专利名称：黄芪多糖在制备青贮饲料中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于动物饲料领域，具体涉及一种使用化学物青贮饲料的方法。
背景技术：
青贮饲料作为饲料体系中的重要组成部分，是畜牧业的物质基础，在畜牧养殖中发挥着重要作用。随着我国人民生活水平的不断提高，人们对高品质肉类和奶类等食品的消费需求不断增长，为了保持良好的畜肉和产奶品质，必须全年均衡供给优质青贮饲料，尤其是高产奶牛的饲养中，青贮饲料已经成为日粮中不可缺少的组成成分。青贮饲料中，豆科牧草蛋白质含量高，是优质的饲草，但缓冲值高，可溶性碳水化合物含量低，自然状态下青贮比较困难。由于生产实践中不能严格控制青贮饲料在发酵贮藏过程中所需的厌氧环境以及在取用过程中未能妥善管理，往往造成青贮饲料的好气性腐败，即二次发酵。特别是当青贮饲料开封接触到空气后，就会促进酵母菌、霉菌及一些好氧细菌的生长繁殖，贮料的温度及PH值随之升高，青贮饲料开始腐败。同时，由于腐败菌的生长繁殖也会造成贮料营养物质的严重损失，降低青贮饲料的品质，进而影响家畜的采食量及生产性能。因此，如何有效地控制牧草在青贮发酵、贮藏及取用过程中的厌氧环境及有氧稳定性对于保证青贮饲料的品质非常重要。添加剂的运用一定程度上改善了这种情况，青贮饲料添加剂从单一添加剂来看主要有铵类化合物、有机酸类、尿素和生物防腐剂等，这些添加剂都具有抑制微生物活动的作用，并且提高青贮饲料营养品质。近几年来，生物添加剂尤其是乳酸菌添加剂被人们广泛认识，其可以增加乳酸菌数量，抑制不良微生物的生长，促进发酵进程，但其成本较高，许多仍处于研发阶段，尚未形成产品还未被广泛应用。目前在畜禽疾病的预防与治疗中向饲料中添加抗生素、激素、化学合成药比较常见，虽然其效果明显，但这些药物易在畜产品中残留，危害消费者健康，同时易产生抗药性。为了得到高效、安全、无公害的畜产品，在畜禽饲料中添加中草药成为一种新趋势，添加中草药的有效成分日趋增强，黄芪多糖是目前应用广泛的一种。黄芪多糖为黄芪的主要天然活性成分，具有免疫调节、提高巨噬细胞活性、抗肿瘤等作用。黄芪多糖常常以粉剂拌料，以提高畜禽的免疫能力，但将黄芪多糖作为豆科牧草青贮饲料添加剂及其在制备青贮饲料中的应用在国内外还未见报道，也未见有公开使用。
发明内容
针对青贮饲料制备领域的不足之处，本发明目的是提供黄芪多糖在制备青贮饲料中的应用。本发明的另一目的是提供应用黄芪多糖制备青贮饲料的方法。实现本发明上述目的的具体技术方案为黄芪多糖在制备青贮饲料中的应用。所述应用中，黄芪多糖在青饲料中添加的比例为O. 001-0. 005%，添加有黄芪多糖的青饲料经过发酵即为青贮饲料。青贮饲料发酵促进剂是一种在发酵前加入青贮原料中，与所述青贮原料一起进行厌氧发酵从而促进发酵的青贮饲料添加剂。黄芪多糖起到了发酵促进剂的作用。青忙原料为制作青忙饲料的原料，即青饲料(也叫青绿饲料、绿饲料)，是指可以用作饲料的植物新鲜茎叶，主要包括天然牧草、栽培牧草、田间杂草、菜叶类、水生植物、嫩枝树叶等。所述青贮饲料是将青饲料在厌氧的条件下进行发酵得到的饲料。黄芪多糖，为中草药黄芪的主要有效成分，该成分为水溶性物质。应用黄芪多糖制备青贮饲料的方法，包括步骤I)将青饲料切碎，然后喷洒黄芪多糖的水溶液；2)将步骤I)所得青饲料装入青贮袋中，室温发酵。其中，所述青饲料的含水量为60-75%。青饲料切碎成2-5cm长度。其中，所述青饲料是豆科的牧草。优选地,所述青饲料是苜猜属牧草,包括紫花苜猜(Medicago sativa L.)、黄花苜猜(Medicago falcate L.)和金花菜(Medicago hispida Gaertn.)中的一种或多种。其中，所述黄芪多糖添加到青饲料中的质量比例为O. 001-0. 005%。其中，所述黄芪多糖的水溶液是黄芪多糖与水质量比例为O. 1:50-200的水溶液。其中，所述青饲料发酵的时间为30-60天。所述发酵为室温密闭发酵。所述的方法制备得到的青贮饲料。上述方法制备的青贮饲料，相对于不添加黄芪多糖、其他制备条件相同的青贮饲料(对照)，具有下述特性I)粗蛋白含量闻于对照；2)氨态氮与总氮的比值低于对照；3)中性洗涤纤维含量低于对照；4)酸性洗涤纤维含量低于对照；5) pH值低于对照；6)乳酸含量高于对照；7 )乳酸菌含量高于对照。本发明的有益效果在于本发明提出，将黄芪多糖作为豆科牧草青贮饲料添加剂与豆科牧草青贮原料共同发酵，能够促进乳酸菌生长繁殖和提高青贮饲料的发酵品质，所制备的青贮饲料，与不加黄芪多糖的对照相比，其粗蛋白含量升高，氨态氮与总氮的比值降低，中性洗涤纤维含量降低，酸性洗涤纤维含量降低，PH值降低，乳酸含量高于对照，乳酸菌含量高于对照。本发明不仅对豆科牧草青贮饲料品质有所改善，还能使畜禽(如奶牛)通过采食加有黄芪多糖添加剂的青贮饲料，提高其生产性能，将黄芪多糖作为青贮饲料添加剂，按照青贮原料质量的O. 001%-0. 005%的添加量，加入青贮原料中，制备的青贮饲料贮藏期可达90-180天。预防和防治畜禽常见疾病的发生，以减少抗生素的大量使用，生产相对绿色和有机的畜禽产品。
具体实施例方式以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。
黄芪多糖购自上海研拓生物科技有限公司。实施例1 :黄芪多糖添加O. 001-0. 004%制备紫花苜蓿青贮饲料一、豆科牧草青贮饲料添加剂的制备准确称取黄芪多糖IOOmg (干重)，加入IOOg /K，使其充分溶解，即得到100%黄芪多糖原液(质量浓度为lmg/mL)，放置4°C冰箱内保存，该100%黄芪多糖原液即为青贮饲料添加剂。二、黄芪多糖作为豆科牧草青贮饲料添加剂制备紫花苜蓿青贮饲料及其效果检测1、制备阿尔冈金紫花苜蓿青贮饲料将步骤一的青贮饲料添加剂按照以黄芪多糖是阿尔R金紫花苜蓿鲜草的O. 001%、
O.002%和O. 004%的比例添加到阿尔R金中进行青贮，制备阿尔R金紫花苜蓿青贮饲料，具体方法如下取在结荚前期刈割的阿尔网金紫花苜蓿(Algongum alfalfa)鲜草(含水量为70%)，然后在切碎机上把草切成2-5cm长度，得到青贮原料。将该青贮原料均分为四组，分别为黄芪多糖I (黄芪多糖O. 001%)、黄芪多糖II (黄芪多糖O. 002%)、黄芪多糖IIK黄芪多糖O. 004%)和对照组。上述四组的青贮饲料添加剂添加量如下黄芪多糖I按照IOkg鲜草(含水量70%)中添加O.1g干重计黄芪多糖标准添加步骤一的青贮饲料添加剂；黄芪多糖II按照IOkg鲜草(含水量70%)中添加O. 2g干重计黄芪多糖标准添加步骤一的青贮饲料添加剂；黄芪多糖III按照IOkg鲜草(含水量70%)中添加O. 4g干重计黄芪多糖标准添加步骤一的青贮饲料添加剂；对照不添加任何物质。然后按照上面所述的添加量制得的水溶液喷洒到6. 6kg阿尔R金鲜草(含水量为70%)中，再将鲜草混匀放到130cmX22cm聚乙烯青贮袋中，用SINBO真空封口机封口，在室温条件下(25-38°C )进行青贮发酵。实验重复三次，每次实验上述三组每组设21袋。放在室温条件下，然后在青贮1、3、5、7、10、15、30、45天以及开封(青贮45天后开封)后1、3、5、7天取样，进行实验室分析，主要分析粗蛋白、氨态氮、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、PH值、乳酸和乳酸菌数量。其中各种分析方法如下I)粗蛋白(CP)的测定采用凯式定氮法称取O. 5000g干燥的样品放入消煮管中，加入硫酸钾和硫酸铜混合物作为催化齐U，硫酸钾和硫酸铜的混合比例为9 :1，加入IOml浓硫酸于410°C下消煮I小时10分钟。消化至颜色由绿色变为清亮蓝色。配制40%Na0H，1%的硼酸吸收液和O.1N盐酸溶液，对O.1N盐酸溶液进行滴定校正。用全自动定氮仪(F0SS公司全自动凯氏定氮仪)进行测定。实验步骤如下1、样品称重称取O. 5g左右干燥样品，记下重量W，然后全部移入消化管；2、消化向消化管中加入IOml浓硫酸和5g左右的CuSO4. 5H20和K2SO4混合催化剂(其质量比为CuSO4. 5H20 =K2SO4=1:9)，将其放入消化炉中410°C消化I个小时10分钟直到样品呈淡绿色透明状，冷却至清亮蓝色；3、用全自动定氮仪进行测定。2) pH值的测定开启青贮后称取20g样品，加入180ml蒸馏水，搅拌均匀后用组织捣碎机(JLL350-B型多功能搅拌机，顺德市科顺塑料电器实业有限公司)搅拌lmin。四层纱布和定性滤纸过滤，用PH测定仪(雷磁pHS-3C精密计，上海精密科学仪器有限公司)测定滤液的pH值。
3)氨态氮/总氮比值的测定采用苯酚-次氯酸钠比色法苯酚试剂将O. 15g亚硝基铁氰化钠(Na2Fe(CN)5 · NO · 2Η20，297· 95，化学纯)溶解在1. 5L蒸馏水中，再加入33ml (90%w/v)苯酚溶液或29. 7g结晶苯酚(C6H50 , 94. 11，PhenolA. R.，分析纯)，定容到3L后贮存在棕色的玻璃试剂瓶中。次氯酸钠试剂将15g NaOH溶解在2L蒸馏水中，再加入113. 6gNa2HP04 · 7H20(d1-Sodium hydrogen phosphate, anhydrous, 141. 96+126,分析纯)，加热并不断揽拌至完全溶解。冷却后加入150ml5. 25%的次氯酸钠或44.1ml含8. 5%活性氯的次氯酸钠溶液(NaClO, Sodium hypochlorite solution, 74. 44,分析纯)并混勻，定容到3L,最后将经滤纸过滤的滤液贮藏于棕色试剂瓶中待用。标准铵溶液称取O. 6607g 经 100°C 24h 烘干的(NH4) 2S04 (Ammonuim sulfate,132. 14，化学纯)溶于蒸馏水中，并定容至100ml，配制成lOOmmol/L的铵贮备液。将上述贮备液稀释配制成1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0mmol/L五种不同浓度梯度的标准液。 操作步骤1:向每支试管中加入50 μ I稀释适当倍数的样本液或标准液，空白为50 μ I蒸馏水；2 :向每支试管中加入2. 5ml的苯酹试剂,摇勻；3 :再向每支试管中加入2ml次氯酸钠试剂，并混匀；4 :将混合液在95 °C水浴中加热显色反应5分钟；5 :冷却后，630nm波长下701分光光度计比色,记录吸光度值并计算。4)乳酸(LA)的测定采用岛津GC-14型高效液相色谱测定乳酸。色谱柱Shodex Rspak KC-811S-DVBgel Column30X8mm ;检测器 dFO-MlOAVp ;流动相3mmol/L 高氯酸；流速lml/min ;柱温500C ;检测波长210nm ;进样量5μ I。6)中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的测定NDF药品的配制称取1.86g乙二胺四乙酸二钠(EDTA，372. 24)，0. 68g硼酸钠(Na2B4O7 · IOH2O,化学纯 381. 37)，3g 十二烷基硫酸钠(C12H25NaO4S,化学纯 288. 38)，Iml 乙二醇乙醚(C4HltlO2,化学纯90. 12)。溶入IOOmL蒸馏水中。ADF药品的配制称取20g十六烷三甲基溴化氨(CTAB，化学纯364. 47)溶于1L1. 00N的硫酸溶液中(0. 5mol/L浓硫酸取27. 17ml浓硫酸加入蒸馏水定容至1L)。中性洗涤纤维(NDF):采用ANK0M2000i纤维仪(美国ANKOM公司)进行。具体步骤1.样品在60°C烘箱中干燥48-72h直到恒重并粉碎，准确称取粉碎样品(通过40目标准铜筛)0.5g左右，装入已烘干称重的纤维袋中，封口并置于纤维仪。2.加入室温的中性洗涤剂IOOml和数滴十氢化萘(消泡剂)以及0.5g无水亚硫酸钠。3.纤维仪测定。酸性洗涤纤维(ADF):采用ANK0M2000i纤维仪进行。具体步骤1.样品在60°C烘箱中干燥48-72h直到恒重并粉碎，准确称取粉碎样品(通过40目标准铜筛)0. 5g左右，装入已烘干称重的纤维袋中，封口并置于纤维仪。2.加入室温的酸性洗涤剂IOOml和数滴十氢化萘(消泡剂)以及0.5g无水亚硫酸钠。3.纤维仪测定。7)乳酸菌数量采用平皿计数方法测定。步骤1.采样以无菌操作称取样品10g，放入含有90ml灭菌稀释液的玻璃塞三角瓶中，置振荡器上，振荡30min，即为1:10的稀释液。2.用灭菌吸管吸取稀释液lml，注入含有9ml灭菌生理盐水的带塞试管中，置微型混合器上震荡均匀，使微生物分散开，此液为1:100稀释液。3.按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支Iml灭菌吸管，根据对样品情况的估计，选择三个合适稀释度，分别在作10倍稀释的同时，吸取Iml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿，然后将凉至45°C左右的MRS培养基注入平皿中，充分混合，放入37°C的培养箱内培养3天后开始观察计数。4.计算通常选择菌落数的30-100个之间的平皿计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克样品中所含乳酸菌数。数据用SPSS20. O软件及综合评判法进行分析，综合评价青贮饲料添加剂对青贮发酵过程中的粗蛋白 、氨态氮、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、PH值、乳酸含量和乳酸菌数量的影响以及有氧稳定性。实验结果如表1、表2和表3所示表I青贮饲料添加剂对阿尔R金青贮发酵过程的影响
权利要求
1.黄芪多糖在制备青贮饲料中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述黄芪多糖在青饲料中添加的比例为O.001-0. 005%,添加有黄芪多糖的青饲料经过发酵即为青贮饲料。
3.应用黄芪多糖制备青贮饲料的方法，其特征在于，包括步骤1)将青饲料切碎，然后喷洒黄芪多糖的水溶液；2)将步骤I)所得青饲料装入青贮袋中，室温发酵。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述青饲料的含水量为60-75%。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述青饲料是豆科的牧草。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述青饲料为紫花苜蓿、黄花苜蓿和金花菜中的一种或多种。
7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述黄芪多糖添加到青饲料中的质量比例为 O.001-0. 005%。
8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述黄芪多糖的水溶液是黄芪多糖与水质量比例为O. 1:50-200的水溶液。
9.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述青饲料发酵的时间为30-60天；所述发酵为室温密闭发酵。
10.权利要求3-9任一所述的方法制备得到的青贮饲料。
全文摘要
本发明提供黄芪多糖在制备青贮饲料中的应用。所述黄芪多糖在青饲料中添加的比例为0.001-0.005%,添加有黄芪多糖的青饲料经过发酵即为青贮饲料。本发明还提出应用黄芪多糖制备青贮饲料的方法，包括步骤1)将青饲料切碎，然后喷洒黄芪多糖的水溶液；2)将步骤1)所得青饲料装入青贮袋中，室温发酵。本发明提出将黄芪多糖作为豆科牧草青贮饲料添加剂与豆科牧草青贮原料共同发酵，能够促进乳酸菌生长繁殖和提高青贮饲料的发酵品质，所制备的青贮饲料，与不加黄芪多糖的对照相比，其粗蛋白含量升高，氨态氮与总氮的比值降低，中性洗涤纤维含量降低，酸性洗涤纤维含量降低，乳酸含量高于对照，乳酸菌含量高于对照。
文档编号A23K1/16GK103005161SQ20121057688
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者杨富裕, 邓海军, 张蕴薇, 玉柱, 陆银, 徐然, 周静, 梁超 申请人:中国农业大学