一种组培金线莲培养基及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种组培金线莲培养基及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 金线莲(Anoectochilus roxbu;rghii(Wall. )Lindl)是兰科开唇兰属地生型多年 生草本植物，在我国主要分布于亚热带地区，即福建、广东、广西、浙江、江西、海南、云南、四 川、贵州W及西藏南部等省区。金线莲是我国传统的珍贵药材，可全草入药，味甘微苦、性平 微寒，具有清热解毒、润肺止咳和桂风利湿等功效，因此受到医药行业的广泛重视。由于野 生资源日趋枯竭，金线莲已被列为福建省溯危药用植物加 W保护。但其种子在自然条件下 萌发率极低，所W利用人工繁殖对其进行抢救性的保存。目前金线莲的人工繁殖主要是靠 组织培养育苗后进行大田移栽，组织培养的金线莲大都是利用植物生长激素进行调节促进 其生长，然而利用生长激素来调节金线莲组织培养的传统方法是不可持续性发展的，存在 成本高，影响食品安全等诸多问题，加之，在如今高速的社会发展下，绿色有机食品逐渐成 为主流产品，原有的金线莲组织培养基W及培养方法，已经跟不上人们对绿色食品追求的 脚步了。因此，有必要研究出一种绿色环保、无公害且能加速金线莲生长的培养基来培育金 线莲，W便于达到促进金线莲快速繁殖的目的，来满足广大的市场需求，同时又能够使培育 出的金线莲达到绿色有机的要求。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种环保、无公害且能加速金线莲生长的组培金线莲培养 基及其制备方法和应用。
[0004] 本发明的目的通过如下技术方案实现:一种组培金线莲培养基，包括香蕉、薦糖、 琼脂W及活性炭，它还包括〇*MS~1*MS培养基母液W及食用菌罐藏加工预煮液;每1000 ml 所述的组培金线莲培养基包括〇*MS~1*MS基本培养基母液、10~1000化食用菌罐藏加工预 煮液、10~50g薦糖、50~250g香蕉、6g~Sg琼脂、1 .Og~2. Og活性炭，余量为蒸馈水，其中0* MS表示不加入基本培养基母液。
[0005] 所述的组培金线莲培养基的制备，每1000毫升的有机培养基制备步骤如下：
[0006] (1)制备食用菌罐藏加工预煮液，并量取10~1000化的食用菌罐藏加工预煮液待 用；
[0007] (2)按照配制0*MS~1*MS基本培养基所需的各种母液的体积，量取MS大量元素母 液、MS微量元素母液、MS铁盐母液W及MS有机物母液待用；
[0008] (3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液 进行混合后溶解于蒸馈水中；
[0009] (4)称取50~250g香蕉W及1.Og~2.Og活性炭，并将香蕉娠成泥后加入步骤(3)中 所得的溶液中，揽拌混匀，之后加入称好的活性炭，揽拌均匀；
[0010] (5)在烧杯中加入200~300mL的蒸馈水，将蒸馈水加热至80~90°C后加入称好的 6g~Sg琼脂，边揽拌边加热至沸腾后琼脂溶解，待琼脂溶解之后，继续加入称好的10~50g 薦糖，边揽拌边加热至薦糖溶解，然后将得到的琼脂与薦糖的混合溶液加入步骤(4)所得的 混合溶液中，揽拌均匀后加蒸馈水定容至1000毫升并加入酸碱调节剂将PH值调至5.0-6.0;
[0011] (6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中，进行高溫高压灭菌，之后冷却凝 固即可。
[0012] 所述食用菌罐藏加工预煮液的制备方法如下：
[0013] a.收集食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水；
[0014] b.将收集来的食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离屯、，离屯、机的转速 控制在11500-12500rpm之间，离屯、溫度为15-25°C，离屯、时间为10-20min，离屯、之后取上清 液；
[0015] C.将所得的上清液利用降膜蒸发器，降膜蒸发浓缩，得浓缩液；
[0016] d.在浓缩液中添加变性剂，对浓缩液进行变性，其中所述的变性剂为80~100 %的 乙醇，且所加入的乙醇与浓缩液的体积比为2:1~6:1;
[0017] e.对变性后的浓缩液进行过滤，收集滤液；
[0018] f.将滤液进行旋转蒸发除去乙醇；
[0019] g.将旋转蒸发后所得的溶液利用5-10K的滤膜进行切向流过滤，收集滤出液；
[0020] h.将步骤g中所得的滤出液进行旋转蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到35~55% 即可。
[0021] 步骤(5)中所述的酸碱调节剂为0.1-0.5mol/L的化OH溶液或0.1-0.5mol/L的HCl 溶液。
[0022] 步骤(6)中高溫高压灭菌的溫度控制在121-125°C，压力控制在111-115千帕，灭菌 时间为15-20分钟。
[0023] 所述的组培金线莲培养基的应用，将组培金线莲培养基用于培育金线莲。较之现 有技术而言，本发明的优点在于：1)食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水往往会富含 一些营养物质如氨基酸、矿物质、糖类等，如果将运些废水经处理后在排放，不仅需要昂贵 的污水处理成本，而且造成了一定的资源浪费。本发明将食用菌罐藏加工过程中所产生的 工业废水进行处理后，得到食用菌罐藏加工预煮液，将其与MS培养基母液及其他添加物复 配制成培金线莲培养基，将食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水变废为宝、解决了食 用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水的排放问题，使食用菌加工企业达到废水零排放， 减少其污水处理成本;2)本发明将食用菌罐藏加工过程中所产生的工业废水进行处理后所 得的食用菌罐藏加工预煮液，来取代传统植物生长调节剂，即能为金线莲提供除MS培养基 W外的营养，同时能促进组培金线莲生根发芽，还能缩短组培金线莲生长周期，食用菌罐藏 加工预煮液的使用减少了人工合成激素在组培金线莲中的应用，使组培金线莲成为一种绿 色有机食品；3)本发明制备组培金线莲培养基的原料易得且价格低廉;4)本发明制备组培 金线莲培养基的制备方法简单，适用于工业化生产；5)本发明制得的组培金线莲培养基具 有良好的抑菌效果，使得在培育金线莲的培养基中无需加入杀菌剂，进一步保证了金线莲 的品质。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合实施例对本
【发明内容】
进行详细说明：
[0025] 实施例一:MS母液的配制
[0026] 1 .MS大量元素母液(20X)称取20升量溶解在IL蒸馈水中。
[002引 2.15微量元素母液(200乂）
[0029]称取200升量溶解在IL蒸馈水中。
[0031] 3.15铁盐母液（200乂）
[0032] 称取200升量溶解在IL蒸馈水中。
[0034] 4.]?5有机物母液(200乂）
[0035] 称取200升量溶解在IL蒸馈水中。
[0037] 实施例二:组培金线莲培养基的制备
[0038] IL组培金线莲培养基（1) l/2*MS+25化L的食用菌罐藏加工预煮液+30g薦糖+100g 香蕉巧g琼脂+1.5g活性炭、（2)MS+100化L的食用菌罐藏加工预煮液巧Og薦糖+250g香蕉+Sg 琼脂+2.0旨活性炭、（3)1/4*15+^化的食用菌罐藏加工预煮液+10旨薦糖巧0旨香蕉+6旨琼脂+ 1. Og活性炭的具体制备方法如下：
[0039] 1. IL组培金线莲的有机培养基（l/2*MS+25化L的食用菌罐藏加工预煮液+30g薦糖 +100g香蕉Wg琼脂+1.5g活性炭)的制备，每1000毫升的有机培养基制备步骤如下：
[0040] (I)制备食用菌罐藏加工预煮液，并量取25化L的食用菌罐藏加工预煮液待用；
[0041] (2)按照配制1/2*MS基本培养基所需的各种母液的体积，依次量取：
[0042] MS大量元素母液25mL
[0043] MS微量元素母液2.5mL
[0044] MS 铁盐母液 2.5mL
[0045] MS有机物母液 2.5mL待用；
[0046] (3)将步骤(1)中量取的食用菌罐藏加工预煮液与步骤(2)中量取的MS培养基母液 进行混合后溶解于蒸馈水中；
[0047] (4)称取100g香蕉W及1.5g活性炭，并将香蕉娠成泥后加入步骤(3)中所得的溶液 中，揽拌混匀，之后加入称好的活性炭，揽拌均匀；
[004引（5)在烧杯中加入200mL的蒸馈水，将蒸馈水加热至80°C后加入称好的7g琼脂，边 揽拌边加热至沸腾后琼脂溶解，待琼脂溶解之后，继续加入称好的30g薦糖，边揽拌边加热 至薦糖溶解，然后将得到的琼脂与薦糖的混合溶液加入步骤(4)所得的混合溶液中，揽拌均 匀后加蒸馈水定容至1000毫升并加入0.1mol/L的NaO聞尋PH值调至5.0;
[0049] (6)将步骤(5)所得到的培养基分装于组培瓶中，进行高溫高压灭菌，之后冷却凝 固即可，其中高溫高压灭菌溫度控制在12rC，压力控制在111千帕，灭菌时间为15分钟。<