本发明涉及植物栽培技术领域，涉及一种木槿组培再生的方法。
背景技术：
木槿为锦葵科木槿属落叶灌木或者小乔木，是一种常见的庭园灌木花种，现在也广泛应用于城市绿化和园林绿化中，常作为观赏植物而被广泛栽种，在我国和全世界各地均有种植。木槿的繁殖方法主要分为有性繁殖和无性繁殖，其中有性繁殖主要用于木槿新品种的培育无性繁殖主要用于木槿育苗造林。无性繁殖主要包括扦插、分株、压条、组培等方法。为了形成木槿规模化生产，探索出一种适合木槿组织快繁的方法是很有必要的。
技术实现要素：
本发明是为了克服现有技术的不足，提供一种生长周期短，生长效果好，扩繁快的木槿组培繁殖方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种木槿组培再生的方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取木槿当年生未木质化枝条作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得木槿初始芽，再将木槿初始芽转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长1-1.5cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根木槿；主要包括如下步骤：
（1）外植体处理：选取木槿当年生未木质化枝条作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度10g/l硫酸铜溶液中浸泡15-20min，用清水洗净后用体积浓度0.15%甲基托布津溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；
（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的木槿当年生未木质化枝条的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度500-1000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-22d，培养得到木槿初始芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的木槿初始芽转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度22-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；
（4）生根培养：将步骤（3）中分化出的芽长至1-1.5cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-30d，得到生根木槿。
以上步骤（2）所述的诱导培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba6.0-8.0mg/l+iba2.0-3.0mg/l+vc15mg/l+赤霉素50mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
以上步骤（3）所述的增殖培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba3.0-5.0mg/l+naa1.5-2.0mg/l+zt0.1-0.5mg/l+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素50mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上步骤（4）所述的生根培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba1.5-2.0mg/l+naa0.5-1.0mg/l+vc10mg/l+vb220mg+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的1/2改良ms培养基的配方为：kno31350mg·l-1；nh4no3420mg·l-1；cacl2·2h2o260mg·l-1；mgso4·7h2o370mg·l-1；ca(no3)2·4h2o280mg·l-1；kh2po4150mg·l-1；mnso4·h2o22.3mg·l-1；znso4·7h2o8.6mg·l-1；cuso4·5h2o0.025mg·l-1；h3bo36.2mg·l-1；na2moo4·2h2o0.025mg·l-1；ki0.83mg·l-1；cocl2·6h2o0.025mg·l-1；维生素b11.0mg·l-1；维生素b60.5mg·l-1；烟酸0.5mg·l-1；甘氨酸2.0mg·l-1；肌醇200mg·l-1。
本发明具有的优点及有益效果如下：
1、本发明以木槿当年生未木质化枝条作为外植体，经过诱导培养基培养，木槿腋芽萌发率高达100%；经过增殖培养后腋芽增殖率高，且每个外植体可产生8-10个不定芽，再将不定芽接入生根培养基中培养，生根率达到100%。
2、本发明对ms基本培养基进行了改良，迅速有效的抑制木槿组培芽的褐死，同时加入促进芽生长并且粗壮的氨基酸和维生素，使得培养基的营养更加全面，更有效的促使木槿芽诱导的发生、增殖和生根，实现大量增殖。
3、本发明通过对木槿的未木质化枝条进行诱导、增殖、生根，快速获得木槿组培苗，生根快，缩短了木槿组培时间，成本低，同时提高了木槿成活、分化和生根率，为木槿的快速繁殖和规模化生产提供了重要的技术支持，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：
选取木槿当年生未木质化枝条作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度10g/l硫酸铜溶液中浸泡15min，用清水洗净后用体积浓度0.15%甲基托布津溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用。
将处理后的木槿当年生未木质化枝条的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度500lx，培养温度22-25℃，培养时间20-22d，培养得到木槿初始芽，初始芽诱导率达99%；其中，所述的诱导培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba6.0mg/l+iba2.0mg/l+vc15mg/l+赤霉素50mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
将得到的木槿初始芽转接到增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度3000lx，培养温度22-25℃，培养时间20-25d，分化出芽；其中，所述的增殖培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba3.0mg/l+naa1.5mg/l+zt0.1mg/l+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素50mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
将增殖分化出的芽长至1-1.5cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500lx，培养温度22-25℃，培养时间20-30d，得到生根木槿，生根率达到100%；其中，所述的生根培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba1.5mg/l+naa0.5mg/l+vc10mg/l+vb220mg+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的1/2改良ms培养基的配方为：kno31350mg·l-1；nh4no3420mg·l-1；cacl2·2h2o260mg·l-1；mgso4·7h2o370mg·l-1；ca(no3)2·4h2o280mg·l-1；kh2po4150mg·l-1；mnso4·h2o22.3mg·l-1；znso4·7h2o8.6mg·l-1；cuso4·5h2o0.025mg·l-1；h3bo36.2mg·l-1；na2moo4·2h2o0.025mg·l-1；ki0.83mg·l-1；cocl2·6h2o0.025mg·l-1；维生素b11.0mg·l-1；维生素b60.5mg·l-1；烟酸0.5mg·l-1；甘氨酸2.0mg·l-1；肌醇200mg·l-1。
实施例2：
选取木槿当年生未木质化枝条作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度10g/l硫酸铜溶液中浸泡18min，用清水洗净后用体积浓度0.15%甲基托布津溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用。
将处理后的木槿当年生未木质化枝条的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度1000lx，培养温度25-26℃，培养时间20-22d，培养得到木槿初始芽，初始芽诱导率达99%；其中，所述的诱导培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba7.5mg/l+iba2.5mg/l+vc15mg/l+赤霉素50mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
将得到的木槿初始芽转接到增殖培养基中，光照时间11h/d，光照强度3000lx，培养温度25-26℃，培养时间20-25d，分化出芽；其中，所述的增殖培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba3.5mg/l+naa1.8mg/l+zt0.4mg/l+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素50mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
将增殖分化出的芽长至1-1.5cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度200lx，培养温度25-26℃，培养时间20-30d，得到生根木槿，生根率达到100%；其中，所述的生根培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba1.8mg/l+naa0.8mg/l+vc10mg/l+vb220mg+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的1/2改良ms培养基的配方为：kno31350mg·l-1；nh4no3420mg·l-1；cacl2·2h2o260mg·l-1；mgso4·7h2o370mg·l-1；ca(no3)2·4h2o280mg·l-1；kh2po4150mg·l-1；mnso4·h2o22.3mg·l-1；znso4·7h2o8.6mg·l-1；cuso4·5h2o0.025mg·l-1；h3bo36.2mg·l-1；na2moo4·2h2o0.025mg·l-1；ki0.83mg·l-1；cocl2·6h2o0.025mg·l-1；维生素b11.0mg·l-1；维生素b60.5mg·l-1；烟酸0.5mg·l-1；甘氨酸2.0mg·l-1；肌醇200mg·l-1。
实施例3：
选取木槿当年生未木质化枝条作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度10g/l硫酸铜溶液中浸泡20min，用清水洗净后用体积浓度0.15%甲基托布津溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用。
将处理后的木槿当年生未木质化枝条的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度1000lx，培养温度26-28℃，培养时间20-22d，培养得到木槿初始芽，初始芽诱导率达99%；其中，所述的诱导培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba8.0mg/l+iba3.0mg/l+vc15mg/l+赤霉素50mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
将得到的木槿初始芽转接到增殖培养基中，光照时间12h/d，光照强度3500lx，培养温度26-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；其中，所述的增殖培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba5.0mg/l+naa2.0mg/l+zt0.5mg/l+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素50mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
将增殖分化出的芽长至1-1.5cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度2000lx，培养温度26-28℃，培养时间20-30d，得到生根木槿，生根率达到100%；其中，所述的生根培养基的配方为：1/2改良ms培养基+6-ba2.0mg/l+naa1.0mg/l+vc10mg/l+vb220mg+l-半胱氨酸10mg/l+赤霉素30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的1/2改良ms培养基的配方为：kno31350mg·l-1；nh4no3420mg·l-1；cacl2·2h2o260mg·l-1；mgso4·7h2o370mg·l-1；ca(no3)2·4h2o280mg·l-1；kh2po4150mg·l-1；mnso4·h2o22.3mg·l-1；znso4·7h2o8.6mg·l-1；cuso4·5h2o0.025mg·l-1；h3bo36.2mg·l-1；na2moo4·2h2o0.025mg·l-1；ki0.83mg·l-1；cocl2·6h2o0.025mg·l-1；维生素b11.0mg·l-1；维生素b60.5mg·l-1；烟酸0.5mg·l-1；甘氨酸2.0mg·l-1；肌醇200mg·l-1。