一种麒麟竭悬浮细胞的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种麒麟竭悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括麒麟竭外植体的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的继代、愈伤组织的保存等步骤。本发明方法诱导出大量的麒麟竭细胞工艺简单，不受地域，季节的影响，为麒麟竭的有效利用提供基础。
【专利说明】 一种麒麟竭悬浮细胞的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及组培条件下麒麟竭悬浮细胞的培养，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]麒麟竭，又名:麒麟竭、海蜡、麒麟血，棕榈科。我国广东、台湾一带生长的一种多年生藤本植物。其叶为羽状复叶，小叶为线状披针形，上有3条纵行的脉。果实卵球形，外有光亮的黄色鳞片。它通常缠绕在其他树木上，它的茎可以长达10余米。如果把它砍断或切开一个口子，血一样的树脂流出来，干后凝结成血块状的东西。这是很珍贵的中药，称之为“血竭” “麒麟竭”。经分析，血竭中含有鞣质、还原性糖和树脂类的物质，可治疗筋骨疼痛，并有散气、去痛、祛风、通经活血之效，除茎之外，果实也可流出血样的树脂。主治跌打肿痛，内伤瘀痛；外伤出血不止，瘰疬，臁疮溃久不合，目前关于其栽植方法尚待研究。
【发明内容】
[0003]本发明研究了一种麒麟竭悬浮细胞培养的快速繁殖方法，本发明方法具有细胞工艺简单，不受地域，季节的影响等特点，为麒麟竭的有效利用提供基础。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
取幼嫩的麒麟竭叶片流水冲洗0.5h，在超净工作台上，3%过氧化氢处理6min，无菌水冲洗干净，切成0.4X0.4的正方体小块，消毒处理过的麒麟竭嫩叶接种到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂7g/L，培养温度25°C，光照强度1501x，每天光照8h，诱导出来的愈伤组织接种入C17+NAA0.01-0.02mg/L+6-BAl-2mg/L+香蕉泥100_150mg/L的培养基中进行愈伤组织的继代培养，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的颜色翠绿松散性良好的愈伤组织放入液氮中进行低温保存。
[0005]采用本发明制备的麒麟竭悬浮细胞，生长速度快，储藏良好，可以提供大量原料。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取幼嫩的麒麟竭叶片流水冲洗0.5h，在超净工作台上，3%过氧化氢处理6min，无菌水冲洗干净，切成0.4X0.4的正方体小块，消毒处理过的麒麟竭嫩叶接种到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂7g/L，培养温度25°C，光照强度1501x,每天光照8h,诱导出来的愈伤组织接种入C17+NAA0.0lmg/L+6-BAlmg/L+香蕉泥100mg/L的培养基中进行愈伤组织的继代培养，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的颜色翠绿松散性良好的愈伤组织放入液氮中进行低温保存，悬浮细胞的增长率70%。
[0008]实施例2
取幼嫩的麒麟竭叶片流水冲洗0.5h，在超净工作台上，3%过氧化氢处理6min，无菌水冲洗干净，切成0.4X0.4的正方体小块，消毒处理过的麒麟竭嫩叶接种到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂7g/L，培养温度25°C，光照强度1501x，每天光照8h，诱导出来的愈伤组织接种入C17+NAA0.02mg/L+6-BA2mg/L+香蕉泥150mg/L的培养基中进行愈伤组织的继代培养，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的颜色翠绿松散性良好的愈伤组织放入液氮中进行低温保存，悬浮细胞增长率72%。
[0009]实施例3
取幼嫩的麒麟竭叶片流水冲洗0.5h，在超净工作台上，3%过氧化氢处理6min，无菌水冲洗干净，切成0.4X0.4的正方体小块，消毒处理过的麒麟竭嫩叶接种到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂7g/L，培养温度25°C，光照强度1501x，每天光照8h，诱导出来的愈伤组织接种入C17+NAA0.02mg/L+6-BA2mg/L+香蕉泥100mg/L的培养基中进行愈伤组织的继代培养，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照3001x，光期12h/d，温度25°C，培养出来的颜色翠绿松散性良好的愈伤组织放入液氮中进行低温保存，悬浮细胞增长率71%。
【权利要求】
1.一种麒麟竭悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括麒麟竭外植体的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的继代、愈伤组织的保存，其主要步骤如下: (1)取麒麟竭的嫩叶，进行消毒处理； (2)将步骤(I)消毒处理过的麒麟竭嫩叶接种到C17+NAA0.5mg/L+KT3mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖40g/L，琼脂7g/L，培养温度25°C，光照强度1501x，每天光照8h ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织接种入C17+NAA0.01-0.02mg/L+6-BAl-2mg/L+香蕉泥100-150mg/L的培养基中进行愈伤组织的继代培养，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 3001χ，光期 12h/d，温度 25 °C ； (4)将步骤(3)培养出来的颜色翠绿松散性良好的愈伤组织放入液氮中进行低温保存。
2.按照权利要求1所述的一种麒麟竭悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(4)中所述麒麟竭无菌叶片的获得为取幼嫩的麒麟竭叶片流水冲洗0.5h，在超净工作台上，3%过氧化氢处理6min，无菌水冲洗干净，切成0.4X0.4的正方体小块。
【文档编号】A01H4/00GK104221868SQ201410540400
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司