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技术领域：
】本发明涉及植物组织培养
技术领域：
，具体涉及一种斑舌兰的组培快繁培养基。
背景技术：
：斑舌兰是兰花的一种，因其独特的花朵形态而得名,是兰花中的名品。斑舌兰的萼片与花瓣黄绿色，略有红褐色晕，基部有紫褐色斑点，唇瓣白色，授粉后变为粉红色；花瓣略短于萼片；唇瓣近倒卵形，3裂。作为国家重点保护植物，是家庭养殖中最难得的兰花品种。但因其高洁的文化品格,让文人雅士对其青睐有加。长期以来，斑舌兰以分株繁殖为主，但繁殖速度慢。想要在短时间内得到更多的植株，可以利用组织培养的方式繁殖，国内对斑舌兰进行组培繁殖的报道很少。目前，也有一些学者研究了采用斑舌兰假鳞茎做外植体进行组织培养得到斑舌兰苗的方法，但由于相关的研究较少，没有找到更适合假鳞茎分化组织生长的培养基，导致组织培养过程中，培养周期长，培养成效不尽人意。技术实现要素：本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种斑舌兰的组培快繁培养基，采用本发明提供的培养基配方可显著提高斑舌兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，提高斑舌兰组培苗的质量。为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种斑舌兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：诱导培养基：ls培养基+玉米素0.5mg/l-0.8mg/l+ggr0.1mg/l-0.2mg/l+琼脂5.0g/l-8.0g/l+蔗糖2.0g/l-4.0g/l+黄秋葵汁8.0g/l-12.0g/l+辣木叶汁12.0g/l-15.0g/l，ph值5.2-5.3；继代培养基：ls培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.8mg/l-1.0mg/l+ggr0.4mg/l-0.6mg/l+琼脂5.0g/l-8.0g/l+黄秋葵汁8.0g/l-12.0g/l+辣木叶汁12.0g/l-15.0g/l+蔗糖2.0g/l-4.0g/l，ph值5.2-5.3；壮苗培养基：1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.8mg/l-1.0mg/l+萘乙酸0.3mg/l-0.5mg/l+琼脂5.0g/l-8.0g/l+黄秋葵汁8.0g/l-12.0g/l+辣木叶汁12.0g/l-15.0g/l+蔗糖2.0g/l-4.0g/l，ph值5.4-5.6。本发明中，优选地，所述诱导培养基的组成为：ls培养基+玉米素0.6mg/l+ggr0.15mg/l+琼脂6.0g/l+蔗糖3.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁13.0g/l，ph值5.2。本发明中，优选地，所述继代培养基的组成为：ls培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.9mg/l+ggr0.5mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.3。本发明中，优选地，所述壮苗培养基的组成为：1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+萘乙酸0.4mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.6。本发明中，优选地，所述辣木叶汁的制备方法是：先洗净原料，然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为辣木叶汁。本发明中，优选地，所述黄秋葵汁是将黄秋葵表皮洗净后，用机器搅打成汁得到的。综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：本发明的培养基适合以斑舌兰的假鳞茎做外植体进行的组织培养，该培养基中添加了添加了辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养物质，辣木叶中含有多种矿物质、维生素、20种氨基酸、46种抗氧素和36种自然防炎体和矿物质，每100克的辣木中含有的维生素c是柑橘的7倍，铁是菠菜的3倍，维生素a是胡萝卜的4倍，钙质是牛奶的4倍，钾是香蕉的3倍，蛋白质是酸奶的2倍。黄秋葵的营养丰富，幼果中含有大量的粘滑汁液，具有特殊的香味；其汁液中混有果胶，牛乳聚糖及阿拉聚糖等；它的果胶为可溶性纤维，在现代保健新观念中极为重视；凡经常食用它有健胃肠，滋补阴阳之功效；据测定每百克嫩果中含蛋白质2.5克、脂肪0.1克、糖类2.7克，纤维素a660国际单位；维生素b1，0.2毫克、维生素b20.06毫克、维生素44毫克、钙81毫克、磷63毫克、铁0.8毫克。这两种物质的联合添加，与生长调节剂赤霉素、ggr、玉米素、吲哚丁酸、萘乙酸、基础培养基ls和1/3ms一起作用，可以显著提高斑舌兰的诱导分化率、外植体增殖系数及生根率，缩短培养周期，并提高斑舌兰组培苗的质量。【具体实施方式】为了更清楚地表达本发明，以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。在本发明的实施例中，辣木叶汁、黄秋葵汁的制备方法如下：辣木叶汁：先洗净叶片然后充分捣碎，再用纱布过滤，所述滤液即为辣木叶汁。黄秋葵汁：先洗净表皮然后充分捣碎，用机器搅打成汁即得。本发明的实施例中，以斑舌兰的假鳞茎做外植体，利用各实施例中的培养基来进行组织培养，具体的培养方法如下：(1)外植体的消毒：采集长度为5-7cm的斑舌兰假鳞茎作为外植体，首先用流水冲洗，再用体积浓度为75％的酒精浸泡1.5min后剥去表面部分叶片，接着在质量浓度为0.1％的次氯酸钠中浸泡12min后继续剥去部分叶片，随后在质量浓度为0.1％的次氯酸钠中继续浸泡8min，用无菌水冲洗3次，最后移入超净工作台内，在解剖镜下剥去剩下的叶片，露出生长点，用解剖刀切取0.5-2mm大小的茎尖分生组织；(2)诱导培养：将所述茎尖分生组织接种在诱导培养基内，在温度为25±1℃的条件下暗培养11天，然后移至光照照度为1500lx的室内，每天光照12h的培养40天，得斑舌兰原球茎；所述诱导培养基的组成为：ls培养基+玉米素0.6mg/l+ggr0.15mg/l+琼脂6.0g/l+蔗糖3.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁13.0g/l，ph值5.2；(3)继代培养：将步骤(2)中生长得到的斑舌兰原球茎转接入继代培养基内，继代培养基的组成为：ls培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.9mg/l+ggr0.5mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.3。在温度为25±1℃，光照为1500lx，每天光照12h的条件下培养，随着原球茎的生长不断更换培养基，继代培养75天后，分化得到大量不定芽；(4)壮苗培养：将斑舌兰幼株转接到壮苗培养基中，壮苗培养基的组成为：1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+萘乙酸0.4mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.6。培养至根数为3-5条，叶片3-4片，苗高4-8cm，即得到生根试管苗；(5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗6天，打开瓶盖再炼苗2天，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70-80％。实施例1一种斑舌兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：诱导培养基：ls培养基+玉米素0.5mg/l+ggr0.1mg/l+琼脂5.0g/l+蔗糖2.0g/l+黄秋葵汁8.0g/l+辣木叶汁15.0g/l，ph值5.2；继代培养基：ls培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.8mg/l+ggr0.4mg/l+琼脂5.0g/l+黄秋葵汁8.0g/l+辣木叶汁15.0g/l+蔗糖2.0g/l，ph值5.2；壮苗培养基：1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.8mg/l+萘乙酸0.3mg/l+琼脂5.0g/l+黄秋葵汁8.0g/l+辣木叶汁15.0g/l+蔗糖2.0g/l，ph值5.4。实施例2一种斑舌兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：诱导培养基：ls培养基+玉米素0.6mg/l+ggr0.15mg/l+琼脂6.0g/l+蔗糖3.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁13.0g/l，ph值5.2。继代培养基：ls培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.9mg/l+ggr0.5mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.3。壮苗培养基：1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+萘乙酸0.4mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.6。实施例3一种斑舌兰组培快繁培养基，包括诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基，各培养基的具体组成如下：诱导培养基：ls培养基+玉米素0.8mg/l+ggr0.2mg/l+琼脂8.0g/l+蔗糖4.0g/l+黄秋葵汁12.0g/l+辣木叶汁12.0g/l，ph值5.3；继代培养基：ls培养基+活性炭1g/l+赤霉素1.0mg/l+ggr0.6mg/l+琼脂8.0g/l+黄秋葵汁12.0g/l+辣木叶汁12.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.3；壮苗培养基：1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸1.0mg/l+萘乙酸0.5mg/l+琼脂8.0g/l+黄秋葵汁12.0g/l+辣木叶汁12.0g/l+蔗糖4.0g/l，ph值5.6对比例1采用ms培养基代替诱导培养基和继代培养基中的ls和1/3ms，具体如下：诱导培养基：ms培养基+玉米素0.6mg/l+ggr0.15mg/l+琼脂6.0g/l+蔗糖3.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁13.0g/l，ph值5.2。继代培养基：ms培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.9mg/l+ggr0.5mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.3。壮苗培养基：ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+萘乙酸0.4mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.6。。对比例2采用vw培养基代替诱导培养基和继代培养基中的ls和1/3ms，具体如下：诱导培养基：vw培养基+玉米素0.6mg/l+ggr0.15mg/l+琼脂6.0g/l+蔗糖3.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁13.0g/l，ph值5.2。继代培养基：vw培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.9mg/l+ggr0.5mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.3。壮苗培养基：vw+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+萘乙酸0.4mg/l+琼脂6.0g/l+黄秋葵汁10.0g/l+辣木叶汁14.0g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.6。对比例3诱导培养基：ls培养基+玉米素0.6mg/l+ggr0.15mg/l+琼脂6.0g/l+蔗糖3.0g/l+椰汁100g/l，ph值5.2。继代培养基：ls培养基+活性炭1g/l+赤霉素0.9mg/l+ggr0.5mg/l+琼脂6.0g/l+椰汁100g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.3。壮苗培养基：1/3ms+活性炭1g/l+吲哚丁酸0.9mg/l+萘乙酸0.4mg/l+琼脂6.0g/l+椰汁100g/l+蔗糖3.0g/l，ph值5.6。对比例4采用现有技术中所使用的培养基，具体组成如下：诱导培养基：ms+活性炭1g/l+6-ba1.0mg/l+naa0.5mg/l+琼脂6g/l+蔗糖30g/l；继代培养基：1/2ms+活性炭1g/l+6-ba0.8mg/l+naa0.5mg/l+琼脂6g/l+蔗糖30g/l；壮苗培养基：1/2ms+活性炭1g/l+6-ba1.0mg/l+naa0.5mg/l+琼脂6g/l+蔗糖30g/l。组培试验方法及结果：每组取200个外植体样本，将斑舌兰的外植体诱导培养60天后，统计各组外植体的分化增殖情况，将诱导培养的原球茎继代培养80天后，统计平均芽分化率和平均生根率；继续壮苗培养30天后统计平均根长，各组的结果如表1所示。表1组培生长情况结果实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2对比例3对比例4平均茎长(cm)2.42.62.62.22.42.22.1增值系数8.08.38.25.64.06.86.6平均芽分化率(％)68.169.167.051.650.560.161.5平均生根率(％)82.983.583.068.570.953.255.6平均根长1.982.031.971.761.791.501.70从表1的结果可以看出，相对于对比例3、4，实施例1-3的平均茎长、增殖系数平均芽分化率、平均生根率、平均根长均明显较好，说明相较添加椰汁，采用辣木叶汁和黄秋葵汁相配合作为营养剂，使培养基的组成更适合斑舌兰外植体的生长。相对于对比例1和2，实施例1-3因为采用的基础培养基不同，各个阶段的生长情况也明显较好。上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。当前第1页12