一种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法
【专利摘要】一种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，主要解决常规育种方法存在的周期长、成本高及通过转基因的方式获得转基因植株困难等技术问题。本发明是将碱蓬内生真菌用PDA液体培养基培养10～14天，采用碱蓬内生真菌菌悬液浸染水稻根系并且对萌发3～5天的水稻幼苗进行处理，在培养水稻的Hoagland完全营养液中加入3%～15%的菌悬液，然后将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗光照培养14天，对地上生物量干重、叶绿素含量和净光合速率进行测定。本发明操作简单、安全、经济，对土壤环境不引入新污染，不仅能有效提高水稻生物量，还能有效利用盐碱化土地资源。
【专利说明】—种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，特别涉及利用内生真菌菌液通过苗期浸染根系的方式浸染水稻，提高水稻抵抗盐碱胁迫的能力，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]水稻所结子实即为稻谷，去壳后称为大米。世界近一半人口，包括几乎整个东亚和东南亚的人口都以稻米为主食。世界上所产稻米的95%为人类所食用。
[0003]水稻由淡水沼泽植物演化而来，属于甜土植物，对盐碱胁迫表现中度敏感。苗期是水稻对盐碱胁迫最敏感的生长时期。在盐碱化耕地上种植水稻是治碱改土、争取增产的有效措施。因此，提高水稻品种本身耐盐碱性是开发利用盐碱土地资源的有效途径之一。
[0004]目前一方面通过常规育种提高水稻耐盐碱性，其缺点在于周期长、耗费精力、物力；另一方面通过转基因的方式提高水稻耐盐碱性，其缺点在于获得转基因植株困难，同时转基因植物的安全性还存在广泛争议。
【发明内容】
[0005]本发明是以解决上述问题为目的，主要解决常规育种方法存在的周期长、成本高及通过转基因的方式获得转基因植株困难等技术问题，而提供一种利用碱蓬内生真菌菌液处理苗期水稻根系的新方法，用本发明处理水稻，可显著提高水稻的抗盐碱性。本发明操作简单、安全、经济，对土壤环境不引入新污染，不仅能有效提高水稻生物量，还能有效利用盐碱化土地资源。
[0006]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是通过下述步骤实现的:
[0007]I)从碱蓬中分离获得的内生真菌用PDA液体培养基22~26°C，150~180rpm培养10~14天；
[0008]2)采用碱蓬内生真菌菌悬液浸染水稻根系；
[0009]3)对萌发3~5天的水稻幼苗进行处理；
[0010]4)在培养水 稻的Hoagland完全营养液中加入3%~15%的菌悬液；
[0011]5)将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗光照培养14天，对地上生物量干重、叶绿素含量和净光合速率进行测定。
[0012]本发明的特点在于:工序简单，易于操作，只需将内生真菌的菌悬液加到Hoagland完全营养液中即可；使用的内生真菌是从植物碱蓬茎中分离获得的，与植物互惠共生，可以提高植物抗性，不会产生二次污染；所用化学药品是市售的而且使用浓度很低；本发明成本低、工艺简单，便于大面积处理；效果明显，经内生真菌菌悬液处理的水稻地上生物量比未经处理增加。
【具体实施方式】[0013]实施例1
[0014]一种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，包括以下具体步骤:
[0015]I)碱蓬内生真菌用PDA液体培养基24°C，180rpm培养12天；
[0016]2)水稻种子于28°C恒温浸种24h后，于30°C催芽24h。取发芽的水稻种子用Hoagland完全营养液进行培养。于人工气候箱(培养条件为昼夜温度28°C /26°C;光照16h ；80%相对湿度；光强30001ux)中培养3~5天；
[0017]3)将上述菌悬液加入培养水稻的Hoagland完全营养液中浸染水稻根系,菌悬液的终浓度为5% ；
[0018]将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗光照培养14天，无菌悬液处理水稻地上生物量为0.114g/10株、叶绿素含量为2.629mg/g、净光合速率为9.842 μ mo I πιΛ—1，5%菌悬液处理水稻地上生物量为0.127g/10株、叶绿素含量为3.745mg/g、净光合速率为
10.058 μ mo I JiT2S'经5%内生真菌菌悬液处理的水稻，地上生物量干重提高11.40%、叶绿素含量提高42.45%、净光合速率提高2.19%。
[0019]实施例2
[0020]一种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，包括以下具体步骤:
[0021]I)碱蓬内生真菌用PDA液体培养基24°C，180rpm培养12天；
[0022]2)水稻种子于28°C恒温浸种24h后，于30°C催芽24h。取发芽的水稻种子用Hoagland完全营养液 进行培养。于人工气候箱(培养条件为昼夜温度28°C /26°C;光照16h ；80%相对湿度；光强30001ux)中培养3~5天；
[0023]3)将上述菌悬液加入培养水稻的Hoagland完全营养液中浸染水稻根系,菌悬液的终浓度为5% ；
[0024]将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗同步进行20mM碳酸钠胁迫处理14天。在20mM碳酸钠胁迫下，无菌悬液处理水稻地上生物量干重为0.074g/10株、叶绿素含量为0.622mg/g、净光合速率为1.151 μ mo I m^2s^,5%菌悬液处理水稻地上生物量干重为0.104g/10株、叶绿素含量为1.333mg/g、净光合速率为6.519 μ mo I mY1 ;5%菌悬液处理水稻地上生物量干重提高40.54%、叶绿素含量提高114.31%、净光合速率466.38%。
[0025]实施例3
[0026]一种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，包括以下具体步骤:
[0027]I)碱蓬内生真菌用PDA液体培养基24°C，180rpm培养12天；
[0028]2)水稻种子于28°C恒温浸种24h后，于30°C催芽24h。取发芽的水稻种子用Hoagland完全营养液进行培养。于人工气候箱(培养条件为昼夜温度28°C /26°C;光照16h ；80%相对湿度；光强30001ux)中培养3~5天；
[0029]3)将上述菌悬液加入培养水稻的Hoagland完全营养液中浸染水稻根系，菌悬液的终浓度为10% ；
[0030]将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗同步进行IOmM碳酸钠胁迫处理14天。在IOmM碳酸钠胁迫下，无菌悬液处理水稻地上生物量为0.093g/10株、叶绿素含量为
0.951mg/g、净光合速率为4.152 μ moln^s—1，10%菌悬液处理水稻地上生物量为0.113g/10株、叶绿素含量为1.675mg/g、净光合速率为7.255 μ mo I n^s—1 ;经10%菌悬液处理水稻地上生物量干重提高21.51%、叶绿素含量提高76.13%、净光合速率74.74%。
【权利要求】
1.一种利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，该方法利用内生真菌菌液通过苗期浸染根系的方式浸染水稻，提高水稻抵抗盐碱胁迫的能力，实现步骤如下: a、从碱蓬中分离获得的内生真菌用PDA液体培养基22-26°C，150-180rpm培养10-14天； b、采用步骤a所述的内生真菌菌悬液浸染水稻根系； C、对萌发3-5天的水稻幼苗进行处理； d、在培养水稻的Hoagland完全营养液中加入3%-15%的菌悬液； e、将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗光照培养14天，对地上生物量干重、叶绿素含量和净光合速率进行测定。
2.如权利要求1所述的利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，其具体步骤: a、碱蓬内生真菌用PDA液体培养基24°C，180rpm培养12天； b、水稻种子于28°C恒温浸种24h后，于30°C催芽24h，取发芽的水稻种子用Hoagland完全营养液进行培养，于人工气候箱中培养，条件为昼夜温度28°C /26°C ;光照16h ;80%相对湿度；光强3000lux，培养3~5天； C、将上述菌悬液加入培养水稻的Hoagland完全营养液中浸染水稻根系,菌悬液的终浓度为5% ； 将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗光照培养14天，无菌悬液处理水稻地上生物量为0.114g/10株、叶绿素含量为2.629mg/g、净光合速率为9.842μπmolm-2s-1，.5%菌悬液处理水稻地上生物量为0.127g/10株、叶绿素含量为3.745mg/g、净光合速率为10.058 μ mol m-2s-1 ;经5%内生真菌菌悬液处理的水稻，地上生物量干重提高11.40%、叶绿素含量提高42.45%、净光合速率提高2.19%。
3.如权利要求1所述的利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，其具体步骤: a、碱蓬内生真菌用PDA液体培养基24°C，180rpm培养12天； b、水稻种子于28°C恒温浸种24h后，于30°C催芽24h，取发芽的水稻种子用Hoagland完全营养液进行培养，于人工气候箱中培养，条件为昼夜温度28°C /26°C ;光照16h ;80%相对湿度；光强3000lux，培养3~5天； C、将上述菌悬液加入培养水稻的Hoagland完全营养液中浸染水稻根系,菌悬液的终浓度为5% ； 将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗同步进行20mM碳酸钠胁迫处理14天，在20mM碳酸钠胁迫下，无菌悬液处理水稻地上生物量干重为0.074g/10株、叶绿素含量为0.622mg/g、净光合速率为1.151 μ molm-2-1，5%菌悬液处理水稻地上生物量干重为.0.104g/10株、叶绿素含量为1.333mg/g、净光合速率为6.519 μ moIm^2s^1 ；5%菌悬液处理水稻地上生物量干重提高40.54%、叶绿素含量提高114.31%、净光合速率466.38%。
4.如权利要求1所述的利用内生真菌提高水稻抗盐碱能力的方法，其具体步骤: a、碱蓬内生真菌用PDA液体培养基24°C，180rpm培养12天； b、水稻种子于28°C恒温浸种24h后，于30°C催芽24h，取发芽的水稻种子用Hoagland完全营养液进行培养，于人工气候箱中培养，条件为昼夜温度28°C /26°C ;光照16h ;80%相对湿度；光强30001ux，培养3~5天； C、将上述菌悬液加入培养水稻的Hoagland完全营养液中浸染水稻根系,菌悬液的终浓度为10% ； 将上述菌悬液处理和没有进行处理的水稻幼苗同步进行IOmM碳酸钠胁迫处理14天，在IOmM碳酸钠胁迫下，无菌悬液处理水稻地上生物量为0.093g/10株、叶绿素含量为.0.951mg/g、净光合速率为4.152 μ mo I IrT2S' 10%菌悬液处理水稻地上生物量为0.113g/10株、叶绿素含量为1.675mg/g、净光合速率为7.255 μ mo I n^s—1 ;经10%菌悬液处理水稻地上生物量干重提高21.5.1%、叶绿素含量提高76.13%、净光合速率74.74%。
【文档编号】A01G16/00GK103461044SQ201310413224
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】李雪梅, 卜宁, 李玥莹, 马莲菊 申请人:沈阳师范大学