一种提高烟苗耐涝性的方法与流程

本发明涉及烟草技术领域，且特别涉及一种提高烟苗耐涝性的方法。

背景技术：

烟草是世界范围内一种重要的经济作物。烟草生产中广泛采用的是漂浮育苗，在育苗过程中部分根系会浸泡在水中，使烟苗遭受一定程度的水涝胁迫。此外，烟草植株淹水会使烟叶中的可溶性糖、钾含量和钾/氮比值显著的降低，明显的降低了烟叶的产量与品质。通过研究淹水条件下烟草理化指标的变化，发现随着淹水时间的延长，超氧物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性显著增强，脯氨酸(Pro)迅速积累，丙二醛(MDA)含量出现先升高后降低的趋势，烟草叶片净光合速率、蒸腾速率及气孔导度均随淹水时间的延长显著下降，而胞间CO₂浓度先轻微下降、随后显著上升。淹水条件下烟株净光合速率、蒸腾强度以伸根期影响最大，对根系活力和烟叶钾含量的影响则在烟株生长中后期降低更为严重，烟株在各生育期淹水，其净光合速率、蒸腾速率、根系活力和烟叶钾含量都随淹水时间的延长和淹水深度的增加呈显著下降趋势，淹水不仅威胁到烟株的生长，还可能会降低其产量和品质。因此，通过各种农艺和化学调控手段来提高烟草的耐涝性具有重要的实际意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种提高烟苗耐涝性的方法，其能有效提高烟苗耐涝性，可有效提高淹水胁迫过程中烟苗的干物质积累速率、相对生长速率、根系活力、脯氨酸含量及净光合速率、降低MDA含量和电解质渗透率，提高烟苗素质。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

本发明提出一种提高烟苗耐涝性的方法，其特征在于，对三叶一心期至五叶一心期的烟苗的地上部分喷施2-4次化学试剂，每次喷施至烟苗全株淋湿，化学试剂选自氯化钙、赤霉素、水杨酸和多效唑中的至少一种。

本发明实施例的提供的一种提高烟苗耐涝性的方法的有益效果是：利用该方法，可保持烟苗较高的单株干重、相对生长速率、干物质积累速率、根系活力、脯氨酸含量、叶绿素含量、净光合速率、胞间CO₂浓度、气孔导度和蒸腾速率，有效缓解淹水胁迫诱导的MDA的积累和电解质渗透率，有效提高烟苗的耐涝性与综合素质。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗株高的影响的柱状图；

图2为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗单株鲜重和单株干重的影响的柱状图；

图3为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗相对生长速率和干物质积累速率的影响的柱状图；

图4为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗脯氨酸的影响的柱状图；

图5为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗电解质渗透率的影响的柱状图；

图6为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗丙二醛的影响的柱状图；

图7为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗根系活力的影响的柱状图；

图8为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗总叶绿素的影响的柱状图；

图9为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗净光合速率的影响的柱状图；

图10为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗胞间CO₂浓度的影响的柱状图；

图11为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗气孔导度的影响的柱状图；

图12为本发明试验例提供的淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗蒸腾速率的影响的柱状图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

水涝胁迫不仅威胁到植物的生长，还可能会降低其产量和品质，更甚者，例如大部分维管植物在淹水环境中均表现出明显的伤害，甚至死亡。不同植物对水涝胁迫的敏感度、应激能力、以及对水涝胁迫下代谢途径均有所不同，本发明针对烟草植株进行研究。

本发明中烟苗采用漂浮育种方式，参阅国标《GB/T25241.1-2010》的方法对其进行培育和管理，烟苗的品种不限，本领域工作人员可根据实际情况进行不同品种的选择。

下面对本发明实施例提供的一种提高烟苗耐涝性的方法进行具体说明。

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：对三叶一心期至五叶一心期的烟苗的地上部分喷施2-4次化学试剂，每次喷施至所述烟苗全株淋湿。

处于三叶一心期至五叶一心期的烟苗苗龄较佳，对环境刺激敏感，喷施化学试剂后吸收快，便于后期再生长，苗龄过小，烟苗发育不完全，营养物质储备不足，喷施化学试剂后吸收效果不佳，而苗龄过大，不利于后期进行烟苗移栽以及发生移栽后还苗期长等问题。

优选地，对三叶一心期至五叶一心期的烟苗的地上部分喷施4次化学试剂，烟苗对化学试剂的吸收最优，显著提高烟苗耐涝性。

更优选地，烟苗为三叶一心期的烟苗，苗龄最佳，喷施化学试剂后吸收快，适应力强，加快烟苗耐涝性提高的效率。更优选地，对三叶一心期的烟苗的地上部分喷施4次化学试剂，进一步提高烟苗耐涝性。

具体地，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止，保证化学试剂的喷施量，防止喷施量过小，提高烟苗耐涝性效果不佳，喷施量过大，造成化学试剂的浪费以及对烟苗产生不良影响。

喷施化学试剂于常温进行，具体地，喷施化学试剂于18-30℃的条件下进行。

优选地，相邻的任意两次喷施化学试剂之间间隔1.5-2.5d，给予烟苗对化学试剂的吸收后进行物质积累以及缓冲的时间。优选地，最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

其中，化学试剂选自氯化钙、赤霉素、水杨酸和多效唑中的至少一种。

例如，当单独使用氯化钙作为化学试剂时，化学试剂中可以含有浓度为3.0-6.0mmol/L的氯化钙，该浓度范围内的氯化钙提高烟苗耐涝性的效率最佳。在此基础上，还可以添加适量的赤霉素、水杨酸或者多效唑等。

氯化钙(CaCl₂)中，钙是调节植物体内代谢系统的重要因子之一，钙能与作为胞内信使的钙调蛋白结合，调节植物体的许多生理代谢过程，尤其在环境胁迫下，钙和钙调素参与胁迫信号的感受、传递、响应与表达，提高植物的抗逆性。氯是微量元素中仅有的阴离子，不同植物对氯营养要求差异很大。而本发明中，则发现利用氯化钙处理过的烟苗可以有效提高其耐涝性，具体表现为在淹水胁迫过程中，与喷施蒸馏水的对照组烟苗相比，有效降低MDA含量和电解质渗透率，且其还提高了烟苗的干物质积累速率、相对生长速率、根系活力、脯氨酸含量，总体上提高了烟苗素质。

再例如，也可以单独使用赤霉素作为化学试剂，此时，作为优选，化学试剂中赤霉素的浓度控制为100-200mg/L。该浓度范围内的赤霉素提高烟苗耐涝性的效率最佳，防止赤霉素在浓度过大时对烟苗的生长产生不利影响。应当理解，将适量的氯化钙、水杨酸和多效唑中的一种或几种添加进赤霉素中也是可行的，此时始终控制赤霉素在化学试剂中的浓度大致为100-200mg/L便能保证烟苗具有较好的耐涝性。

赤霉素(GA3)也称吉贝素，是一种植物激素，调节生长和影响各种发育过程，包括促进茎的延长，发芽，种子休眠，开花，性别表现，叶和果实的老化抑制。而本发明中，则发现利用赤霉素处理过的烟苗可以有效提高其耐涝性，具体表现为在淹水胁迫过程中，与喷施蒸馏水的对照组烟苗相比，有效降低MDA含量和电解质渗透率，且其还提高了烟苗的干物质积累速率、相对生长速率、根系活力、脯氨酸含量，尤其是净光合速率和蒸腾速率，总体上提高了烟苗素质。

例如，也可以单独使用水杨酸作为化学试剂，此时，作为优选，化学试剂中水杨酸的浓度控制在1.0-2.0mmol/L，该浓度范围内的水杨酸提高烟苗耐涝性的效率最佳，防止水杨酸(SA)在浓度过大时对烟苗引起药害。应当理解，将适量的氯化钙、赤霉素和多效唑中的一种或几种添加进赤霉素中也是可行的，此时始终控制水杨酸在化学试剂中的浓度大致为1.0-2.0mmol/L便能保证烟苗具有较好的耐涝性。

水杨酸(SA)，化学名称为邻羟基苯甲酸，其可诱导植物产生某些病原相关蛋白，使植物产生抗病的生理效应。水杨酸还可以诱导开花、影响黄瓜的性别表达及增加植物分支数量等生理效应。而本发明中，则发现利用水杨酸处理过的烟苗可以有效提高其耐涝性，具体表现为在淹水胁迫过程中，与喷施蒸馏水的对照组烟苗相比，有效降低MDA含量和电解质渗透率，且其还提高了烟苗的干物质积累速率、相对生长速率、根系活力、脯氨酸含量、净光合速率和蒸腾速率，尤其是促进烟株的相对生长速率、干物质积累速率的增加、降低电解质渗透率以及提高根系活力，总体上提高了烟苗素质。

例如，也可以单独使用多效唑作为化学试剂，此时，作为优选，化学试剂中多效唑的浓度控制在100-200mg/L，该浓度范围内的多效唑提高烟苗耐涝性的效率最佳，防止多效唑过度对烟苗造成不良影响。应当理解，将适量的氯化钙、赤霉素和水杨酸中的一种或几种添加进多效唑中也是可行的，此时始终控制多效唑在化学试剂中的浓度大致为100-200mg/L便能保证烟苗具有较好的耐涝性。

多效唑(PP333)，是三唑类植物生长调节剂，抑制茎杆伸长，缩短节间、促进植物分蘖、促进花芽分化，增加植物抗逆性能，提高产量等效果。而本发明中，则发现利用多效唑处理过的烟苗可以有效提高其耐涝性，具体表现为在淹水胁迫过程中，与喷施蒸馏水的对照组烟苗相比，有效降低MDA含量和电解质渗透率，且其还提高了烟苗的干物质积累速率、相对生长速率、根系活力、脯氨酸含量、净光合速率和蒸腾速率，尤其是降低烟苗的电解质渗透率，提高其根系活力、提高净光合速率、蒸腾速率，总体上提高了烟苗素质。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度20℃的条件下，对育苗盘上生长至四叶一心期的烟苗的地上部分喷施3次3.0mmol/L的氯化钙，每次间隔2d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止，最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例2

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度20℃的条件下，对育苗盘上生长至五叶一心期的烟苗的地上部分喷施2次4.5mmol/L的氯化钙，每次间隔2.5d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止，最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例3

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度27℃的条件下，对育苗盘上生长至五叶一心期的烟苗的地上部分喷施4次100mg/L的赤霉素，每次间隔1.5d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止，最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例4

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度22℃的条件下，对育苗盘上生长至四叶一心期的烟苗的地上部分喷施3次200mg/L的赤霉素，每次间隔2.5d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止，最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例5

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度27℃的条件下，对育苗盘上生长至三叶一心期的烟苗的地上部分喷施4次150mg/L的赤霉素，每次间隔2d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止。最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例6

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度27℃的条件下，对育苗盘上生长至五叶一心期的烟苗的地上部分喷施3次2.0mmol/L的水杨酸，每次间隔1.5d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止。最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例7

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度18℃的条件下，对育苗盘上生长至四叶一心期的烟苗的地上部分喷施2次1.0mmol/L的水杨酸，每次间隔2.5d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止。最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例8

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度30℃的条件下，对育苗盘上生长至三叶一心期的烟苗的地上部分喷施4次1.5mmol/L的水杨酸，每次间隔2d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止。最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例9

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度30℃的条件下，对育苗盘上生长至五叶一心期的烟苗的地上部分喷施3次100mg/L的多效唑，每次间隔1.5d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止。最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

实施例10

一种提高烟苗耐涝性的方法，包括：春天于大棚内温度18℃的条件下，对育苗盘上生长至三叶一心期的烟苗的地上部分喷施3次150mg/L的多效唑，每次间隔2.5d，每次喷施至烟苗全株淋湿，药液欲滴下为止。最后一次喷施完成后，至少保持2天，使烟苗对最后一次喷施的化学试剂进行吸收，缓冲。

试验例

采用由云南省玉溪中烟种子有限责任公司提供云烟97，将云烟97的包衣种子在温室大棚进行播种，采用漂浮育苗方式，按(GB/T25241.1-2010)的方法培育和管理烟苗。

具体实验操作步骤：待烟苗长到三叶一心期，将其平均分为四大组，每个大组平均分为三个小组，每种化学试剂设两个浓度，其中每个大组中的任意两个小组分别喷施不同浓度的同一化学试剂作为处理组，余下的一组同时以喷施蒸馏水作为对照组；每隔2天喷施一次，每次喷施时以全株淋湿，药液欲滴下为度，共喷施4次。本试验例中采用的具体浓度如下：3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333。本试验例中每个处理组的烟苗数为324株。于最后一次化学试剂喷施完成后，让各处理组烟苗继续置于育苗池内生长2天，然后进行淹水胁迫，此处所述的淹水胁迫为使用空心砖将育苗盘完全压进水中，以水漫过育苗盘为准。在淹水胁迫0天(当天)、3天、6天，取样测定相应指标。

每组试验重复3次，每次试验重复测定2次。试验原始数据计算用Excel 2003，统计分析用SPSS 11.5，作图用Sigma Plot 12.0。数据分析时采用单因素方差分析比较不同化学试剂处理组与对照组之间的差异显著性，图中小写字母表示差异显著(P＜0.05)。

①淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗农艺生长指标的影响

进行淹水胁迫0天、3天、6天，每个处理组随机选取60株长势均匀的烟苗，平均分为两组，每组分三个重复，洗净自然晾干，其中一组用来测量单株鲜重，具体操作如下：取样时，用吸水纸轻轻将叶片上残留的水分吸干，随机挑选出五株叶片比例较为适中的烟苗，用精确度为1％的天平直接称整株鲜重，再分别称其地上部分和地下部分鲜重；然后，将其置于烘箱内105℃杀青15min，再在烘箱70℃下烘至恒重。另一组用直尺测量其株高。

根据以上数据计算出相对生长速率。

式中：W₁、W₂分别表示在时间t₁和t₂时的干重。

1.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗株高的影响

从图1可以看出，进入淹水胁迫0天时，各处理组的株高与对照组(CK)相比，100和200mg/L GA3处理组的株高同比增加了74.3％、63.5％，差异显著。经过6天的淹水胁迫，烟苗株高呈明显的上升趋势。进入淹水胁迫3天时，与对照组相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA处理组的株高同比增加了16.6％、18.1％、89.3％、84.9％、22.4％，其中100和200mg/LGA3处理组的作用效果最好。进入淹水胁迫6天时，与对照组相比，3.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA处理组的烟苗株高同比增加了30.6％、98.3％、68.1％、34.1％，其中100mg/L GA3处理组的作用效果较好。结果表明，由于GA3有促进茎伸长的作用，经过GA3处理后，烟苗的株高明显增加，其中100mg/L GA3处理组的作用效果最好。

2.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗单株鲜重和单株干重的影响

从图2可看出，进入淹水胁迫0天时，与对照组相比，各处理组的烟苗的单株鲜重均有一定的增长，不同处理组的增长幅度不同，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、100和200mg/L PP333处理组的单株鲜重同比增加了27.9％、45.5％、26％、38.5％、45.5％，且差异显著。进入淹水胁迫6天时，各处理组烟苗的单株鲜重较之淹水胁迫0天时有所下降，但各处理组的单株鲜重几乎均高于对照组，与对照组相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100mg/L GA3、1.0mmol/L SA、200mg/LPP333处理组的单株鲜重同比增加了27％、25.9％、60.9％、29.8％、38％，其中100mg/L GA3处理组的作用效果最好。结果表明，在淹水胁迫条件下，各处理组烟苗的单株鲜重均提高，其中100mg/L GA3处理组的作用效果最显著。

如图2所示，进入淹水胁迫0天时，与对照组相比，各处理组烟苗的单株干重都呈增加趋势，不同处理组的增加幅度不同，100mg/L GA3、100和200mg/L PP333分别使单株干重同比增加了46.2％、38.3％、46.2％，且差异显著；进入淹水胁迫6天时，全部处理组与进入淹水胁迫0天时相比，单株干重有所降低，但均高于对照组，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的单株干重同比增加了36.7％、71.1％、38.4％、34.2％、62.5％、71.7％，其中100mg/L GA3、100和200mg/L PP333处理组的烟苗单株干重的作用效果均较好。结果表明，四种化学试剂都能促进烟苗单株干重的积累，提高烟苗的耐涝性，其中100mg/L GA3、100和200mg/L PP333处理组的作用效果最好。

3.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗相对生长速率和干物质积累速率的影响

从图3可以看出，在淹水胁迫条件下，与对照组相比，各处理组烟苗的相对生长速率都有增大的趋势，且各个处理组与对照组相比差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的相对生长速率同比增加了27.6％、30％、39.5％、27.8％、43.6％、22.1％、40％、40％。说明在淹水胁迫条件下，上述不同浓度的化学试剂都能促进烟苗的生长发育，增强其抵抗淹水逆境的能力，其中3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的处理作用效果均较好。

如图3所示，对8个处理组以及对照组的测定表明，在淹水胁迫中，各个浓度的化学试剂均对烟苗的干物质积累速率都有一定的促进作用，具体促进程度不同，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组烟苗的干物质积累速率同比增加了14.8％、10.8％、4.6％、6.8％、31.3％、7.4％、10.8％、5.7％，其中1.0mmol/L SA处理组的作用效果最佳，能有效提高烟苗在淹水胁迫下的干物质积累速率，说明喷施1.0mmol/L SA对淹水胁迫下烟苗的耐涝性有一定的提高。

②淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗的生理生化指标的影响

1.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗脯氨酸的影响

采用酸性茚三酮比色法测定：准确称取待测叶片0.5g，置于研钵中，用5ml浓度为3％的磺基水杨酸溶液研磨成匀浆，即脯氨酸提取液。所得匀浆在5000r/min下离心10min。吸取2ml提取液于另一干净的具塞玻璃试管中，加入2ml冰醋酸及3ml浓度为2.5％酸性茚三酮试剂(用冰乙酸和6mol/L磷酸以3:2的比例混合配置而成)，混合均匀后于沸水浴中加热30min。冷却后加入4ml甲苯，用磁力震荡器震荡10s。在4℃冰箱储存2h后，室温平衡30min，用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照组，在分光光度计上520nm波长处比色，根据标准曲线计算脯氨酸含量。脯氨酸含量的计算公式如下：

脯氨酸含量(mg.g^-1DW)＝C×V/(W×v×1000×地上部干物质含量)；

式中C为脯氨酸含量，V为提取液总体积，W为样品质量，v为测定液体积。

由图4可以看出，进入淹水胁迫0天时，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的处理组烟苗的脯氨酸含量同比增加了155.5％、245.1％、448.3％、165.6％、196.7％、215.6％、316.8％，其中200mg/L GA3处理作用效果最好。经过6天的淹水胁迫，脯氨酸含量呈明显上升的趋势。进入淹水胁迫3天时，各处理组与对照组相比，均差异显著，且3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的脯氨酸含量同比增加了32.3％、72.6％、198.3％、106.2％、39.6％、23.3％、45.2％、106.5％，其中100mg/L GA3处理组的作用效果最好；进入淹水胁迫6天时，各处理与对照组相比，均差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的脯氨酸含量同比增加了112.3％、206.8％、310.6％、101.6％、121.6％、23.2％、64.9％、106.3％，其中100mg/L GA3处理组的作用效果最好。结果表明，各处理组均能通过提高脯氨酸的含量来抵抗外界的淹水，不同化学试剂对提高烟苗脯氨酸含量的效果不同，其中100mg/L GA3处理组的作用效果最好。

2.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗电解质渗透率的影响

叶片电解质渗漏率测定采用电导法：选取完整的烟叶，将烟叶用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干叶片表面水分，避开主脉和侧脉，用打孔器打取小圆片。将小圆片充分混匀后取30片，每10片做一个重复，置于盛有25ml蒸馏水的具塞试管中。用去离子水轻轻摇晃清洗几次，定容到25ml于真空泵中抽气1h，然后用25℃震荡水浴锅温浴2h后，用DDS-11A电导仪测定渗出液电导值E1。再将试管置于水浴锅沸水浴30min，杀死叶片组织，待冷却后用25℃震荡水浴锅震荡1h，测定渗出液电导值E2，以相对电导率表示叶片电解质渗漏率，计算方法为：

式中E0为去离子水电导值。

由图5可以看出，进入淹水胁迫0天时，与对照组相比，各处理组烟苗的叶片电解质渗漏率均有所下降，但各处理组的叶片电解质渗漏率的下降幅度不同，其中，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、1.0mmol/L SA、100mg/L PP333处理组的烟苗的叶片电解质渗透率同比降低了44.5％、14.5％、12.2％、20.7％，其中6.0mmol/L CaCl₂处理组作用效果均最好。经过6天的淹水胁迫，电解质渗透率呈先上升后下降的过程。进入淹水胁迫3天时，与对照组相比，各处理组烟苗的叶片电解质渗漏率均低于对照组，其中，1.0mmol/L SA、200mg/L PP333处理组的电解质渗透率同比降低了15.9％、16.1％，且差异显著。进入淹水胁迫6天时，各处理烟苗的叶片电解质渗透率均低于对照组，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的电解质渗透率同比降低了22.5％、17.5％、36.2％、21.7％、39.4％、36.1％、23.5％、43.8％，其中100mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、200mg/L PP333处理组的作用效果最好。结果表明，各处理组均能降低淹水逆境对细胞膜的损伤，其中1.0mmol/L SA、200mg/L PP333处理组的作用效果最好，最大程度提高了烟苗的耐涝性。

3.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗丙二醛(MDA)的影响

采用硫代巴比妥酸(TCA)法测定：称取0.5g待测烟苗的烟叶于预冷的研钵中，加入4ml浓度为10％的三氯乙酸(TCA)，研磨后所得匀浆在离心机4000r/min下离心L 0min。取上清液2ml，加入0.6％硫代巴比妥酸(TBA)2ml，混匀后沸水浴15min，冷却后再离心一次。取上清液，用紫外/可见分光光度计测定450nm，532nm和600nm下的吸光值，对照组以2m1蒸馏水代替提取液。按以下公式计算出MDA浓度，再算出MDA含量(μmol.g^-1DW)。

MDA浓度C(μmol/L)＝6.45×(A532-A600)-0.56×A450；

MDA含量(μmol.g^-1DW)＝C×V₁×V₂×10^-3/(m×V₃×地上部干物质含量)；

式中V₁为提取液总体积，V₂为反应液总体积，V₃为参加反应的提取液体积，m为样品质量。

由图6可以看出，进入淹水胁迫0天时，与对照组相比，各处理组烟苗的MDA的含量均有所降低，3.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、100和200mg/L PP333处理组烟苗的MDA的含量分别同比降低了11.4％、18.5％、23.9％、21％、20％，其中100和200mg/L GA3、100和200mg/L PP333处理组的作用效果较好。经淹水胁迫6天中MDA含量呈先上升后下降。进入淹水胁迫3天时，不同处理组与0天时的含量相比，增加幅度不同；与对照组相比，MDA的含量均有所降低，且差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的MDA的含量分别同比降低了33.8％、20.1％、26.9％、26.3％、29.4％、13.5％、38.4％、9.4％，其中3.0mmol/L CaCl₂和100mg/L PP333处理组作用效果较好。进入淹水胁迫6天时，所有处理组的MDA含量比进入淹水胁迫3天时有所下降，但高于进入淹水胁迫0天时各处理组的MDA含量；各处理MDA含量下降程度不同，与对照组相比，3.0mmol/L CaCl₂、100mg/L GA3、100mg/L PP333的对照组的MDA含量同比降低了16.9％、26.7％、18.9％，且差异显著。结果表明，各处理组均能缓解淹水胁迫对膜脂系统的破坏，其中3.0mmol/L CaCl₂、100mg/L PP333的处理组的作用效果最好，极大降低了淹水胁迫对细胞的损害。

4.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗根系活力的影响

根系活力测定用TTC法：称取根尖样品0.5g，放入锥形瓶中，加入浓度为0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液各5ml，将根充分浸没在溶液内，在37℃水浴锅中暗保温1.5h。保温完后加入1mol·L^-1硫酸2ml，以停止反应。把根取出，吸干水分后用1ml乙酸乙酯在研钵内磨碎，以提出甲腙。将红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯洗涤残渣到无红色为止，将溶液全部倒入试管，最后定容到5ml，于485nm波长下测定吸光度，以乙酸乙酯作空白对照组，查标准曲线，得到四氮唑还原量，根据公式计算根系活力。

由图7可以看出，不同浓度的化学试剂对淹水胁迫条件下烟苗根系活力的影响不同。进入淹水胁迫0天时，与对照组相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的处理组的根系活力同比增加了83.9％、7％、24.6％、40.8％、60.2％、35.9％、84.8％，其中3.0mmol/L CaCl₂、200mg/L PP333的处理组作用效果显著。经过淹水胁迫6天，根系活力持续呈下降的趋势。进入淹水胁迫3天时，与对照组相比，各处理组的烟苗根系活力均高于对照组，且差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的处理组的根系活力同比增加了100.4％、40.4％、67.2％、74.6％、119.4％、51.7％、119.3％、150.1％，其中200mg/L PP333处理组的根系活力最大。进入淹水胁迫6天时，与对照组相比，各处理的烟苗根系活力均高于对照组，且差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的根系活力同比增加了121.3％、46.5％、89.3％、50.1％、262％、219.4％、173％、108.9％，其中1.0mmol/L SA处理组的作用效果较好。结果表明，1.0mmol/L SA和200mg/L PP333处理组的作用效果最好，增强了淹水胁迫下烟苗的根系活力，使烟苗能更好的适应了逆境环境。

③淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗光合特性的影响

不同化学试剂处理条件下，对淹水下烟苗净光合速率、胞间CO₂浓度、气孔导度、蒸腾速率参数的测定采用LI-6400XT光合仪(LI-COR，美国)于人工气候室活体测定，具体操作方式参照柯学等人所著文章《不同光质对烟草叶片生长及光合作用的影响》中对净光合速率测定的方法。

1.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗总叶绿素的影响

称取0.2g样品放入研钵中，加少量石英砂、碳酸钙和2ml浓度为95％乙醇，研磨成匀浆，再加少量95％乙醇，继续研磨至组织变白，静置3～5min。取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻璃棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量95％乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。冲洗滤纸，直至滤纸和残渣中无绿色为止，最后定容至25ml，摇匀。用紫外/可见分光光度计测定665nm、649nm和470nm波长下的吸光度，以95％乙醇为空白对照组。根据公式算出总叶绿素含量(mg.g-1DW)。

式中v为提取液体积(ml)，n为稀释倍数，w为样品质量。

由图8可以看出，进入淹水胁迫0天时，不同处理组的作用效果不同，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的总叶绿素含量同比增加了29.7％、15.2％、9.6％、30.7％、42.7％、23.2％，其中100mg/L PP333处理组的总叶绿素含量最高。经过淹水胁迫6天，总叶绿素呈缓慢下降。进入淹水胁迫3天时，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的总叶绿素含量同比增加了39.9％、23.8％、37.2％、9.9％、32.1％、28.5％，其中6.0mmol/L CaCl₂和1.0mmol/L SA处理组的作用效果最好。进入淹水胁迫6天时，与对照组相比，各处理均高于对照组，且差异显著，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的总叶绿素含量同比增加了5.7％、43.5％、27.9％、7％、44.3％、11.8％、33.7％、33.1％，其中6.0mmol/L CaCl₂和1.0mmol/L SA处理组的效果较好。结果表明，6.0mmol/L CaCl₂、1.0mmol/L SA、100mg/L PP333处理组作用效果最好，显著提高了总叶绿素含量。

2.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗净光合速率的影响

由图9可看出，进入淹水胁迫0天时，各处理的净光合速率均大于对照组，且差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的净光合速率同比增加了110.8％、146.7％、183.8％、116.5％、82.4％、21.7％、142.9％、163.7％，其中100mg/L GA3处理组的作用效果较好。经过淹水胁迫6天，净光合速率呈持续下降。进入淹水胁迫3天时，与对照组相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的净光合速率同比增加了21.4％、121.9％、175.7％、111.2％、81.2％、128.7％、168.1％，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333处理组的作用效果较好。进入淹水胁迫6天时，各处理组的净光合速率均大于对照组，且差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的净光合速率同比增加了55％、103％、50.7％、126.7％、137.6％、56％、134.8％、59.8％31.2％、141.9％、209.5％、137.5％、121.9％、26.7％、147.1％、180.1％，其中100mg/L GA3处理组的作用效果最好。结果表明，各处理组均能提高烟苗净光合速率，不同处理组的作用效果不同，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333处理组的作用效果最好，促进烟苗能更好的适应逆境环境。

3.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗胞间CO₂浓度的影响

从图10可以看出，进入淹水胁迫0天时，各处理组的胞间CO₂浓度均显著高于对照组，且差异显著，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的胞间CO₂浓度同比增加了35.1％、115.6％、86.4％、36.4％、85.2％、66％、60.9％、90.1％，其中6.0mmol/L CaCl₂、100mg/L GA3、1.0mmol/L SA、200mg/L PP333处理组的作用效果均较好。经过淹水胁迫下6天，烟苗胞间CO₂浓度呈持续上升。进入淹水胁迫3天时，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的胞间CO₂浓度同比增加了39.3％、28％、30％、17％、15.2％、17.4％、24.1％，其中6.0mmol/L CaCl₂处理组的作用效果较好；进入淹水胁迫6天时，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0和2.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的胞间CO₂浓度同比增加了41.5％、22.9％、29.2％、13.4％、19.2％、18.9％、26.3％，其中6.0mmol/L CaCl₂处理组的效果较好。结果表明，在淹水逆境下各处理均能提高胞间CO₂浓度，其中6.0mmol/L CaCl₂处理作用效果最好。

4.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗气孔导度的影响

从图11可以看出，进入淹水胁迫0天时，各处理组的作用效果不同，与对照组相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的气孔导度同比增加了92.1％、420.5％、411.5％、287.8％、133％、140.1％、289.5％，其中6.0mmol/L CaCl₂处理组和100mg/L GA3处理组作用效果较好。经过6天的淹水胁迫后，气孔导度呈下降。进入淹水胁迫3天时，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333分别使气孔导度同比增加了531.5％、352％、253.2％、193.2％、116.9％、367.3％，其中6.0mmol/L CaCl₂处理组效果较好；进入淹水胁迫6天时，与对照组相比，6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的气孔导度同比增加了470.2％、287.5％、87.2％、187.8％、101.5％、332.3％，其中6.0mmol/L CaCl₂处理组的效果较好。结果表明，各处理组均能提高烟苗气孔导度，其中6.0mmol/L CaCl₂处理组的作用效果最好。

5.淹水胁迫过程中不同化学试剂对烟苗蒸腾速率的影响

从图12可以看出，进入淹水胁迫0天时，与对照组相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的蒸腾速率同比增加了147％、347.2％、343.8％、290.2％、195.5％、176.4％、315.8％，其中6.0mmol/L CaCl₂、100mg/L GA3、200mg/L PP333处理组的作用效果均较好。经过6天的淹水胁迫后，蒸腾速率呈下降趋势。进入淹水胁迫3天时，各处理的蒸腾速率均高于对照组，且差异显著，与对照比相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333处理组的蒸腾速率同比增加了102.4％、406.1％、590.7％、288.7％、360.9％、87.7％、229.7％、587.3％，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333处理组的作用效果较好。进入淹水胁迫6天时，与对照组相比，3.0和6.0mmol/L CaCl₂、100和200mg/L GA3、1.0mmol/L SA、100和200mg/L PP333的处理组的蒸腾速率同比增加了92.8％、423.8％、473.7％、236％、307.8％、223.6％、534.1％，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333处理组的作用效果较好。结果表明，各处理组均能提高烟苗的蒸腾速率，其中100mg/L GA3、200mg/L PP333处理组的作用效果最好，蒸腾速率最大。

基于上述结果可得，四种化学试剂总体上提高了烟草幼苗的素质，在淹水条件下，经四种化学试剂处理的烟苗与对照组相比，可保持较高的单株干重、相对生长速率、干物质积累速率、根系活力、脯氨酸含量、叶绿素含量、净光合速率、胞间CO₂浓度、气孔导度和蒸腾速率，缓解逆境诱导的MDA积累和电解质渗透率，最终提高烟苗的耐涝性。其中，1.0mmol/L SA可以显著促进烟苗的相对生长速率、干物质积累速率的增加。1.0mmol/L SA和100mg/L PP333可以显著降低烟苗的电解质渗透率，提高根系活力。100mg/L GA3和200mg/L PP333可以显著提高烟苗的净光合速率、蒸腾速率。

综上所述，本发明实施例提供的一种提高烟苗耐涝性的方法，可有效提高烟苗的耐涝性，并且提高烟苗的素质，提高其产量和烟叶的品质，具有优异的农业推广价值。

以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。