本发明属于农药
技术领域：
，更具体涉及一种防治玉竹根腐病的中药材组合物，同时还涉及一种防治玉竹根腐病的中药材组合物的制备方法，还涉及一种防治玉竹根腐病的中药材组合物的用途。
背景技术：
：玉竹(Polygonatumodoratum(Mill.)Druceflorum)为百合科Liliaeea植物，又名尾参、玉参，具有生津止渴，养阴润燥的功效，是一种肉质根茎可药食两用的经济作物。在玉竹的生产、繁殖过程中，伴随着大量病害的发生，其中最为严重的是玉竹根腐病，玉竹根腐病主要病原是芬芳镰刀菌(Fusariumredolen)。该病害近年来有逐渐加重扩散的趋势，玉竹根腐病的发生和蔓延影响了玉竹的产量和品质。玉竹根腐病是一种土传病害，目前主要用多菌灵、百菌清等化学试剂对玉竹根腐病进行防治。随着大量化学农药的使用，一方面引起病原菌的耐药性；另一方面引起农药残留和重金属超标等问题，越来越受到消费者的抵制。所以开发一种无污染的、绿色的、环境友好型的生物农药来防治玉竹根腐病成为解决上述问题的关键。本试验旨在开发一种无污染的，环境友好型的用来防治玉竹根腐病的生物抑菌剂。根据研究报道，已有很多种中药用于防治病害。如金银花、百部、丁香等用于抑制炭疽病，蒂疽病等病原菌；柴胡、栀子、薄荷、茯苓等抑制金黄色葡萄球菌；车前草对苹果轮纹病和柑橘炭疽病有较好的抑菌效果；五倍子对白菜黑斑病抑菌效果明显；细辛对棉花枯萎病菌有较好的抑菌效果。本实验选用42种中药材对玉竹根腐病进行了抑菌试验，筛选出了最佳的抑制玉竹根腐病的药剂。将药剂进行组合后，筛选出了黄柏和土黄连为最佳的药剂组合以及黄柏和土黄连最佳的配比量。技术实现要素：本发明的目的是针对现有技术的空白，是在于提供了一种防治玉竹根腐病的中药组合物，配方合理，使用方便，无污染、安全、不易产生抗药性的中药材组合物，土黄连与黄柏的组合物对玉竹根腐病有较好的抑菌效果且抑菌效果强于单一的中药材菌剂。本发明的中药材组合物抑菌效果强、环境污染小、无残毒等特点。有效避免了化学农药的危害。中药材组合物大大降低了病原菌产生抗药性的可能。本发明的另一个目的是在于提供了一种防治玉竹根腐病的中药组合物的制备方法，方法易行，操作简便。防治玉竹根腐病的组合物为土黄连和黄柏，原料取材方便，价格低廉。提取过程简单易行，也不要昂贵的试验仪器，普通的蒸馏设备就可以完成提取过程。生产工艺可控性强，质量重现性好。本发明还有一个目的是在于提供了一种中药组合物在制备治疗或预防玉竹根腐病药物中的应用。开发的黄柏与土黄连的中药材组合物对玉竹根腐病的抑菌效果显著，能够较好的防治玉竹根腐病的发生、蔓延，减少农民和种植户的经济损失。防治效果好、防治时间长、减少化学农药带来的环境污染以及对病虫害的抗药性。操作过程简单易行，无需专业的基础知识，具有基层推广价值。为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：一种防治玉竹根腐病的中药组合物，由以下重量份的原料组成：一种防治玉竹根腐病的中药组合物，由以下重量份的原料组成(优选范围)：一种防治玉竹根腐病的中药组合物，由以下重量份的原料组成(好范围)：一种防治玉竹根腐病的中药组合物，由以下重量份的原料组成(较好范围)：一种防治玉竹根腐病的中药组合物，由以下重量份的原料组成(最佳值)：一种防治玉竹根腐病的中药组合物(膏状物)的制备方法，其步骤是：(1)按比例分别称取黄柏、土黄连，分别倒入电热套圆形瓶中，分别倒入75％(75mL的无水乙醇加25mL的水)的酒精1000ml,开启电热套(DRT-XS)，分别对黄柏、土黄连进行提取，提取时间控制在28－32min，温度控制在93－97℃，获得第一次提取液。(2)分别对第一次提取液进行抽滤，再倒入75％(75mL的无水乙醇加25mL的水)的酒精500ml，提取时间控制在28－32min，温度控制在93－97℃，获得第二次提取液。(3)分别对第二次提取液进行抽滤，将第二次提取液倒入旋转蒸发仪(R2003KB)圆形瓶中(不超越总体积1/3)，减压旋转蒸发至膏状，旋转参数：60-75/min；制冷温度控制在：-2.0-10℃，分别获得黄柏、土黄连提取物(膏状物)。(4)将获得的中药组合物(膏状物)，分别把黄柏、土黄连提取物(膏状物)倒入瓶中，(空瓶先称重)，再称重，做好记载，贴好标签，写上编号名称，保存至4℃冰箱中备用。(5)将黄柏提取物和土黄连提取物按一定比例装入一个容器内，进行搅拌，搅拌混合均匀后，向容器中加无菌水，获得一种中药组合物抑菌剂。黄柏和土黄连对芬芳镰刀菌抑制效果的配比筛选及验证过程：1、将提取好的黄柏和土黄连提取物分别(膏状物)溶于无菌水中。分别充分震荡溶解离心后取上层清液，用细菌过滤器将中药材除菌备用。2、然后取除菌的黄柏和土黄连按照不同比例进行配比，倒入瓶中，贴好标签，写上编号名称。3、将0.45um孔径的滤膜用打孔器打孔后，得到小圆片滤纸高温(121℃,25-30min)灭菌备用。4、芬芳镰刀菌F.redolens经过PCR、测序及NCBI比对后鉴定为芬芳镰刀菌F.redolens。5、将马铃薯(去皮)200g，蔗糖20g，琼脂粉17g，水1000mL煮沸30min,过滤后高温(121℃,25-30min)灭菌制成培养基备用。6、将芬芳镰刀菌F.redolens接种于PDA培养基活化培养，当菌种培养到7天左右菌株活性最佳时，进行试验。7、将培养好的活性最佳的芬芳镰刀菌F.redolens用直径6mm的灭菌打孔器打成菌饼若干。8、将小圆片滤膜放置于培养皿的正中央，将一个菌饼放置于滤膜与培养皿边缘的正中间，另一个菌饼放置于对称的另一边。分别将不同比例配好的黄柏、土黄连组合物取25μL滴于培养基上培养，每种不同配比的组合物做三个重复，用水做空白对照，多菌灵做阳性对照。于28℃恒温培养箱培养7d。观察抑菌圈的大小。9、当黄柏与土黄连比例为1:2、1:1、1:5、2:1、5:1时，抑菌圈大小分别为19.5mm、16.75mm、15.5mm、14.25mm、13mm，而空白对照的抑菌圈大小为0。500倍多菌灵对芬芳镰刀菌的抑菌圈大小为20.5mm(见表1)。10、从抑菌圈的大小可以看出，中药材组合物在1:2、1:1、1:5、2:1、5:1这五个比例时都表现出了较好的抑菌效果。特别是黄柏与土黄连比例为1:2时，其抑菌圈大小与500倍多菌灵的抑菌圈大小相当。表1为黄柏和土黄连的不同浓度配比对芬芳镰刀菌F.redolens的抑菌圈大小一种中药组合物(制剂)在制备治疗或预防玉竹根腐病药物中的应用，其步骤是：将筛选出的土黄连和黄柏组合物的最佳配比制备为水剂，可以采用拌种、灌根的方法施用到田间。将土黄连和黄柏组合物与对照无菌水对玉竹根腐病进行田间药效试验。A、将黄柏中药组合物(膏状物)和土黄连中药组合物(膏状物)以83.3％和16.7％(黄柏与土黄连的配比为5:1)的比例混合制备成水剂。加入无菌水，定容到1000份。B、选用健康的15cm左右长度的玉竹根茎用此中药组合物浸泡28－32min后种植在玉竹根腐病发生严重的地块，以无菌水浸泡健康的15cm左右长度玉竹根茎28－32min后种植在对照试验的相同地块作为空白对照。C、玉竹出苗后常规管理，不施用任何肥料和农药，在30天内检测根腐病发生情况，到达最适宜时期，将苗连根茎拔出、洗净，检测玉竹根茎的病斑数量。D、通过黄柏(提取物)和土黄连(提取物)以83.3％和16.7％(黄柏与土黄连的配比为5:1)的比例混合制备成水剂浸泡健康的玉竹根茎处理后，该中药混合物对玉竹的萌发率影响不大，与空白对照相当。与空白对照相比较，处理的玉竹根茎病斑明显减少，对玉竹根腐病F.redolens有明显的抑制作用。对照玉竹根茎的病斑数为5.3个，而经过黄柏(提取物)和土黄连(提取物)以83.3％和16.7％(5:1)的比例处理的玉竹根茎的病斑数为1.5个，防治效果达到71.7％。(大田试验时选用黄柏与土黄连的配比为5:1，此配比的室内抑菌效果验证时抑菌圈最小。大田验证选用室内抑菌圈最小的组合配比量，此配比量的大田防治效果好，所以此中药材组合物在1:2、1:1、1:5、2:1、5:1这五个比例时都表现出较好的抑菌效果)E、通过大田试验验证了此组合物对玉竹根腐病表现出较好的防治效果。本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：(1)首次用黄柏和土黄连组合物对玉竹根腐病(F.redolens)进行防治抑菌试验，并且有较好的抑菌效果。(2)本发明的中药材组合物抑菌效果强、环境污染小、无残毒等特点。有效避免了化学农药的危害。(3)中药材组合物大大降低了病原菌产生抗药性的可能。(4)本发明提供了一种防治玉竹根腐病的中药组合物的制备方法，方法易行，操作简便。不需要昂贵的仪器设备，普通的蒸馏设备就可以完成提取过程。(5)原料价格低廉、生产工艺可控性强、质量重现性好、具有可操作性和推广性。有关实验数据：请见表1为黄柏和土黄连的不同配比对芬芳镰刀菌的抑菌圈大小。附图说明图1左边图为无菌水对芬芳镰刀菌F.redolens的抑菌效果图；右边图为黄柏(提取物)和土黄连(提取物)的中药组合物(配比为1:2)对芬芳镰刀菌F.redolens的抑菌效果图。1、大田试验中，黄柏(提取物)和土黄连(提取物)以83.3％和16.7％(5:1)的比例作为水剂对健康玉竹根茎进行栽种前的浸泡时，防治效果达到71.7％。所以对玉竹根腐病有较好的防治效果。2、操作过程简单易行，无需专业的基础知识，适合基层推广。3、不会造成环境污染和对使用者造成伤害。具体实施方式实施例1：一种防治玉竹根腐病的中药组合物，它由以下重量份的原料组成：一种防治玉竹根腐病的中药组合物(膏状物)的制备方法，其步骤是：(1)分别称取黄柏、土黄连，分别倒入电热套圆形瓶中，分别倒入75％(75mL的无水乙醇加25mL的水)的酒精1000ml,开启电热套，分别对黄柏、土黄连进行提取，提取时间控制在28或29或30或31或32min，温度控制在93或94或95或96或97℃，获得第一次提取液；(2)分别对第一次提取液进行抽滤，再倒入75％(75mL的无水乙醇加25mL的水)的酒精500ml，提取时间控制在28或29或30或31或32min，温度控制在93或94或95或96或97℃，获得第二次提取液；(3)分别对第二次提取液进行抽滤，将第二次提取液倒入旋转蒸发仪(R2003KB)圆形瓶中(不超越总体积1/3)，减压旋转蒸发至膏状，旋转参数：60或63或66或69或72或75/min；制冷温度控制在：-2.0或-1或1或3或5或8或10℃，分别获得黄柏、土黄连提取物(膏状物)；(4)将获得的中药组合物(膏状物)，分别把黄柏、土黄连提取物(膏状物)倒入瓶中，(空瓶先称重)，再称重，做好记载，贴好标签，写上编号名称，保存至4℃冰箱中备用。(5)将黄柏提取物和土黄连提取物按一定比例装入一个容器内，进行搅拌，搅拌混合均匀后，向容器中加无菌水，定容至1000份，获得一种中药组合物制剂。(6)待用于防治玉竹根腐病。能够较好的防治玉竹根腐病的发生、蔓延，减少农民和种植户的经济损失。防治效果好、防治时间长、减少化学农药带来的环境污染以及对病虫害的抗药性。一种防治玉竹根腐病的中药组合物，它由以下重量份的原料组成：黄柏土黄连无菌水黄柏土黄连无菌水实施例2355110535实施例790340570实施例3210100690实施例8110160730实施例419085725实施例9120240640实施例516095745实施例10220200580实施例680365545实施例11150230620其制备方法与实施例1相同。实施例12：一种中药组合物(制剂)在制备治疗或预防玉竹根腐病药物中的应用，其步骤是：A、将黄柏中药组合物(膏状物)和土黄连中药组合物(膏状物)以83.3％和16.7％(5:1)的比例混合制备成水剂。加入无菌水，定容到1000份。B、选用健康的15cm左右长度的玉竹根茎用此中药组合物浸泡30min后种植在玉竹根腐病发生严重的地块，以无菌水浸泡健康的15cm左右长度玉竹根茎28－32min后种植在对照试验的相同地块作为空白对照。C、玉竹出苗后常规管理，不施用任何肥料和农药，在30天内检测根腐病发生情况，到达最适宜时期，将苗连根茎拔出、洗净，检测玉竹根茎的病斑数量。通过黄柏(膏状物或制剂)和土黄连(膏状物或制剂)以83.3％和16.7％(5:1)的比例混合制备成水剂浸泡健康的玉竹根茎处理后，该中药混合物对玉竹的萌发率影响不大，与空白对照相当。与空白对照相比较，处理的玉竹根茎病斑明显减少，对玉竹根腐病有明显的抑制作用。对照玉竹根茎的病斑数为5.3个，而经过黄柏(膏状物或制剂)和土黄连(膏状物或制剂)以83.3％和16.7％(5:1)的比例处理的玉竹根茎的病斑数为1.5个，防治效果达到71.7％。所述的病原菌为引起玉竹根腐病的芬芳镰刀菌F.redolens。当前第1页1 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