专利名称：一种角膜中期保存液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种角膜中期保存液及其制备方法。
背景技术：
角膜保存是眼库的重要技术之一，分为活性和非活性保存两种，活性保存根据角膜内皮细胞活性的保存时间分为短期、中期、长期3种保存。短期保存是将全眼球消毒无菌处理后湿房4°C保存24小时。中期保存一般采用角膜片组织营养液4°C保存，目前世界范围内最常使用Dexsol、0ptisol和Optisol-GS,保存时间可达14天。长期保存方法有器官培养法和超低温冷冻保存法。1965年，Capella和Kaufman用超低温保存法有效地延长了角膜保存的时间最长至I年，但由于设备复杂，操作麻烦，故难以推广。器官培养法保存角膜用于临床角膜移植一般在保存4周内、最长保存至7周。但由于方法复杂，所需设备昂贵，一般眼库和基层医院难于开展此项工作。鉴于短期保存的保存时间过于短暂以及长期保存法的不易推广应用，角膜保存液研制的热点集中于中期保存液。目前国际上最常用的Dexsol和Optisol虽然在保持角膜内皮细胞活性方面功能显著，但价格昂贵，不适合我国国情。根据我国角膜供体材料来源严重匮乏，又缺少足够数量的正规眼库，因此，研制理想的新型角膜中期保存液以最大限度的利用有限的供体材料是亟待解决的研究课题。
发明内容
本发明的目的是提供一种角膜中期保存液及其制备方法。本发明所提供的一种角膜中期保存液，以IOOOmL计，所述中期保存液的组成如下:低限量基础培养基4 5克，组织培养基199 4 5克，低分子右旋糖酐10 20克，硫酸软骨素20 30克，丙酮酸钠100 150毫克，HEPES 3 4克，小牛血清20 40晕升，非必需氨基酸10 20晕升，硫酸庆大霉素I 2晕升,碱性成纤维细胞生长因子100 200微升,和余量的双蒸水。以IOOOmL计，所述中期保存液的组成具体可为:
低限量基础培养基4克
组织培养基 1994克低分子右旋糖酐10克
硫酸软骨素20克
丙酮酸钠100毫克
Hepes3 克
小牛血清20毫升
非必需氨基酸10毫升
硫酸庆大霉素I毫升
碱性成纤维细胞生长因子100微升
双蒸水约950毫升；或者
低限量基础培养基5克
组织培养基1995克
低分子右旋糖酐20克
硫酸软骨素30克
丙酮酸钠150毫克
HEPES4克
小牛血清40毫升
非必需氨基酸20毫升
硫酸庆大霉素2毫升
碱性成纤维细胞生长因子200微升
双蒸水约950毫升。上述的角膜中期保存液中，所述非必需氨基酸具体可为美国生命技术公司提供的
商品目录号为11140-050的氨基酸，其组成和配方如表I中所示。表I非必需氨基酸的组成和配方
权利要求
1.一种角膜中期保存液，其特征在于:以IOOOmL计，所述中期保存液的组成如下: 低限量基础培养基4 5克，组织培养基199 4 5克， 低分子右旋糖酐10 20克，硫酸软骨素20 30克， 丙酮酸钠100 150毫克，HEPES 3 4克， 小牛血清20 40晕升，非必需氨基酸10 20晕升， 硫酸庆大霉素I 2晕升,碱性成纤维细胞生长因子100 200微升,和余量的双蒸水。
2.根据权利要求1所述的中期保存液，其特征在于:所述中期保存液的PH值为7.2 7.6，渗透压为 330 390m0sm/Kg。
3.权利要求1或2所述中期保存液的制备方法，包括如下步骤: (1)将所述低限量基础培养基、组织培养基199、低分子右旋糖酐、硫酸软骨素、丙酮酸钠和HEPES溶于所述双蒸水中，经除菌后得到基础液； (2)将所述小牛血清、非必需氨基酸、硫酸庆大霉素和碱性成纤维细胞生长因子加入至所述基础液中得到全液 ，即为所述角膜中期保存液。
全文摘要
本发明公开了一种角膜中期保存液及其制备方法。以1000mL计，所述中期保存液的组成如下低限量基础培养基4～5克，组织培养基1994～5克，低分子右旋糖酐10～20克，硫酸软骨素20～30克，丙酮酸钠100～150毫克，HEPES3～4克，小牛血清20～40毫升，非必需氨基酸10～20毫升，硫酸庆大霉素1～2毫升，碱性成纤维细胞生长因子100～200微升，和余量的双蒸水。本发明具有促进角膜内皮细胞损伤的修复，细胞形态的重建，调节细胞膜表面各种整合素的表达，促进细胞的黏附生长，刺激内皮细胞的增殖等作用，对中期保存角膜有减少细胞凋亡和维持细胞形态及活性的作用。
文档编号A01N1/02GK103190392SQ20131010408
公开日2013年7月10日 申请日期2013年3月28日 优先权日2013年3月28日
发明者靳瑛, 洪晶, 马志中 申请人:北京大学第三医院