【
技术领域：
】本发明涉及植物繁殖
技术领域：
，具体涉及一种万代兰的种子繁殖方法。
背景技术：
：万代兰又称万带兰，为兰科万代兰属典型附生兰，为单轴茎的热带兰，没有假鳞茎，有明显茎干，坚固而直立。植株差异大，小株高30cm左右，大植株可达2m以上。茎上具多数粗壮的气生根，根长可达1m以上。叶片在茎两侧排成两列，带状或圆柱状，革质，绿色。叶表面有较厚的角质层，具较强的抗旱性。总状花序从叶腋间抽出，有花10～20朵，每朵花能开2～3周，从下往上依次开放。万代兰花朵硕大，花姿奔放，花色丰富，有白、黄、粉、红、褐及兰花中极为稀有的蓝色花，并具有深色的方格形网状脉纹。万代兰花芽易分化，花期长，栽培容易，生长快，适应性强，是很好的观赏花卉。长期以来，万代兰以分株繁殖为主，但繁殖速度慢。想要在短时间内得到更多的植株，可以利用组织培养的方式繁殖，国内对万代兰进行组培繁殖的报道很少。目前，也有一些学者研究了采用万代兰蒴果做外植体进行组织培养得到万代兰苗的方法，但由于相关的研究较少，没有找到更适合茎尖分化组织生长的培养基，导致组织培养过程中，培养周期长，培养成效不尽人意。技术实现要素：本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种万代兰的种子繁殖方法，为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种万代兰的种子繁殖方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：(1)外植体的消毒：采集万代兰授粉后的蒴果作为外植体，首先用流水冲洗，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1-2min，接着用质量浓度为0.1％的hgcl2液消毒10-15分钟，用无菌水冲洗2-4次，将果实两端切去，剖开果实，果实内的种子用于接种；(2)诱导培养：将所述果实内的种子均匀撒在诱导培养基内，在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照10-14h的条件下培养50-55天，得万代兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：vw+胺鲜酯1mg/l-2mg/l+辣木叶汁5.0g/l-8.0g/l+枸杞叶汁3.0g/l-5.0g/l；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的万代兰原球茎转接入继代培养基内，在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照10-14h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养80-85天后，得到长根长叶的万代兰幼株；(4)壮苗培养：将万代兰幼株转接到壮苗培养基中，培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到可以移栽的万代兰幼苗。本发明中，优选地，所述继代培养基的组成为:1/6ms+萘乙酸2mg/l-3mg/l+硝酸银1-2mg/l+琼脂5.0g/l-8.0g/l+辣木叶汁5.0g/l-8.0g/l+枸杞叶汁3.0g/l-5.0g/l+蔗糖2.0g/l-4.0g/l。本发明中，优选地，所述壮苗培养基的组成为1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.8mg/l-1.0mg/l+硝酸银1-2mg/l+琼脂5.0g/l-8.0g/l+辣木叶汁5.0g/l-8.0g/l+枸杞叶汁4.0g/l-6.0g/l+蔗糖2.0g/l-4.0g/l。本发明中，优选地，所述辣木叶汁和枸杞叶汁的制备方法是：先洗净叶片然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为相应的汁。综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：本发明采用的培养基中添加了辣木叶汁和枸杞叶汁作为营养物质，辣木叶中含有多种矿物质、维生素、20种氨基酸、46种抗氧素和36种自然防炎体和矿物质，每100克的辣木中含有的维生素c是柑橘的7倍，铁是菠菜的3倍，维生素a是胡萝卜的4倍，钙质是牛奶的4倍，钾是香蕉的3倍，蛋白质是酸奶的2倍；枸杞叶富含甜菜碱、芦丁以及多种氨基酸和微量元素等，这两种物质的联合添加，与生长调节剂、基础培养基一起作用，可以显著提高万代兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，并提高万代兰组培苗的质量。【具体实施方式】为了更清楚地表达本发明，以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。在本发明的实施例中，辣木叶汁、枸杞叶汁的制备方法如下：辣木叶汁：先洗净叶片然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为辣木叶汁。枸杞叶汁：先洗净叶片然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为辣木叶汁。在本发明的实施例中，培养基配制好后均按照现有技术的方法将ph值调到5.4-5.6。实施例1一种万代兰的种子繁殖方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：(1)外植体的消毒：采集万代兰授粉后的蒴果作为外植体，首先用流水冲洗，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1min，接着用质量浓度为0.1％的hgcl2液消毒10分钟，用无菌水冲洗2次，将果实两端切去，剖开果实，果实内的种子用于接种；(2)诱导培养：将所述果实内的种子均匀撒在诱导培养基内，在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照10h的条件下培养55天，得万代兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：vw+胺鲜酯1mg/l+辣木叶汁5.0g/l+枸杞叶汁5.0g/l；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的万代兰原球茎转接入继代培养基内，继代培养基的组成为:1/6ms+萘乙酸2mg/l+硝酸银1mg/l+琼脂5.0g/l+辣木叶汁5.0g/l+枸杞叶汁5.0g/l+蔗糖2.0g/l。在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照10h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养85天后，得到长根长叶的万代兰幼株；(4)壮苗培养：将万代兰幼株转接到壮苗培养基中，壮苗培养基的组成为1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.8mg/l+硝酸银1mg/l+琼脂5.0g/l+辣木叶汁5.0g/l+枸杞叶汁6.0g/l+蔗糖2.0g/l。培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到可以移栽的万代兰幼苗。实施例2一种万代兰的种子繁殖方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：(1)外植体的消毒：采集万代兰授粉后的蒴果作为外植体，首先用流水冲洗，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1.5min，接着用质量浓度为0.1％的hgcl2液消毒12分钟，用无菌水冲洗3次，将果实两端切去，剖开果实，果实内的种子用于接种；(2)诱导培养：将所述果实内的种子均匀撒在诱导培养基内，诱导培养基的组成为：vw+胺鲜酯1.5mg/l+辣木叶汁6.0g/l+枸杞叶汁4.0g/l；在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照12h的条件下培养50天，得万代兰原球茎；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的万代兰原球茎转接入继代培养基内，继代培养基的组成为:1/6ms+萘乙酸2.5mg/l+硝酸银1.5mg/l+琼脂6.0g/l+辣木叶汁6.0g/l+枸杞叶汁4.0g/l+蔗糖3.0g/l。在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照12h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养80天后，得到长根长叶的万代兰幼株；(4)壮苗培养：将万代兰幼株转接到壮苗培养基中，壮苗培养基的组成为1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+硝酸银1.5mg/l+琼脂6.0g/l+辣木叶汁6.0g/l+枸杞叶汁5.0g/l+蔗糖3.0g/l。培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到可以移栽的万代兰幼苗。实施例3一种万代兰的种子繁殖方法，包括外植体的消毒、诱导培养、继代培养及壮苗培养，具体步骤为：(1)外植体的消毒：采集万代兰授粉后的蒴果作为外植体，首先用流水冲洗，再用体积浓度为75％的酒精浸泡2min，接着用质量浓度为0.1％的hgcl2液消毒15分钟，用无菌水冲洗4次，将果实两端切去，剖开果实，果实内的种子用于接种；(2)诱导培养：将所述果实内的种子均匀撒在诱导培养基内，在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照14h的条件下培养52天，得万代兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：vw+胺鲜酯2mg/l+辣木叶汁8.0g/l+枸杞叶汁3.0g/l；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的万代兰原球茎转接入继代培养基内，继代培养基的组成为:1/6ms+萘乙酸3mg/l+硝酸银1mg/l+琼脂8.0g/l+辣木叶汁8.0g/l+枸杞叶汁3.0g/l+蔗糖4.0g/l。在温度为25±1℃，光照为2000lx，每天光照14h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养82天后，得到长根长叶的万代兰幼株；(4)壮苗培养：将万代兰幼株转接到壮苗培养基中，壮苗培养基的组成为1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸1.0mg/l+硝酸银2mg/l+琼脂8.0g/l+辣木叶汁8.0g/l+枸杞叶汁4.0g/l+蔗糖4.0g/l。培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到可以移栽的万代兰幼苗。对比例1采用香蕉泥代替辣木汁和枸杞叶汁，其他条件与实施例2相同，即诱导培养基的组成为：vw+胺鲜酯1.5mg/l+香蕉泥100g/l；继代培养基的组成为：1/6ms+萘乙酸2.5mg/l+硝酸银1.5mg/l+琼脂6.0g/l+香蕉泥100g/l+蔗糖3.0g/l；壮苗培养基的组成为1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+硝酸银1.5mg/l+琼脂6.0g/l+香蕉泥100g/l+蔗糖3.0g/l；采用实施例2相同的方法培养万代兰苗，培养过程中统计诱导分化率、外植体增殖系数及生根率。对比例2与实施例2中采用的培养基不同，具体培养基为：诱导培养基的组成为：vw+活性炭1g/l+6-ba3.0mg/l+naa0.1mg/l+香蕉泥80g/l；继代培养基的组成为：ms+6-ba2.5mg/l+naa0.3mg/l+香蕉泥80g/l；壮苗培养基的组成为：1/2ms+6-ba1.0mg/l+naa0.5mg/l+香蕉泥80g/l。采用实施例2相同的方法培养万代兰苗，培养过程中统计诱导分化率、外植体增殖系数及生根率。对比例3与实施例2中采用的培养基不同，具体培养基为：诱导培养基的组成为：vw+活性炭1g/l+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l+琼脂6g/l+蔗糖20g/l；继代培养基的组成为：ms+活性炭1g/l+6-ba1.0mg/l+naa0.5mg/l+琼脂6g/l+蔗糖20g/l；壮苗培养基的组成为：1/2ms+活性炭1g/l+6-ba1.0mg/l+naa0.5mg/l+琼脂6g/l+蔗糖20g/l。采用实施例2相同的方法培养万代兰苗，培养过程中统计诱导分化率、外植体增殖系数及生根率。组培试验方法及结果：每组取200个外植体样本，分别采用实施例1-3以及对比例1-3的方法进行组培，将万代兰的外植体诱导培养55天后，统计各组外植体的分化增殖情况，将诱导培养的原球茎继代培养85天后，统计平均芽分化率和平均生根率；继续壮苗培养65天后统计平均根长，各组的结果如表1所示。表1组培生长情况结果实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2对比例3平均茎长(cm)3.03.83.52.02.42.7增值系数6.36.86.53.84.04.0平均芽分化率(％)62.364.062.038.542.546.5平均生根率(％)84.589.088.042.950.048.6平均根长2.32.52.41.721.801.85从表2的结果可以看出，相对于对比例1，实施例1-3的平均茎长、增殖系数平均芽分化率、平均生根率、平均根长均明显较好，说明相较添加香蕉泥，采用辣木叶汁和枸杞叶汁相配合作为营养剂，使培养基的组成更适合万代兰外植体的生长。相对于对比例2、3，实施例1-3因为采用的培养基不同，各个阶段的生长情况也明显较好。上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。当前第1页12