法制备得到的同型乳酸发酵菌液在17 38°C下保存30天，活菌数量基本不变，存放3个月，活菌残留比例在80%以上，活菌数检测过程中杂菌含量均在5. Ocfu/mL以下；在生猪养殖过程中，饲喂含3mL/kg同型乳酸发酵菌液的日粮，可使断奶仔猪粪便中的蛋白残留量减少17%，猪舍氨气浓度明显降低；同时可明显提高仔猪的平均日增重和饲料转化效率。使用本发明所提供的方法制备动物养殖用乳酸菌液的优点如下获得的乳酸菌液可应用于生猪和家禽养殖的直接饮用，对设备的要求低，生产成本低(每吨成品的生产成本不超过3000元)，获得的乳酸菌液质量稳定，有利于乳酸菌液在养殖业中的推广应用，提高动物生产性能的同时提高动物源性食品的安全。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例所使用的乳酸菌来源如下粪肠球菌(Enterococcus faecalis):中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC1. 101 ；嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus):中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC I. 1855 ；屎肠球菌(Enterococcus faecom):中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,编号为CGMCC1. 2025。下述实施例所采用的原料来源如下豆柏东海粮油集团有限公司，“四海”牌。葡萄糖济南德佳化工有限公司，食品级，“西王”牌。甜菜糖蜜北京银天使国际贸易有限公司，含糖量46%。红糖嘉兴古乡红糖食品科技有限公司，“古乡”牌。实施例I、动物养殖用粪肠球菌(Enterococcus faecalis)液的制备方案I 取35kg去皮豆柏，加入350kg水，常温(15-35 V )浸泡20小时后用磨浆机磨碎(成粉状)，离心去除沉淀，取所有水提液(即上清液)用抽水泵转入到容积为1000升水罐中；再补加50kg水、20kg葡萄糖和20kg甜菜糖蜜,30 36rpm下低速搅拌；通蒸汽加热到95°C灭菌20分钟；在夹套通冷却水降温，同时12 15rpm下低速搅拌使培养基的温度保持均匀；当罐内溶液温度下降到38°C以下时,接入粪肠球菌(Enterococcus faecalis)种子液8升(即按体积比为1:50接种)，静置5分钟，然后分装在容积为10升的塑料桶中，每个桶都装满，不留空隙。封闭上部装料口，18 28°C下放置21天后，活菌含量为I. 2X1012cfu/L，获得动物养殖用粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)液。本方案中的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)种子液的制备方法如下
I、制备纯种单菌落按表I的配比配制I升培养基，加热至80 90°C，充分搅拌，彻底溶解各组分，获得组成均一的培养基。将培养基冷却到70°C，分装在500ml三角瓶中，每瓶250ml，瓶口用棉塞封口，外包牛皮纸。120°C灭菌20 30分钟，待培养基冷却至60°C，在无菌条件下把培养基倒入直径为9. Ocm的培养皿中，每皿15 20ml，冷却至室温备用。在上述装有培养基的平皿中分别加入O. 5ml经无菌生理盐水稀释至10_4、10_5和ICT6倍的粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)，每个稀释倍数3个重复，35 39°C下厌氧恒温培养3天，获得生长良好的纯种单菌落。表I.固体培养基(以IOOOml为基准)组分
权利要求
1.一种动物养殖用乳酸菌液的制备方法，包括如下步骤 1)将乳酸菌发酵培养基加热至95—100°C灭菌5 — 20分钟后，冷却至38°C以下； 2)将同型乳酸发酵菌的种子液按I:(2-50)的体积比接种至经步骤I)冷却的所述发酵培养基中进行液体厌氧发酵； 3)收集经步骤2)所述液体厌氧发酵的发酵液，获得所述动物养殖用乳酸菌液。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于在进行所述液体厌氧发酵前先将接种所述同型乳酸发酵菌的种子液的所述发酵培养基分装。
3.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于所述同型乳酸发酵菌的种子液中的所述同型乳酸发酵菌浓度为2X 101(lcfu/L— 2X 1012cfu/L。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述发酵培养基是将去皮豆柏、水、红糖或葡萄糖和糖蜜按35:400:20:20的质量比制成的溶液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述发酵培养基按照包括如下步骤的方法制成将所述去皮豆柏用水浸泡后磨成粉状，再用水提取，收集所有水提液与所述红糖或葡萄糖和所述糖蜜混合制成溶液。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述浸泡的温度为15— 35°C，时间为20—30小时。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于步骤2)所述液体厌氧发酵的温度为 18 — 40°C。
8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于步骤2)所述液体厌氧发酵的时间为4 一21天。
9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于步骤2)所述同型乳酸发酵菌的种子液是将所述同型乳酸发酵菌用所述乳酸菌发酵培养基进行液体厌氧发酵获得的所有发酵产物。
10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于所述同型乳酸发酵菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)或屎肠球菌(Enterococcus faecom)。
全文摘要
本发明公开了一种动物养殖用乳酸菌液的制备方法。该方法包括如下步骤1)将发酵培养基加热至95—100℃灭菌5—20分钟后，冷却至38℃以下；2)将同型乳酸发酵菌的种子液按1:(2—50)的体积比接种至经步骤1)冷却的所述发酵培养基进行液体厌氧发酵；3)收集经步骤2)所述液体厌氧发酵的发酵液，获得所述动物养殖用乳酸菌液。使用本发明所提供的方法制备动物养殖用乳酸菌液的优点如下对设备的要求低，生产成本低，获得的乳酸菌液质量稳定，有利于乳酸菌液在养殖业中的推广应用，提高动物生产性能的同时可提高动物源性食品的安全。
文档编号A23K1/00GK102960537SQ20121049151
公开日2013年3月13日 申请日期2012年11月27日 优先权日2012年11月27日
发明者陆文清, 王春林, 王园, 刘绪同 申请人:北京同力兴科农业科技有限公司