在蘑菇生产中控制真菌病的方法

在蘑菇生产中控制真菌病的方法
【专利摘要】本发明涉及新的抗真菌组合物以及它们在控制蘑菇中真菌病的方法中的用途。
【专利说明】在蘑菇生产中控制真菌病的方法

【技术领域】
[0001] 本发明公开了在蘑菇生产中控制真菌病的新的抗微生物组合物。

【背景技术】
[0002] 目前，商业培养的蘑菇物种超过20种，并且培养蘑菇的国家超过60个，其中中国、 美国、波兰、荷兰和法国为最高产生产国。
[0003] 在过去10至15年，蘑菇工业经历了诸多变迀。小型的低效农场已关闭，或者并入 更大的、生产率更高的、机械化增强且集中式管理的农场。在该框架内，控制真菌病的暴发 是必需的。无法在早期控制真菌病的暴发可能会导致费用耗费，因为未经处理的发病区域 产生孢子和繁殖体，它们会将疾病蔓延到农场其他区域，导致产量和生产率严重下降。
[0004] 蘑菇工业在21世纪面临着巨大挑战。首先，控制疾病暴发的可用杀真菌剂较少， 因为许多杀真菌剂不再被批准使用。其次，越来越多的消费者要求减少杀真菌剂的使用。 再次，由于长期频繁使用杀真菌剂，蘑葫病原体（例如轮枝菌（Verticillium)和木霉菌 (Trichoderma))已经对许多杀真菌剂产生抗性（参见Grogan，2008 ;Romaine等，2005 ;Gea 等，1997 ;Romaine 等，2008)。
[0005] 几十年来，多烯大环内酯抗霉菌剂那他霉素已经被用于预防真菌在诸如奶酪和香 肠的食物产品上的生长。该天然防腐剂由纳塔尔链霉菌（Streptomyces natalensis)发酵 而产生，作为食品防腐剂已广泛应用于全世界，且在食品行业具有安全使用的悠久历史。它 对所有已知的食品腐败性真菌非常有效。尽管在例如奶酪工业中那他霉素已经被应用多 年，但迄今为止尚未发现抗性真菌物种的出现。
[0006] 因此可推断，对在蘑菇生产中控制真菌病的新的更有效的抗微生物组合物（例如 抗真菌组合物）有严重需求。


【发明内容】

[0007] 本发明通过提供包含那他霉素和甲基硫菌灵（thiophanate-methyl)的新的协同 抗微生物（例如抗真菌）组合来解决所述问题。
[0008] 甲基硫菌灵（4,4 亚苯基）双（3-硫脲基甲酸二甲 醋），dimethyl4,4 ' -(〇-phenylene)bis(3_thioallophanate))是广谱、内吸性 (systemic)杀真菌剂。包含甲基硫菌灵的商业产品的例子为商标名为Topsin M?、 Cercobin M?和Banrot?的产品。所述商业产品可以并入本发明中。
[0009] 应当理解，那他霉素的衍生物也可应用于本发明中，所述那他霉素的衍生物包括 但不限于那他霉素的盐或溶剂化物或者那他霉素的经修饰形式。包含那他霉素的商业产品 的例子为商标名为Zivion?(如Zivion? M)的产品。这些产品由DSM Food Specialties(荷 兰）生产。所述商业产品可以并入本发明中。
[0010] 如本文所用，术语"协同"表示当联合使用时抗真菌化合物的联合效果比单独使用 时的累加效果更大。
[0011] 一般来讲，可以在例如使用处理交互作用层（treatment interaction stratum) 的方差分析模型中测试两种活性成分的协同活性（参见Slinker，1998)。使用下式可计算 相对功效：（未经处理的对照的进化状态值-组合物的进化状态值）八未经处理的对照的 进化状态值））X 100。然后使用下式可计算交互作用系数：化合物A+化合物B组合的相 对功效）八化合物A的相对功效+化合物B的相对功效））X 100。大于100的交互作用系 数表示化合物之间的协同。
[0012] 或者，可按照如下方式计算协同：通过计算与使用对照组合物处理的产品上霉菌 生长相比使用活性成分处理的产品上观察到的霉菌生长的减少可确定各活性成分的抗真 菌活性（以％计）。根据Colby方程（Colby，1967)可计算包含两种活性成分的组合抗真菌 组合物的预期抗真菌活性出，以％计）：
[0013] E = X+Y - [ (X ·Υ) /100]，其中X和Y分别为各活性成分X和Y的观察到的抗真菌 活性（以％计）。如果所观察到的组合的抗真菌活性（〇，以％计）超过所预期的组合的抗 真菌活性出，以％计），且因此协同因子0/Ε>1.0,则活性成分的联合应用导致协同抗真菌 效果。
[0014] 一方面，本发明涉及通过将那他霉素和甲基硫菌灵应用到生长或待生长蘑菇的基 质（substrate)中来在蘑葫生产期间控制真菌病的方法。以抑制真菌病的有效量来应用那 他霉素和甲基硫菌灵。此外，在使用那他霉素和甲基硫菌灵处理基质之前、同时或之后，可 将其他抗真菌化合物和/或抗微生物化合物应用到基质中。
[0015] 可将那他霉素和甲基硫菌灵相继应用到基质中。可以以任何顺序（首先那他霉素 然后甲基硫菌灵，或者首先甲基硫菌灵然后那他霉素）应用化合物。或者，可将那他霉素和 甲基硫菌灵同时应用到基质中。在同时应用的情况下，化合物可存在于同时应用的不同组 合物中或者化合物可存在于单一组合物中。在另一个实施方案中，可以通过单独或交替的 应用方式将抗真菌化合物施用到基质中。
[0016] 通过应用化合物，可预防真菌在基质上或者基质中生长。换言之，化合物保护蘑菇 免于真菌生长和/或真菌感染和/或真菌腐败。也可将化合物应用到已经感染真菌的基质 和/或蘑菇上。通过施用化合物，因基质和/或蘑菇上或在基质和/或蘑菇中的真菌而导致 的疾病进展可被减缓、停止，或者甚至可治愈基质和/或蘑菇的疾病。根据应用的类型，所 应用的那他霉素的量可在5ppm至10, OOOppm间变化，优选为IOppm至5, OOOppm，以及最优 选为20至1，OOOppm。取决于应用的类型，所应用的甲基硫菌灵的量可在Ippm至5, OOOppm 之间变化，优选为5ppm至3, OOOppm，以及最优选为10至1，OOOppm。
[0017] 当以组合物的形式应用那他霉素时，该组合物通常包含约0. 005g/l至约100g/l， 优选为约〇. 〇lg/l至约50g/l那他霉素。优选地，量为0. 01g/l至3g/l。
[0018] 当以组合物的形式应用甲基硫菌灵时，该组合物通常包含约0. 0001g/l至约 2000g/l、和优选约0. 0005g/l至约1500g/l的甲基硫菌灵。更优选地，量为0. 001g/l至 1000g/l〇
[0019] 在一个实施方案中，包含那他霉素和/或甲基硫菌灵的组合物还可包含至少一种 另外的化合物，所述化合物选自：粘着剂（sticking agent)、载体、着色剂、保护性胶体、粘 合剂（adhesive)、除草剂、肥料、增稠剂、掩蔽剂、触变剂、表面活性剂、另外的抗微生物化合 物、清洁剂、防腐剂、铺展剂、填充剂、喷淋油、流动助剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、润湿 剂、稳定剂、消泡剂、缓冲剂、UV-吸收剂和抗氧化剂。另外的抗微生物抗真菌化合物可以为 抗真菌化合物或者对抗昆虫、线虫、螨虫和/或细菌的化合物。当然，组合物也可包含上述 另外的化合物的任意两种或更多种。
[0020] 组合物的pH可以为1至10,优选为2至9,更优选为3至8以及最优选为4至7。
[0021] 组合物可以为固体，例如粉末、颗粒或片剂。固体组合物可用于制备液体组合物。
[0022] 组合物也可为液体。组合物可以为含水的或非含水的即用型组合物，但也可为含 水的或非含水的浓缩组合物/悬浮液或者原液组合物、悬浮液和/或溶液，其在使用之前必 须使用诸如水或缓冲体系的合适稀释剂来加以稀释。
[0023] 也可以以试剂盒的形式来应用那他霉素和甲基硫菌灵。那他霉素和甲基硫菌灵可 存在于两个单独的包装（例如容器）中。试剂盒的组分可以为在包装中的干燥形式或液体 形式。如果必要，试剂盒可包含溶解或稀释化合物的说明。此外，试剂盒可包括在蘑菇生产 过程中应用化合物的说明。
[0024] 如上所述，应用那他霉素和甲基硫菌灵以控制蘑菇中的真菌病。真菌病可以为蘑 菇中由真菌导致的任何疾病。在一个实施方案中，真菌病由指孢霉（Dactylium)物种（称为 蛛网病（cobweb)或霉变病（mildew)的疾病）、Diehlomyces物种（称为小牛脑病（calves brains)或假块菌病（false truffle)的疾病）、镰孢菌（Fusarium)物种（称为猝倒病的疾 病）、团丝核菌（Papulaspora)物种（称为褐色石膏霉病（brown plaster mould)的疾病）、 帚霉（Scopulariopsis)物种（称为白色石膏霉病（white plaster mould)的疾病）、轮枝 菌物种（称为干泡病（dry bubble)或褐斑病的疾病）、疣孢霉（Mycogone)物种（称为湿泡 病或白霉病的疾病）或者木霉菌物种（称为绿霉病（green mould)的疾病）导致的。在一 个优选的实施方案中，真菌病由轮枝菌物种、疣孢霉物种或者木霉菌物种导致。甚至更优选 地，真菌病由真菌轮枝霉（Verticillium fungicola)、菌盖琉孢霉（Mycogone perniciosa) 或者哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum)导致，其中真菌轮枝霉和哈茨木霉菌为最优选 的。
[0025] 因此，一方面，本发明涉及通过将那他霉素和甲基硫菌灵应用到生长或待生长蘑 菇的基质中来抑制蘑菇中因哈茨木霉菌导致的绿霉疾病的方法。另一方面，本发明涉及通 过将那他霉素和甲基硫菌灵应用到生长或待生长蘑菇的基质中来抑制蘑菇中因真菌轮枝 霉导致的干泡疾病的方法。
[0026] -般来讲，蘑菇生产可分为六个步骤：第1阶段堆肥（composting)、第2阶段堆 月巴、栽种（spawning)、覆盖（casing)、出针（pinning)和收割（cropping)。这六个步骤需要 大约15周时间来完成。
[0027] 在第一步（即第1阶段堆肥）中，准备堆肥。堆肥提供蘑菇生长所需的营养物质 (例如氮和碳水化合物），因此堆肥是生长或待生长蘑菇的基质。可用作堆肥的常见松散材 料（bulk material)包括：木肩或锯末、覆盖的干草（mulched hay)、铺草的家禽奠肥、啤酒 槽（Brewer's grain)、废料或再生纸、咖啡衆或澄、坚果和种子壳、大豆粉、棉籽壳或粗粉以 及可可豆壳。
[0028] 蘑菇堆肥通常采用两种类型的材料，最常用且最便宜的为小麦铺草的马粪肥。合 成堆肥通常由干草和压碎的玉米芯制成，但该术语通常是指其中主要成分并非马粪肥的任 何蘑菇堆肥。两种类型的堆肥均需要加入氮补充物和调理剂石膏。
[0029] 通过混合和润湿材料开始堆肥，在此之后开始有氧发酵，最终制成堆肥。第1阶段 堆肥通常耗时7至14天。
[0030] 第二步是第2阶段堆肥。该步骤通常耗时7-18天。在该步骤中，堆肥被加工 (finished)，这表示将在第1阶段堆肥中形成的氨去除，并消毒堆肥以杀死可存在于堆肥 中的任何昆虫、线虫、真菌或其他害虫。消毒通常通过高温或低温巴氏灭菌来进行。
[0031] 如何进行第2阶段堆肥取决于所使用的蘑菇的生产工艺类型。使用床（bed)或架 (shelf)系统，将堆肥直接放置在床中，其中床在用于蘑菇生产工艺的所有步骤的房间中。
[0032] 对于分区式生长系统（zoned system of growing)，将堆肥堆积到木盘内，将盘堆 积六至八个高，并且将它们移入环境控制的第2阶段堆肥房。然后，将盘移入专用房间，设 计各房间以提供用于蘑菇生产工艺各步骤的最佳环境。
[0033] 作为最近引入的系统，散装系统（bulk system)是其中将堆肥放置在具有有孔垫 板的水泥块仓中且堆肥顶部无盖的系统；这是专门设计用于第2阶段堆肥的房间。
[0034] 无论放置在床、盘或是散装系统中，均应将堆肥在厚度和密度或压缩方面均匀填 充。
[0035] 第三步是栽种。在该步骤中，使用蘑葫菌种体（spawn)接种蘑葫基质（即堆肥）。 蘑菇菌种体可购自营养繁殖菌丝体的商业菌种体制造商。将菌种体应用到基质上，将获得 的基质彻底地混合。可手动或通过合适的混合设备进行混合。如果期望，可将补充物加入 基质中。这些补充物包含营养物质，并且可增加蘑菇产量。然后，选择菌丝体通过基质生长 的最佳条件。这些条件取决于例如基质尺寸、基质成分、蘑菇栽培品种（cultivar)的类型。 当菌丝体已繁殖到整个基质层时，则完成栽种，然后可开始蘑菇生产的下一个步骤。栽种步 骤通常耗时14-21天。
[0036] 在许多国家，批量制备完全定植（colonized)的基质（即堆肥）已成为普遍操作。 这在大的隧道（tunnel)中进行。完全定植是指在基质被出售之前已经过栽种。这就是所 谓的第3阶段堆肥。专门的第3阶段制造商出售基质，这消除了农场具备自身的基质生产 设施的需求。
[0037] 第四步为覆盖。在该步骤中，将覆盖层应用到基质的表面上。在覆盖层中，最终形 成蘑菇。优选地，将覆盖材料进行巴氏消毒，以去除昆虫和病原体。如果期望，可在覆盖中 加入补充物。这些补充物包含营养物质，并且可增加蘑菇产量。优选地，分布覆盖层使得基 质表面上的厚度均匀。这种均匀性允许菌种体以相同的速率移动到并通过覆盖层，最终同 时产生蘑菇。覆盖应当能够保持水分，因为水分对于坚实蘑菇的生长是必要的。因而建议 频繁浇水。覆盖层不一定需要营养物质。覆盖步骤通常耗时13-20天。
[0038] 第五步为出针。在该步骤中，发生由菌丝体而来的可识别的蘑菇的最早形成。针 头继续膨胀长大为成熟的蘑菇。通过调整温度、湿度和二氧化碳含量，可以控制针头的数量 和最终蘑菇大小。可收获的蘑菇出现在覆盖之后第18至21天。
[0039] 第六步即最后一步称为收割。它是指在收割循环（7至10天）期间重复3至5天 的收获期。在收获期之后几天没有可收获的蘑菇。收割循环以有规律的方式自身重复，并 且只要蘑菇继续成熟即可继续收获。大部分种植蘑菇的农民收获35至42天，但一些农民 收获60天作物，并且收获可持续长达150天。同样，温度、湿度和二氧化碳含量对最佳生产 率而目是关键的。
[0040] 新收获的蘑菇必须保持冷藏状态。为了延长蘑菇的货架期，在收获之后蘑菇"呼 吸"是重要的，因而储存在无蜡的纸袋中比塑料袋优选。
[0041] 在最后的蘑菇收获之后，应当将生长室关闭，并且使用蒸汽对房间进行巴氏消毒。 设计该最终巴氏消毒以破坏可存在于生长室中的作物或木制品中的任何害虫，因而将侵害 下一批作物的可能性降至最低。
[0042] 可在外面成堆或成层地生产蘑菇。这样则不需要消毒步骤。由于室外生产的非预 期性和季节性的，少于5%的市售蘑菇通过这种方式进行生产。
[0043] 优选地，室内生产蘑菇。通过调节栽种循环、严密控制生长条件和基质成分，室内 生长使得蘑菇一致地生长。这通常通过用于大规模商业蘑菇生产的无窗、特制建筑来完成。 或者，也可在洞穴（caves)内生产蘑葫。
[0044] 在一个本发明的实施方案中，蘑菇可食用。商业生产的可食用蘑菇包括但不限 于以下蘑葫物种，例如伞菌（Agaricus)物种（例如双孢葫（Agaricus bisporus)、棕色蘑 葫（Agaricus brunnescens))、毛木耳（Auricularia polytricha)、黑木耳（Auricularia auricula-judae)、金针葫（Flammulina velutipes)、黄金葫（Hypsizygus tessulatus)、 香葫（Lentinus edodes)、姬葫（Pleurotus cornucopiae)、杏鲍葫（Pleurotus eryngii)、 平葫（Pleurotus ostreatus)、少抱根霉（Rhizopus oligosporus)、绣球菌（Sparassis crispa)、银耳（Tremella fuciformis)、夏块菌（Tuber aestivum)、白松露菌（Tuber magnatum)、黑孢块菌（Tuber melanosporum)、地葫物种（Terfezia sp·)、玉米黑粉菌 (Ustilago maydis)、鸡腿葫（Coprinus comatus)、羊肚菌（Morchella esculenta)以及草 燕（Volvariella volvacea)〇
[0045] 在蘑菇生产工艺的上述任一步骤中可应用那他霉素和甲基硫菌灵。它们可以作为 纯组分或在载体的存在下应用。如果期望，可以在生产工艺的不同步骤应用各组分，例如可 以在覆盖步骤之后应用那他霉素，而可以在收获步骤之后应用甲基硫菌灵。任意组合均可。
[0046] 在根据本发明的方法的一个实施方案中，在栽种之后将那他霉素和甲基硫菌灵应 用到基质中。
[0047] 在根据本发明的方法的另一实施方案中，在覆盖之后将那他霉素和甲基硫菌灵应 用到基质中。可直接在施加覆盖层之后进行应用。在根据本发明的方法的又一实施方案中， 在蘑菇生产中不止一次应用那他霉素和甲基硫菌灵。例如，在已经施加覆盖层之后可直接 应用那他霉素和甲基硫菌灵，并且此后每天应用一次持续4至5天。优选地，与增加覆盖层 的含水量的重复的浇水步骤一起应用那他霉素和甲基硫菌灵。在出针期间也可应用那他霉 素和甲基硫菌灵。而且，在每次收获蘑菇之后可应用那他霉素和甲基硫菌灵。
[0048] 在根据本发明的方法的一个实施方案中，通过喷雾应用那他霉素和甲基硫菌灵。 适于应用这些液体形式化合物的其他方法也是本发明的一部分。这些包括但不限于：浸渍、 浇水、湿透、蒸发、雾化、熏蒸。已知使用自动系统的喷雾应用减少劳动力耗费并且节约成 本。本领域技术人员众所周知的方法和设备可用于该目的。
[0049] 那他霉素和/或甲基硫菌灵应当以控制蘑菇中真菌病的有效量使用。在一个实施 方案中，以〇.〇1 -20fI. oz./IOOOsq. ft.(液量盎斯/1000平方英尺）、优选为0.05- IOfl. oz./1000sq. ft.、尤其为0. l_5fl. oz./1000sq. ft的量将那他霉素应用到基质的上表 面。在一个实施方案中，可以以上述量将包含I - 15wt%那他霉素、优选为3_14wt%那他 霉素、更优选为5 - 13wt%那他霉素以及尤其为7 - 12wt%那他霉素的组合物应用到基质 的上表面。在另一个实施方案中，以0. I - 500g/100m2,优选为I - 450g/100m2,更优选为 5 - 400g/100m2以及尤其为10 - 300g/100m2的量将那他霉素应用到基质的上表面。本领域 技术人员公知，根据应用的组合物中那他霉素的浓度，应用体积可改变。通常，与浓缩的那 他霉素组合物相比，每表面积单位以更大体积应用稀释的那他霉素组合物。计算需要应用 到某些表面区域的那他霉素有效量在技术人员力所能及的范围内。本发明中使用的那他霉 素商业化作为包含l〇wt%那他霉素的组合物。建议将3. 1-6. 3fl. oz. /IOOOsq. ft.的该那 他霉素组合物应用到基质的上表面。
[0050] 在一个实施方案中，以 0. 01- 50fl. oz. /IOOOsq. ft.，优选为 0. 05 - 40fl. oz./IOOOsq. ft.，以及尤其为0. l_30fl.oz./IOOOsq. ft的量将甲基硫菌灵应用到基质 的上表面。在另一实施方案中，以10 - 500g/100m2,优选为25 - 450g/100m2,更优选为 50 - 400g/100m2以及尤其为100 - 300g/100m2的量将甲基硫菌灵应用到基质的上表面。本 领域技术人员公知，根据应用的组合物中的甲基硫菌灵浓度，应用的体积可改变。通常，与 浓缩的甲基硫菌灵组合物相比，每表面积单位以更大体积应用经稀释的甲基硫菌灵组合 物。计算需要应用到某些表面区域的甲基硫菌灵有效量是在技术人员力所能及的范围内。 甲基硫菌灵例如商业化作为包含70wt%甲基硫菌灵的组合物。建议将200g/100m 2的该组 合物应用到基质的上表面。
[0051] 在另一方面，本发明涉及生产蘑菇的方法，该方法包括以下步骤：a)提供待生长 蘑菇的基质；b)使用蘑菇菌种体接种基质；c)添加覆盖层到基质；d)将那他霉素和甲基硫 菌灵应用到基质；e)应用刺激蘑菇生长的条件；以及f)收获蘑菇。在蘑菇生产中控制真菌 病的方法的任意上述特征也可应用到该方法中。在一个实施方案中，也可在e步骤期间将 那他霉素和甲基硫菌灵应用到基质中。也可在步骤f之后（即在第一次收获之后和新的蘑 菇趋向成熟之前）将那他霉素和甲基硫菌灵应用到基质中。
[0052] 本发明的另一方面涉及用那他霉素和甲基硫菌灵处理的产品。因此，本发明涉及 包含那他霉素和甲基硫菌灵的产品。经处理的产品可在它们的表面上和/或在产品内包含 那他霉素和甲基硫菌灵。在一个优选的实施方案中，所述产品是农业产品，其包括但不限于 蘑菇生长或待生长的基质、覆盖层、蘑菇菌种体、补充物、蘑菇。
[0053] 本发明的另一方面涉及那他霉素和甲基硫菌灵在蘑菇生产中控制真菌病的用途。
[0054] 因此，当生长或待生长蘑菇的基质（即堆肥）包含那他霉素和甲基硫菌灵时，这些 化合物可以在第1阶段和/或第2阶段堆肥步骤期间已经被掺入基质内。
[0055] 当蘑菇菌种体包括抗真菌化合物时，其可以在栽种步骤时并入基质内。
[0056] 当覆盖层包含抗真菌化合物时，其可以在覆盖步骤中并入基质内。可将化合物掺 入用于覆盖的材料并在施加覆盖层时应用到基质中。通过这种方式将抗真菌化合物充分分 散到整个覆盖层中。可将化合物配制为固体形式或在固体载体上。或者，可以在将覆盖层 施加到基质之后，将化合物喷洒到覆盖层上。
[0057] 当补充物包含抗真菌化合物时，可优选在堆肥步骤、栽种步骤和/或覆盖步骤中 将该补充物掺入基质内。最后，当将那他霉素和甲基硫菌灵应用到蘑菇生长的基质中时，成 熟蘑菇的表面上可包含所述化合物或者甚至所述化合物可掺入到蘑菇内。 实施例
[0058] 实施例I
[0059] 那他霉素和甲基硫菌灵联合应用的协同抗真菌活性
[0060] 为了证实那他霉素和甲基硫菌灵的组合对真菌轮枝霉的协同抗真菌活性，使用 96-孔微量滴定板进行体外测定法。测试以下组合物：
[0061] -对照（无活性成分），
[0062] -2. 5ppm 那他霉素 （DSM Food Specialties，荷兰代尔夫特），
[0063] -15或20ppm甲基硫菌灵，
[0064] -2. 5ppm那他霉素 +15ppm甲基硫菌灵，
[0065] -2. 5ppm那他霉素 +20ppm甲基硫菌灵。
[0066] 在使用80 μ I PCB介质填充微量滴定板的每个孔之后，将活性成分由在甲醇中制 备的单独储备溶液加入，由此得到100 μ 1/孔的中间体积。随后，将在PCB介质中制备的 100 μ 1的真菌轮枝霉悬浮物用于接种，各孔接种5. OxlO3孢子/ml。因此，各孔包含200 μ 1 的最终体积和小于1 %的甲醇，其不会影响真菌轮枝霉的生长（数据未显示）。
[0067] 在25°C下将微量滴定板孵育3天，通过计算与没有活性成分观察到的霉菌生长 相比在活性成分存在下观察到的霉菌生长的减少来评估各活性成分的体外抗真菌活性 (%)。根据Colby方程（Colby，1967)计算活性成分组合的预期抗真菌活性（E，以％计）：
[0068] E = X+Y - [(X · Y)/100]
[0069] 其中X和Y分别为观察到的各活性成分X和Y的抗真菌活性（以％计）。如果所 观察到的组合的抗真菌活性（〇,以％计）超过所预期的组合的抗真菌活性（Ε，以％计），因 而所得的协同因子〇/Ε>1. 0,活性成分的联合应用导致协同抗真菌效果。
[0070] 结果（参见表1)证实：与单独的那他霉素或者甲基硫菌灵相比，那他霉素+甲基 硫菌灵组合对真菌轮枝霉具有强得多的抗真菌活性。组合那他霉素+甲基硫菌灵所观察到 的抗真菌活性比所预期的抗真菌活性高50%，因而得到远大于I. 0的协同因子。
[0071] 该实施例的结果清楚地显示：那他霉素和甲基硫菌灵的联合应用协同地抑制真菌 轮枝霉的生长。因此，使用那他霉素和甲基硫菌灵的组合对于控制蘑菇中的干泡病是有利 的。
[0072] 实施例2
[0073] 那他霉素和甲基硫菌灵联合应用的协同抗真菌活性
[0074] 如实例1中所述进行试验，不同在于测试以下组合物：
[0075] -对照（无活性成分），
[0076] -I. 25ppm 那他霉素
[0077] -5、10或15ppm甲基硫菌灵
[0078] -I. 25ppm那他霉素 +5ppm甲基硫菌灵
[0079] -I. 25ppm那他霉素 +IOppm甲基硫菌灵
[0080] -I. 25ppm那他霉素 +15ppm甲基硫菌灵
[0081] 而且，将哈茨木霉菌用于接种。25°C下孵育3和5天之后，根据在实例1中描述的 方法来测定单独和组合的活性成分的抗真菌活性（以％计）。
[0082] 表2中的结果揭示：与单独的那他霉素或甲基硫菌灵相比，那他霉素+甲基硫菌灵 的有效成分组合更加有效地抑制哈茨木霉的生长。所观察到的那他霉素+甲基硫菌灵组合 的抗真菌活性比所预期的抗真菌活性高50%至100%，因而得到远大于I. O的协同因子。
[0083] 因此，那他霉素和甲基硫菌灵的联合应用对哈茨木霉具有强的协同抗真菌活性。 因此，使用那他霉素和甲基硫菌灵的组合控制蘑菇中的绿霉病是有利的。
[0084] 表1 :在25°C下孵育之后那他霉素联合甲基硫菌灵对真菌轮枝霉的体外抗真菌活 性（％ )

【权利要求】
1. 一种通过将那他霉素和甲基硫菌灵应用到生长或待生长磨茹的基质中来在磨茹生 产中控制真菌病的方法。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中在单一组合物中应用那他霉素和甲基硫菌灵。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中真菌病由轮枝菌（Verticillium)物种、扼抱 霉（Mycogone)物种或者木霉菌（Trichoderma)物种导致。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在栽种之后将那他霉素和甲基硫菌 灵应用到所述基质。
5. 根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在覆盖之后将那他霉素和甲基硫菌 灵应用到所述基质。
6. 根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中在磨茹生产中多于一次地应用那他 霉素和甲基硫菌灵。
7. 根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中通过喷雾应用那他霉素和甲基硫菌 灵。
8. 根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中W 0. 1 - 500g/100m 2的量将那他霉 素应用到所述基质的上表面。
9. 根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中W 10 - 500g/100m2的量将甲基硫菌 灵应用到所述基质的上表面。
10. -种生产磨茹的方法，所述方法包括W下步骤： a. 提供待生长磨茹的基质； b. 使用磨茹菌种体接种所述基质； C.将覆盖层添加到所述基质； d. 将那他霉素和甲基硫菌灵应用到所述基质； e. 应用刺激磨茹生长的条件；W及 f. 收获磨茹。
11. 根据权利要求10所述的方法，其中也在步骤e中将那他霉素和甲基硫菌灵应用到 所述基质。
12. -种生长或待生长磨茹的基质，所述基质包含那他霉素和甲基硫菌灵。
13. -种包含那他霉素和甲基硫菌灵的覆盖层。
14. 一种包含那他霉素和甲基硫菌灵的磨茹菌种体。
15. -种包含那他霉素和甲基硫菌灵的磨茹。
【文档编号】A01N47/34GK104470366SQ201380037828
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年7月16日 优先权日:2012年7月17日
【发明者】雅克布斯·斯塔克 申请人:帝斯曼知识产权资产管理有限公司