一种无需灭菌的植物组培培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物生产技术领域，具体设及一种无需灭菌的植物组培培养基及其制 备方法。
【背景技术】
[0002] 现在工厂化生产的都要经过灭菌处理才可进行组织培养的继续生产。现行的灭菌 方法有2种，一种是高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌适合于耐高溫培养基、接种器械和蒸馈水 的灭菌。培养基在制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌 工作。灭菌时一般是在0.l〇5MPa压力下，溫度12rC时，灭菌15~30min即可。消毒时间不 宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高溫下分 解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难W凝固。另一种是过滤灭菌：一些植物 生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高溫灭 菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜讶L径0.45微米)使用之前要 先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至 3(TC时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-6(TC)加入，振荡使溶液与其他 成分混合均匀。
[0003] 目前组培工厂化生产用的培养基都是需要经过灭菌处理后才可进行植物组培生 产的，大大增加了生产成本及时间。比如说，中国专利申请，申请号为201410528256.X的发 明专利申请公开了一种石解组织培养用培养基，WMS培养基为基础培养基，加入的组分包 括α-糞乙酸、6-苄基腺嚷岭、脯氨酸、糖、香蕉、琼脂。通过上述方式，该发明申请的石解 组织培养用培养基，WMS培养基为基本培养基，加入其余组分，所用组分简单易得，成本低 廉，石解生长好，大大提高了产量和品质，能应用于石解研究、开发和生产中的各个领域，尤 其适合进行大规模的工业化生产。虽然，该培养基具有上述优点，但是，用于实际生产的培 养基还是要进行灭菌处理的，运大大增加了生产实践过程中的难度。
[0004] 综上所述，现有的技术缺点是，用于实际生产的培养基都是要进行灭菌处理的，不 管是高压灭菌处理还是过滤灭菌处理，都是生产环节必不可少的一步，运就带来了一系列 的问题，大大增加了生产成本，因此如何克服现有技术的不足是目前植物生产技术领域亟 需解决的问题。目前还没有查到无需灭菌直接就可W使用的培养基的相关文献。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种无需灭菌的植物组培培养基 及其制备方法。该培养基无需经过高压灭菌或过滤灭菌即可使用，所用组分简单易得，成本 低廉，而且所培养的植物生长情况良好，培养基也不易污染，生长好，能应用植物组培研究、 开发和生产中的各个领域，适合进行大规模的工业化生产。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种无需灭菌的植物组培培养基，包括按照如下组分： NH4NO31650mg/L、KH2PO4170mg/l、KN031 9 00mg/l、CaCl2*2H2〇 440mg/l、1拆〇4*7&0 370mg/X、ΚΙ0. 83mg/X、Na2Mo〇4*2H2〇 0. 25mg/X、H3BO36. 2mg/X、QiS〇4*5H2〇 0. 025mg/X、 MnSCVHzO16mg/l、CoCl2*6H2〇 0. 025mg/l、ZnS(V7H2〇8.6111邑/1、肌醇lOOmg/l、盐酸硫 胺素0.Img/l、烟酸0. 5mg/l、甘氨酸2mg/l、盐酸化唉醇0. 5mg/l、邸了人二钢37. 3mg/L、 FeS〇4*7H2〇 27.8mg/L、生长素ΙΑΑ0. 1-0. 5mg/L、细胞分裂素6-BA0. 1-0. 5mg/L、玉米素 0. 1-0. 5mg/l、薦糖30g/l、碳粉10g/l、香蕉水母液5-lOg/l、异嚷挫嘟酬l-20mg/l、矿源煤 基黄腐酸l-20mg/l、尼泊金醋钢l-20mg/l、巧樣酸l-20mg/l、琼脂3-5旨/1，溶剂为蒸馈水， 抑为 5. 5-6. 5 ; 所述的香蕉水母液的制备方法是用成熟的水果香蕉剥皮煮水，按500-1000g已剥皮的 香蕉加入1L水的比例进行加料，然后加热，待煮沸15-20分钟后，过滤，即可制得香蕉水母 液。
[0007] 上述无需灭菌的植物组培培养基的制备方法，包括如下步骤： 步骤（1 )，5种大量元素母液的制备： 分别将NH4NO3、皿2?〇4、KN03、CaCl2'2H2〇、Μ拆0八&0分别加入蒸馈水中，混合均匀，得 到浓度为165g/L的ΝΗ4ΝΟ3大量元素母液、浓度为17g/L的ΚΗ2ΡΟ4大量元素母液、浓度为 190g/L的KN03大量元素母液、浓度为44g/L的化C12,2&0大量元素母液和浓度为37g/L的 Μ拆04·7Η20大量元素母液，然后将运5种大量元素母液置于4°C下，备用； 步骤（2)，微量元素母液的制备： 将KI、Ν32Μο〇4·2Η2〇、H3BO3、CuS(V5H2〇、MnSCVHzO、CoCl2*6H2〇 和ZnS(V7H2〇 -起加入 到蒸馈水中，混合均匀，得到微量元素母液，然后置于4°C下，备用；微量元素母液中ΚΙ的浓 度为 0. 083g/L，Ν32Μο〇4·2Η2〇 的浓度为 0. 025g/L，Η3ΒΟ3的浓度为 0. 62g/l，CuSO4,5&0 的浓 度为 0. 0025g/l，MnSCVHzO的浓度为 1. 69g/L，CoCl2*6H2〇 的浓度为 0. 0025g/L，Ζη5〇4·7Η2〇 的浓度为0.86g/L; 步骤（3)，有机母液的制备： 将肌醇、盐酸硫胺素（VB1)、烟酸、甘氨酸和盐酸化唉醇（VB6) -起加入到蒸馈水中，混 合均匀，得到有机母液，然后置于4°C下，备用；有机母液中肌醇的浓度为lOg/l，盐酸硫胺 素的浓度为0.Olg/L烟酸的浓度为0. 〇5g/l，甘氨酸的浓度为0. 2g/l，和盐酸化唉醇的浓 度为 0. 05g/L; 步骤（4)，铁盐母液的制备： 将邸TA二钢和化S04,7H20 -起加入到蒸馈水中，混合均匀后，得到铁盐母液，然后置于 4°C下栋色玻璃瓶，备用；所述的铁盐母液中邸TA二钢的浓度为3. 73gg/L，FeS〇4,7H2〇的浓 度为 2. 78/L; 步骤（5)，其它物质母液的制备： 将生长素IAA先用体积分数为95%的酒精或lmol/1的化0H溶解，然后再加入蒸馈水 中，混合均匀，得到浓度为Img/ml生长素IAA母液，置于阴凉避光处，备用；所用蒸馈水的体 积为所用体积分数为95%的酒精或所用lmol/1的化0H的体积的18-20倍； 将玉米素先用体积分数为95%的酒精或ImoVI的化0H溶解，然后再加入蒸馈水中，混 合均匀，得到浓度为Img/ml玉米素母液，置于阴凉避光处，备用；所用蒸馈水的体积为所用 体积分数为95%的酒精或所用lmol/1的化0H的体积的18-20倍； 将细胞分裂素6-BA先用lmol/1的HCl溶解，然后再加入蒸馈水中，混合均匀，得到 浓度为Img/ml细胞分裂素6-BA母液，置于阴凉避光处，备用；所用蒸馈水的体积为所用 lmol/1的肥1的体积的18-20倍； 将异嚷挫嘟酬、矿源煤基黄腐酸、尼泊金醋钢和巧樣酸分别用水溶解，配制成浓度为Img/ml的异嚷挫嘟酬母液、浓度为Img/ml的矿源煤基黄腐酸母液、浓度为Img/ml的尼泊金 醋钢母液、浓度为Img/ml的巧樣酸母液； 步骤（6)，培养基的配制： 取等体积的NH4NO3大量元素母液、KH2PO4大量元素母液、KNO3大量元素母液XaCl2· 2&0 大量元素母液、Μ拆04·7Η20大量元素母液、微量元素母液、有机母液和铁盐母液加入到蒸馈 水中，然后向其中加入薦糖，揽拌至完全溶解后，再向其中加入碳粉，揽拌至混合均匀，之后 加入香蕉水母液，再加入琼脂并加热至沸腾，待琼脂完全烙化后停止加热，接着加入上述配 好的生长素ΙΑΑ母液、玉米素母液、细胞分裂素6-ΒΑ母液、异嚷挫嘟酬母液、矿源煤基黄腐 酸母液、尼泊金醋钢母液和巧樣酸母液，之后加入蒸馈水定容至体积是所用ΝΗ4ΝΟ3大量元 素母液体积的100倍，最后调节抑至5. 5-6. 5,并用培养基分装机分装，待其自然降至室溫， 即得无需灭菌的植物组培培养基。
[0008] 所有母液的加入量均按照本发明最终产品所给的浓度进行常规计算即可。
[0009] 进一步，优选的是采用lmol/1的肥1和/或lmol/1的化0Η调节抑值。
[0010] 进一步，优选的是如果分装至无盖的无菌容器中，需要采用封口膜或牛皮纸封口， 再用橡皮筋或绳子扎紧。本发明培养基在进行组织培养时，使用期限为3个月。
[0011] 进一步，优选的是所述的加入琼脂并加热至沸腾，lOmin后琼脂完全烙化。
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