一种饲料添加剂及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种饲料添加剂，属于饲料添加剂领域,所述一种饲料添加剂，按照重量份数组成：杜仲粉3-5，茯苓粉2-6，枸杞酶解粉2-5，丁香4-8，山楂5-8，黑曲霉培养物10-15，枯草芽孢杆菌菌剂8-15；黑曲霉菌株为CGMCC?No.7927，本发明所述饲料添加剂的制备方法将杜仲粉、茯苓粉、枸杞酶解粉、丁香、山楂、黑曲霉培养物、枯草芽孢杆菌菌剂、按配比后混合后制粒即可，本发明提高了饲料的利用率，有效减少饲养成本和风险，增加饲养效益。
【专利说明】一种饲料添加剂及其制备
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种饲料添加剂，属于饲料添加剂领域。
【背景技术】:
[0002]目前养殖业普通存在饲料利用率不高，营养成分消化不完全，保管不善导致饲料吸湿霉变或生虫等问题，这些问题的存在不仅大大增加了饲养成本，而且也导致了资源浪费。
[0003]解决上述问题，控制养殖成本，降低养殖风险是养殖业快速发展的一大瓶颈。使用化学合成添加剂会造成动物耐用性、残留等问题，危害人类健康，同时还有大量的排泄物，如氨气、硫化氢等有害气体，污染环境。中草药饲料添加剂作为新兴研究的热点，具有天然、营养、副作用小等优点。研究表明，许多中草药本身就具有良好的体外抑菌能力，中草药饲料抗菌保健剂无残留、无耐药性，其作用机理不仅仅在于对病原微生物的抑杀作用，更重要的是对机体抗病修复能力的调整，即提高机体的抗应激能力、提高机体免疫功能和抗病防御机能，从而达到提闻肉制品质量和提闻动物词料利用效率的目的。
[0004]中草药是具有特定功效的一些植物，这些植物各有功效，例如部分植物的效用如下:枸杞子富含枸杞蛋白多糖、维生素C、磷、铁等多种营养成分，有提高机体免疫力的作用，可以补气强精，滋补肝肾、抗衰老、止消渴、暖身体、抗肿瘤的功效。在雏鸡饲料添加
0.5—1%枸杞粉，成活率提高11%。同时，还能改善鸡体免疫功能，增强抗病能力，降低鸡死亡率，促使鸡健康生长。丁香:花蕾含挥发油，黄酮衍生物等具有生理活性成分，具有抗病原微生物、对消化系统、健胃、驱虫等功能。研究者认为在日粮中添加100?200mg/kg 丁香可以改善肉鸡的饲料转化率。山楂:它能开胃消食，助消化，能增强机体的免疫力，有防衰老、抗癌的作用，另外山楂中有平喘化痰、抑制细菌、治疗腹痛腹泻的成分。山楂能增加胃中消化酶的分泌，促进消化，并含有脂肪酶，能加强胃脂肪酶、蛋白酶的活性。
[0005]有效利用中草药成分开发改饲料添加剂产品可以满足人们追求高品质猪肉和提闻词料利用率的有效手段。
【发明内容】
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[0006]本发明的目的在于提供一种饲料添加剂。
[0007]一种饲料添加剂。按照重量份数组成如下:杜仲粉3-5，茯苓粉2-6，枸杞酶解粉2-5，丁香4-8，山楂5-8，黑曲霉培养物10-15，枯草芽孢杆菌菌剂8_15 ；
[0008]枯草芽孢杆菌菌剂制备方法，将培养获得发酵液经分离浓缩、冷冻干燥工艺获得枯草芽孢杆菌菌剂。上述方法采用本领域现有技术制备。
[0009]本发明所述饲料添加剂的制备方法如下:
[0010]将杜仲粉、茯苓粉、枸杞酶解粉、丁香、山楂、黑曲霉培养物、枯草芽孢杆菌菌剂、按配比后混合后制粒即可。在每吨猪饲料中的添加量为IOOO-1SOOg
[0011]有益效果:[0012]以上中草药的配伍使用，可以制备得到有效改善猪肉品质和提高饲料利用率的饲料添加剂，该添加剂由天然中草药组成，一方面通过改善肉猪的代谢功能，增加猪肉中蛋白质的沉积，另一方面通过增强肉猪的机体免疫机能，降低抗生素的使用，从而改善猪肉品质；同时该饲料添加剂还能调节肠道健康，促进猪对饲料的吸收利用，提高饲料的利用率，有效减少饲养成本和风险，增加饲养效益。
【具体实施方式】
[0013]下面通过具体的实施方案叙述本发明产品组成及工艺。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中分离提取条件进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
[0014]实施例1
[0015]枯草芽孢杆菌种子液体制备:采用斜面菌种逐级扩培获得枯草芽孢杆菌种子液；
[0016](I) 一级种子培养:将枯草芽孢杆菌斜面菌种接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度30°C，培养时间24小时；
[0017](2)二级种子培养:将一级种子按照10%的接种量接入500晕升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；
[0018](3)三级种子培养:将二级种子以10%接种量接入5000晕升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度30°C，培养时间24小时；
[0019](4) 一级种子罐培养:将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度28°C，搅拌速度100转/分，通风量(V/V) 1:0.5,罐压
0.05Mpa,培养时间24小时；
[0020]菌种分别采用CICC10081 或 CICC10063。
[0021]CICC10081培养基组成:蛋白胨5克；牛肉膏3克；豆柏10g，氯化钠5克；蒸馏水1000毫升；ρΗ7.0。CICC10081为产中性蛋白酶菌株。
[0022]CICC10063培养基组成:NaC15.0g，牛肉膏10.0g，豆柏20g，蛋白胨10.0g，蒸馏水
1.0L, pH7.2o CICC10063为产蛋白酶菌株。
[0023]黑曲霉培养物的培养制备:
[0024]将种子液以10% (v/v)接种量接入装有7.5L发酵液的IOL发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30±0.1°C，搅拌速度300rpm，通风量(ν/ν)1:0.8-1.2，培养时间96h，溶解氧20-30%。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物即得到黑曲霉培养物。
[0025]取发酵上清液(粗酶液)进行酶活力检测经测定，菌株Aspergillus nigerL1-2013-03的外切β -葡聚糖酶、内切β -葡聚糖酶、β -葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到 620U/mL、1289U/mL、456U/mL 和 732U/mL，
[0026]本发明提供的黑曲霉Aspergillus niger L1-2013-03是由天津工业大学实验室保藏的一株产纤维素酶的黑曲霉Aspergillus niger L1-2010经亚硝基胍多轮诱变筛选，然后对优良菌株经发酵性能测试筛选得到产高活力纤维素酶的黑曲霉菌株Aspergillusniger L1-2013_03o
[0027]本发明提供的产高活力纤维素酶的菌株具体为黑曲霉Aspergillus nigerL1-2013-03。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为:中国北京市朝阳区北辰西路I号院3号，邮编100101)，保藏号为 CGMCC N0.7927。
[0028]本发明黑曲霉菌株Aspergillus niger L1-2013-03 (CGMCCN0.7927)具有以下微生物学特征:
[0029]1、形态学特征:
[0030]黑曲霉菌株CGMCC N0.7927，生物学形态为包括分生孢子、胞梗、顶囊、产胞结构等几部分。分生孢子头球形至辐射形，直径150-450 μ m，分生孢子梗发生于基质。胞梗茎1000-3000 (长度)X 12-20 (直径)μ m，黄色或黄褐色，壁平滑；顶囊球形或近似球形，直径45-75 μ m,表面全面可育；产胞结构双层，梗基10-20 (长度)X 4.5-7.0 (直径)μ m,瓶梗6-10 (长度)X 2.5-3.5 (直径)μ m，分生孢子球形或近球形，直径3-4.5 μ m,褐色，壁粗糙。
[0031]2、培养学特征:
[0032]菌株在麦芽汁琼脂培养基上生长迅速，28 V 4天孢子可铺满斜面；质地丝绒状或稍带絮状；分生孢子结构大量，褐黑色，无渗出液；菌落反面略带黄色。
[0033]3、生理生化特征:
[0034]黑曲霉菌株CGMCC N0.7927可在玉米秸杆、稻草、木屑、马铃薯、玉米粉、可溶性淀粉、糖蜜等碳源上生长，最适pH范围5-6，最适生长温度范围28-33°C，最适产酶温度范围28-30。。。
[0035]本发明黑曲霉菌株CGMCC N0.7927的筛选技术路线为:出发菌株一斜面培养一孢子悬液的制备一诱变处理一平板分离一初筛一复筛一遗传稳定性测定一扩大实验(发酵性能测定)。
[0036]按诱变筛选方案，对突变株逐级筛选淘汰，最后对优良菌株经发酵性能测试筛选，得到一株高产酶性能菌株黑曲霉菌AspergiIIus niger L1-2013-03,发酵96小时后纤维素酶的外切β -葡聚糖酶、内切β -葡聚糖酶、β -葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U/mL、1289U/mL、456U/mL 和 732U/mL。
[0037]28°C发酵4天直径75mm，发酵液纤维素酶的的外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶、β -葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U/mL、1289U/mL、456U/mL和732U/mL，分别比出发菌株提高了 9.21倍、7.43倍、8.15倍和10.31倍。
[0038]产高活力纤维素酶菌株的筛选方法，包括以下步骤:
[0039]I)斜面培养:将原始黑曲霉菌株Aspergillus niger L1-2010划线接种斜面培养基，30°C培养2?3d，直至菌丝体成熟、产大量黑色孢子。所述斜面培养基组成如下:12°Brix 麦芽汁 IOOOmL, pH 值自然，121°C灭菌 20min ；
[0040]2)孢子悬液制备(以下步骤均在无菌条件下操作):向试管斜面加入15mL无菌水，把孢子刮下，用滤纸过滤，将滤过液倒入已灭菌、并加有5-10粒无菌玻璃珠的150mL三角瓶中，将三角瓶放入摇床振荡10-15min，使孢子分散。
[0041 ] 3)亚硝基胍(NTG)诱变
[0042]A.用无菌水将孢子悬浮液调节为稀释成IO6-1O7个/mL。[0043]B.取IOmL菌悬液转移至IOOmL三角瓶中，加入IOmg的NTG，配制成终浓度为IOmg/mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。
[0044]C.在30°C下200rpm振荡反应30min, 5000rpm离心IOmin收集菌体,用无菌生理
盐水洗涤数次，中止反应。
[0045]D.适当稀释将孢子浓度调节为IO3个/mL，取最后稀释度的菌液0.2mL，稀释涂布于纤维素-刚果红平板筛选培养基上。在30°C培养2~3天后挑取透明圈/菌落直径较大的菌株200支。(所述纤维素-刚果红平板筛选培养基组成如下:纤维素粉10g、刚果红
0.2g、硫酸铵5g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、明胶2g、琼脂20g、自来水定容1000mL, pH 值 5-6，121°C灭菌 20min)。
[0046]E.复筛:将获得的200株菌分别用无菌牙签接种于斜面培养基，30°C培养至孢子铺满斜面。分别将孢子以无菌水洗下接种于装有50mL复筛培养基的250mL三角瓶中进行发酵，接种量10%( v/v)，30°C、100r/min培养96h，分别测定各菌株的纤维素酶活性。(所述复筛培养基组成如下:纤维素粉50g、硫酸铵5g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、自来水定容1000mL，pH值5-6，121°C灭菌20min)。选取纤维素酶酶活力最高的菌株进行放大实验。
[0047]4)遗传稳定性试验
[0048]将L1-2013-03菌株在斜面上连续十次传代，并用摇瓶复筛的方法检测每次传代后的发酵情况。实验发现，在斜面上连续十次传代，该菌种性状没有明显变化，各项性能指标都正常，说明该菌种的遗传稳定性较强。
[0049]5)放大试验
[0050]①种子培养:将纤维素酶酶活力最高的菌株Aspergillus niger L1-2013-03接入500mL三角瓶中，种子培养基装量`100毫升，30°C、150rpm摇床培养72_96h。
[0051]③种子罐培养:将种子液以10% (v/v)接种量接入装有7.5L发酵液的IOL发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30±0.1°C，搅拌速度300rpm，通风量(v/v)1:0.8-1.2，培养时间96h，溶解氧20-30%。所述发酵培养基组成为:纤维素粉100g、硫酸铵5g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、自来水定容lOOOmL，pH值5-6，121°C灭菌20mino
[0052]发酵结束后，取发酵上清液(粗酶液)进行酶活力检测经测定，菌株Aspergillusniger L1-2013-03的外切β-葡聚糖酶、内切β _葡聚糖酶、β _葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到 620U/mL、1289U/mL、456U/mL 和 732U/mL,分别比出发菌株 Aspergillus nigerL1-2010 提高了 9.21 倍、7.43 倍、8.15 倍和 10.31 倍。
[0053]实施例2
[0054]一种饲料添加剂。所述饲料添加剂按照重量份数组成如下:
[0055]一种饲料添加剂。按照重量份数组成如下:杜仲粉4，茯苓粉4，枸杞酶解粉4，丁香6，山楂7，黑曲霉培养物12，枯草芽孢杆菌菌剂12 ；
[0056]黑曲霉培养物的培养制备:
[0057]将种子液以10% (v/v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30±0.1°C，搅拌速度300印!11，通风量(￥八)1:0.8-1.2，培养时间96h，溶解氧20-30%。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物即得到黑曲霉培养物。黑曲霉菌株为CGMCC N0.7927。
[0058]所述枸杞酶解粉的制备方法如下:枸杞冲洗后迅速冷冻至-10°C至_20°C ;升华干燥，真空度400-500Pa，温度-10°C至(TC，干燥到水分〈12% ;控制温度在-10°C至_2°C粉碎至粒径在1.2mm以下；添加枸杞重量2-5倍的亚硫酸钠水溶液，控制溶液的pH为3_5，添加混合物重量0.3-0.6%的复合酶，所述复合酶由纤维素酶和葡聚糖酶组成，酸性果胶酶、纤维素酶和葡聚糖酶的重量比为1: (1-1.5)，酶解温度为45-551:，酶解时间为2-311;之后将PH值调整为5.0-5.6，温度升到50-60°C，同时添加混合物重量0.2-0.6%的果胶酶和
0.2-0.5%的蛋白酶，作用时间为2.5-3h ;酶解液在5-10°C过滤；滤液喷雾干燥获得枸杞酶解粉。
[0059]实施例3基本同例2
[0060]一种饲料添加剂。按照重量份数组成如下:杜仲粉5，茯苓粉2，枸杞酶解粉5，丁香8，山楂5，黑曲霉培养物15，枯草芽孢杆菌菌剂8 ；
[0061 ] 实施例4:产品使用效果
[0062]本发明实施例2饲料添加剂使用效果试验。
[0063]试验方法:选择猪场，选择日龄、体重相近的健康母猪、仔猪和公猪各60头，均随机分成2组(试验组和对照组)，试验组添加IOOOg实施例2制得的的发明产品，对照组不添加本发明产品；连续饲喂60天；对试验猪进行日常观察和检测。
[0064]与对照组相比，使用发明饲料添加剂可获得如下效果:
[0065](I)母猪产仔数平均增加0.8头；
[0066](2)公猪精子数增加25%，提高受胎率；
[0067](3)分娩前后，母猪便秘次数减少30% ；
[0068](4)试验组比对照组的体重平均增加了 10%以上；
[0069](5)对试验猪的毛色进行感官评分，试验组评分达到8.9分，对照组为6.5分；
[0070](6)试验组料肉比对照组降低10.5%。
[0071]上述结果表明本发明产品可改善母猪、仔猪和公猪机体免疫能力，促进猪对饲料的吸收利用，提高饲料的利用率，减少抗生素用量，提高养殖质量和效益。
【权利要求】
1.一种饲料添加剂，按照重量份数组成如下:杜仲粉3-5，茯苓粉2-6，枸杞酶解粉2-5，丁香4-8，山楂5-8，黑曲霉培养物10-15，枯草芽孢杆菌菌剂8_15 ;黑曲霉菌株为CGMCCN0.7927。
2.根据权利要求1所述一种饲料添加剂，其特征在于:按照重量份数组成如下:杜仲粉4，茯苓粉4，枸杞酶解粉4，丁香6，山楂7，黑曲霉培养物12，枯草芽孢杆菌菌剂12。
3.根据权利要求1所述一种饲料添加剂，按照重量份数组成如下:杜仲粉5，茯苓粉2，枸杞酶解粉5，丁香8，山楂5，黑曲霉培养物15，枯草芽孢杆菌菌剂8。
4.根据权利要求1所述一种饲料添加剂的制备方法，其特征在于:将杜仲粉、茯苓粉、枸杞酶解粉、丁香、山楂、黑曲霉培养物、枯草芽孢杆菌菌剂、按配比混合后制粒即可。
【文档编号】A23K1/00GK103734469SQ201310741814
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月28日 优先权日:2013年12月28日
【发明者】邵素英, 孔日祥 申请人:邵素英