一种席草一步成苗批量化生产的方法与流程

本发明属于席草的组培技术领域，具体涉及席草一步成苗批量化生产的方法。

背景技术：

席草(Juncus effusus L.)是一种重要的经济作物，具有柔软并富有弹性，并不易褪色，还有吸湿、脱臭、防虫、防蛀并具有天然草香等特性，使席草很适合编织榻榻米、草席、草垫、草扇和草篮等，其产品具有通气、吸湿、清凉的作用。由于席草可以自身调节干湿，所以用席草制成的产品夏季能保持适度的干燥，使人的皮肤感觉异常舒适，冬季保温性能良好，因此席草编织品已成为人们日常生活中重要的家庭日常用品，同时也可以作为室内时尚装饰品，深受广大消费者的青睐，其编织品具有那些塑料、化纤、竹子等编织品无法比拟的特性和优点。席草根茎可作药用，有利尿、安眠、止血、治小儿夜啼等功效，因此日本人喜用席草编织品作为室内装饰和睡眠还具有其更深层次的原因日本是使用蔺草编织品最多的国家，至少已有500多年的历史。随着我国人民生活水平的不断提高和回归自然热的掀起，用天然蔺草作为原料的绿色编织品，必将引起人们越来越多的关注。

席草为多年生宿根性草本植物，常规育种通过分株繁殖，一是逐年分株繁殖导致质量下降，不适合加工。本发明通过组织培养方法，提纯复壮席草的优势，且创造出席草高效成苗的最佳方法，建立一套高效低耗量的培养体系，以最快的速度将研究成果转化为现实生产力。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种高效低耗量的席草快速繁殖方法，该方法培养效果佳，增殖系数高，稳定性好、生产成本低，是一种在最短的时间内获得大量试管苗的快速繁殖方法。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种席草一步成苗批量化生产的方法，包括以下步骤：

(1)基础苗获得：选择优良席草植株的分蘖节为外植体，外植体消毒后在1/2MS+6-BA1.2～4.5mg/L的琼脂固体培养基上培养，诱导出分蘖芽；

(2)批量化生产：将步骤(1)获得的分蘖芽，接在1/2MS+6-BA1.2～4.5mg/L+NAA0.02～1.0mg/L+IAA0.02～1.0mg/L+多效唑0.5～5.0mg/L的琼脂固体培养基上进行增殖和生根；

(3)大田栽培：幼苗出瓶移栽前，打开瓶盖炼苗，取出清洗根部培养基，随后将幼苗直接移栽至水田。

步骤(1)中将席草整株从大田挖出，将根部清洗干净，放置清洁的水中培养2周，将分蘖节分成单株，再将根和基部老叶去掉，分蘖节保留1.8-2.2cm高。

步骤(1)中分蘖节消毒时，首先用洗衣粉清洗干净，在无菌操作台上用无菌水洗5～7次，用70％酒精浸润30秒-1分钟，再放入0.1％的升汞溶液中灭菌12～18分钟，无菌水冲洗5～6次，备用。

步骤(1)诱导出的丛芽继代培养时，分成4-6株/丛，再转入步骤(1)相同的培养基中，每隔30d继代一次。

步骤(2)是将步骤(1)获得的丛生芽切下来，分成4-6株/丛，每瓶7-10丛进行增殖和生根。

步骤(2)继代培养时，分成4-6株/丛，每瓶7-10丛，转入步骤(2)相同培养基中。

步骤(1)和(2)的培养温度为24℃±2，1000～2000lx弱光环境中，每天10～12小时光照培养。

步骤(3)是将步骤(2)获得的根叶俱全，且5-6cm高的幼苗出瓶移栽，先打开瓶盖炼苗5-7d，再取出清洗根部培养基，随后将幼苗分成4-6株/丛移至水田；大田栽培水位均保持在1-2cm深。

步骤(1)优选使用的琼脂固体培养基为：1/2MS+6-BA3.5mg/L；或者使用培养基：1/2MS+6-BA4.0mg/L。

步骤(2)优选使用的琼脂固体培养基为：1/2MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.5mg/L+多效唑3.0mg/L；或者使用培养基：1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.4mg/L+多效唑4.0mg/L。

本发明与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、针对现有技术存在的不足之处，该发明方法提高了席草优良特性，其无性系后代不经过愈伤组织阶段，能保持与母本优良特性的高度一致性。

2、本发明根据生产需要设计培养方法，首先同步诱导大量分蘖芽，抑制根的形成，提高增殖倍数，加快基础苗的繁殖，增殖倍数达到7-10；每瓶获得有效苗70株以上，大大提高了培养效率，节约了生产成本。

3、批量化生产阶段同步诱导分蘖芽、不定根，增殖与生根简化为一步完成，即“一步成苗”方法，形成完整植株只需30d左右，节约了30d左右的生根时间。

4、直接从瓶内移栽大田，省略了温室炼苗阶段，而且4-6株/丛进行移栽，缓苗期短，移栽成活率高达95％以上。

5、本发明选择未经组培繁殖的分蘖节进行分株繁殖为对照；两者移栽条件一致，适时追肥一次；移栽7个月左右，种苗为组培试管苗的植株相比于对照茎色翠绿，鲜草直径相对较粗、草茎较长，顶草长。

6、根据前人成本预算的方法计算，本发明技术生产100万株席草试管苗，每瓶有效生根苗为70株以上，仅需生产约0.5万瓶基础苗，约1.5万瓶生根苗，合计2万瓶。本发明不仅减少了无菌操作步骤，而且节约了培养室空间，简化了健康种苗生产程序，降低了生产成本，提高了生产效率。

附图说明

图1为席草有效苗苗的生长情况；

图2为席草有效苗根的生长情况；

图3为席草组培试管苗在大田的生长情况；

图4为席草分株苗在大田的生长情况。

具体实施方式

以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。

实施例1、组织培养快速繁殖席草

一、培养基配制和灭菌

初代继代培养基用于基础苗繁殖：1/2MS+6-BA3.5mg/L；

一步成苗批量化生产培养基：1/2MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.5mg/L+多效唑3.0mg/L。

以上培养基121℃下，灭菌20分钟。

二、基础苗繁殖

取席草(Juncus effusus L.)分蘖节，将席草整株从大田挖出，将根部清洗干净，放置清洁的水中培养2周左右，再将分蘖节分成单株，再将根、基部老叶和顶部去掉，分蘖节保留2cm左右高；消毒时，首先用洗衣粉清洗干净，在无菌操作台上用无菌水洗5～7次，用70％酒精浸润30秒-1分钟，再放入0.1％的升汞溶液中灭菌12～18分钟，无菌水冲洗5～6次，备用。将分蘖节转入装有初代培养基上塑料培养瓶(容量80毫升)中，每个培养瓶外植体个数为10个左右，在下述培养条件下进行培养：24℃左右，每天10小时光照，光照强度为1000～2000lx左右；分蘖节接种90个。培养3周左右，从分蘖节基部开始形成分蘖芽，继续培养2周，100％分蘖节基部形成5以上的分蘖芽，最高达到10个。继代培养时，将丛芽分成4-6株/丛，每隔30d继代一次，每次继代中，每个分蘖芽增殖7-10倍。这一步需要抑制根的形成，以防影响基础苗的繁殖。根据生产规模，繁殖充足的基础苗，再进行批量化生产。

三、批量化生产

取上述90个株系中的90个株系进行继代繁殖，具体方法如下：将步骤(1)获得的分蘖芽丛按4-6株/丛的规格分开，接种在培养基中进行培养，培养基同步骤(2)，培养条件同步骤(2)；培养30d左右后，增殖倍数为7-10，苗高5-6cm，同步生根率高达100％，每瓶获得根叶俱全的有效苗70株以上。有效苗苗的生长情况如图1所示，有效苗根的生长情况如图2所示。

四、试管苗移栽：

步骤(3)是将步骤(2)获得的根叶俱全，且5-6cm高的幼苗出瓶移栽，先打开瓶盖炼苗5-7d，再取出清洗根部培养基，随后将幼苗分成4-6株/丛左右移至水田，选择未经组培繁殖的席草分蘖苗进行分株繁殖为对照，水位均保持在1-2cm深；两者移栽条件和方法一致。

移栽时间为2015年10月22日，10d左右恢复生长，30d左右长出新叶，60d左右100％长出新叶。移栽8个月席草试管苗的生长情况如图3所示；移栽8个月对照的生长情况如图4所示。

本发明所提供的席草组织培养繁殖方法，分蘖节为外植体，取材容易，数量大，遗传稳定性高，生长良好等优势。在初代培养过程中，不经过愈伤组织阶段，直接从分蘖节基部形成分蘖芽，不仅生长速度快，而且繁殖系数大。批量化生产阶段，采用同步增殖生根，“一步成苗”的方法，简化了健康种苗生产程序。本发明技术生产100万株席草试管苗，每瓶有效生根苗为70株以上，仅需生产约0.5万瓶基础苗，约1.5万瓶生根苗，合计2万瓶。本发明不仅减少了无菌操作步骤，而且节约了培养室空间，简化了健康种苗生产程序，降低了生产成本，提高了生产效率。

实施例2、组织培养快速繁殖席草

一、培养基配制和灭菌

初代继代培养基：1/2MS+6-BA4.0mg/L；

一步成苗批量化生产培养基：1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.6mg/L+IAA0.4mg/L+多效唑4.0mg/L。

取席草(Juncus effusus L.)分蘖节，基本操作方法同实施例1一致；效果与实施例1相差不大。