一种金线莲组培的培养基抗菌剂及其制备方法

一种金线莲组培的培养基抗菌剂及其制备方法
【专利摘要】一种金线莲组培的培养基抗菌剂，包括MS培养基母液或B5培养基母液，每1000毫升培养基抗菌剂中还包括有壳聚糖1-5克，茶多酚1-4克，香蕉泥80-120克,蔗糖15-30克,蛋白胨2-4克，吲哚丁酸钾0.2-0.5毫克，萘乙酸钠的0.2-0.6毫克，6嘌呤-苄氨基0.5-1毫克。所述培养基抗菌剂用盐酸或氢氧化钠调PH值至5.4-5.7。本发明培养基抗菌剂采用壳聚糖和茶多酚，壳聚糖和茶多酚不仅具有较好抑菌、杀菌作用，且是有益健康的养生精品，在有效降低农残的同时，又能促进金线莲的健康生长。香蕉泥.蛋白胨富含有机钾.有机氮能有效提供金线莲养分需求，同时提高金线莲各种有效成分含量，确保药效。
【专利说明】一种金线莲组培的培养基抗菌剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及金线莲组培的生物技术，尤其是指金线莲组培过程中培养基抗菌剂的配制技术。
【背景技术】
[0002]金线莲是一种名贵中药材，素有药王之称，由于天然野生极少，组培种植前景较好。现有金线莲组培培养基大都采用MS培养基或B5培养基为母液，添加蛋白胨，琼脂等。在组培过程中因受环境、培养基及人工技术等多方面因素影响，导致苗瓶污染率较高，从而提高组培成本。目前解决的手段是在培养基中加入杀菌剂，如青霉素或氯霉素.四环素等抗生素，甚至添加多菌灵咪酰胺等农药，虽起到一定的杀菌效果，但很难控制农残，再者抗生素及农药杀菌剂的添加也影响金线莲的生长。

【发明内容】
[0003]为了解决现有技术存在的问题，本发明目的在于提供一种金线莲组培的培养基抗菌剂及其制备方法，所述的培养基抗菌剂具有较好抑菌、杀菌作用，又能降低农残，促进金线莲的生长。
[0004]为实现上述目的，本发明技术方案为:
[0005]一种金线莲组培的培养基抗菌剂，包括MS培养基母液或B5培养基母液，还包括有壳聚糖和茶多酚；每1000毫升的所述培养基抗菌剂中，壳聚糖的添加比例是1-5克，茶多酚的添加比例是1-4克。还包括有香蕉泥、蔗糖和蛋白胨；每1000毫升的所述培养基抗菌剂中，香蕉泥的添加比例是80-120克，蔗糖的添加比例是15-30克，蛋白胨的添加比例是2-4克。还包括有吲哚丁酸钾、萘乙酸钠和6嘌呤-苄氨基；每1000毫升的所述培养基抗菌剂中，吲哚丁酸钾的添加比例是0.2-0.5毫克、萘乙酸钠的添加比例是0.2-0.6毫克、6嘌呤-苄氨基的添加比例是0.5-1毫克。所述培养基抗菌剂用盐酸或氢氧化钠调PH值至5.4-5.7。
[0006]一种金线莲组培的培养基抗菌剂的制备方法，其特征在于:每1000毫升的培养基抗菌剂制备步骤如下:
[0007]步骤一，称取70毫升-100毫升的MS培养基母液或B5培养基母液待用；
[0008]步骤二，称取5.5-7克的琼脂放在热水中充分搅拌溶解后待用；
[0009]步骤三，称量1-5克的壳聚糖和1-4克的茶多酚，及80-120克的香蕉泥、15-30克的蔗糖和2-4克的蛋白胨放在热水中充分搅拌溶解后待用；
[0010]步骤四，在MS培养基母液或B5培养基母液中加入吲哚丁酸钾0.2-0.5毫克、萘乙酸钠0.2-0.6毫克、6嘌呤-苄氨基0.5-1毫克，并充分溶解；
[0011]步骤五，在步骤二中的琼脂中加入步骤三配制的溶液，并充分搅拌溶解；
[0012]步骤六，混合步骤四和步骤五所配制的溶液，并充分搅拌溶解，加热水定量制得1000毫升的培养基抗菌剂；[0013] 其中，步骤一、步骤二和步骤三的顺序可置换，步骤四和步骤五的顺序可置换。
[0014]将配制好的培养基抗菌剂趁热倒入培养器中，培养基抗菌剂占容器的体积为1/3-1/4，在121°C _126°C，压力111-115千帕下维持15-20分钟，灭菌后冷却静置5天后使用。
[0015]本发明培养基抗菌剂采用壳聚糖和茶多酚，壳聚糖和茶多酚不仅具有较好抑菌、杀菌作用，且是有益健康的养生精品，在有效降低农残的同时，又能促进金线莲的健康生长。香蕉泥.蛋白胨富含有机钾.有机氮能有效提供金线莲养分需求，同时提高金线莲各种有效成分含量，确保药效。
【具体实施方式】
[0016]为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚、明白，以下通过实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0017]本发明提供的金线莲组培的培养基抗菌剂，在每1000毫升的所述培养基抗菌剂中，包括70-100毫升的MS培养基母液B5培养基母液待用、1-5克的壳聚糖、1_4克的茶多酚、80-120克的香蕉泥、15-30克的蔗糖、2-4克的蛋白胨、0.2-0.5毫克的吲哚丁酸钾、
0.2-0.6毫克的萘乙酸钠和0.5-1毫克的6嘌呤-苄氨基，且所述培养基抗菌剂用盐酸或氢氧化钠调PH值至5.4-5.7。
[0018]实施例一
[0019]本发明每1000毫升的金线莲组培的培养基抗菌剂的制备步骤是:
[0020]步骤一，MS培养基母液的的配制:
[0021]母液A:硫酸镁18.5克硝酸铵82.5克硝酸钾95.0克，加入水定容到1000毫升，
配I升培养基抗菌剂量取20毫升
[0022]母液B:氯化钙22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培养基抗菌剂取10毫升。
[0023]母液C:磷酸二氢钾8.5克加入水定容500毫升，配I升培养基抗菌剂量取10毫升
[0024]母液D:乙二胺四乙酸二钠3.73克和硫酸亚铁2.78克加水定容到1000毫升，配I
升培养基抗菌剂加10毫升。
[0025]母液E:硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘酸钾83毫克，鉬酸钠25毫克和氯化钴2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培养基抗菌剂
量取10毫升。
[0026]母液F.:肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克和盐酸硫铵素5晕克加水定容到500毫升,配I升培养基抗菌剂量取10毫升。
[0027]按上述顺序量取母液混合后制得70毫升的MS培养基母液待用；
[0028]步骤二，称取5.5克的琼脂放在热水中充分搅拌溶解后待用；本文所述的热水的水温在80°C左右。
[0029]步骤三，称量I克的壳聚糖和I克的茶多酚，及80克的香蕉泥、15克的蔗糖和2克蛋白胨放在热水中充分搅拌溶解后待用；
[0030]步骤四，在MS培养基母液或B5培养基母液中加入吲哚丁酸钾0.2毫克、萘乙酸钠0.2毫克、6嘌呤-苄氨基0.5毫克，并充分溶解；
[0031]步骤五，在步骤二中的琼脂中加入步骤三配制的溶液，并充分搅拌溶解；
[0032]步骤六，混合步骤四和步骤五所配制的溶液，并充分搅拌溶解，加热水定量制得1000毫升的培养基抗菌剂。所述培养基抗菌剂用盐酸或氢氧化钠调PH值至5.4。其中，步骤一、步骤二和步骤三的顺序可置换，步骤四和步骤五的顺序可置换。
[0033]将配制好的培养基抗菌剂趁热倒入培养器中，培养基抗菌剂占容器的体积为1/3，在121°C，压力111千帕下维持15分钟，灭菌后冷却静置5天后使用。
[0034]实施例二
[0035]本发明每1000毫升的金线莲组培的培养基抗菌剂的制备步骤是:
[0036]步骤一，MS培养基母液的的配制:
[0037]①母液A:硫酸镁18.5克硝酸铵82.5克硝酸钾95.0克，加入水定容到1000毫升，
配I升培养基量取22.5毫升。
[0038]②母液B:氯化钙22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培养基取？ 12.5毫升。
[0039]③母液C:磷 酸二氢钾8.5克加入水定容500毫升，配I升培养基量取？ 12.5毫升。
[0040]④母液D:乙二胺四乙酸二钠3.73克和硫酸亚铁2.78克加水定容到1000毫升，配I升培养基加12.5毫升。
[0041]⑤母液E:硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘酸钾83毫克，鉬酸钠25毫克和氯化钴2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培养基量取12.5毫升。
[0042]⑥母液F.:肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克和盐酸硫铵素5晕克加水定容到500毫升,配I升培养基量取12.5毫升。
[0043]按上述顺序量取母液混合后制得85毫升的MS培养基母液；
[0044]步骤二，称取6.3克的琼脂放在热水中充分搅拌溶解后待用；本文所述的热水的水温在80°C左右。
[0045]步骤三，称量2.5克的壳聚糖和2.0克的茶多酚，及100克的香蕉泥、22.5克的蔗糖和3克蛋白胨放在热水中充分搅拌溶解后待用；
[0046]步骤四，在MS培养基母液中加入吲哚丁酸钾0.35毫克、萘乙酸钠0.4毫克、6嘌呤-苄氨基0.75毫克，并充分溶解；
[0047]步骤五，在步骤二中的琼脂中加入步骤三配制的溶液，并充分搅拌溶解；
[0048]步骤六，混合步骤四和步骤五所配制的溶液，并充分搅拌溶解，加热水定量制得1000毫升的培养基抗菌剂。所述培养基抗菌剂用盐酸或氢氧化钠调PH值至5.6。其中，步骤一、步骤二和步骤三的顺序可置换，步骤四和步骤五的顺序可置换。
[0049]将配制好的培养基抗菌剂趁热倒入培养器中，培养基抗菌剂占容器的体积为7/12，在123.5°C，压力112.5千帕下维持17.5分钟，灭菌后冷却静置5天后使用。
[0050]实施例三
[0051]本发明每1000毫升的金线莲组培的培养基抗菌剂的制备步骤是:
[0052]步骤一，MS培养基母液的的配制:
[0053]①母液A:硫酸镁18.5克硝酸铵82.5克硝酸钾95.0克，加入水定容到1000毫升，配I升培养基量取25毫升。
[0054]②母液B:氯化钙22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培养基取15毫升。
[0055]③母液C:磷酸二氢钾8.5克加入水定容500毫升，配I升培养基量取15毫升
[0056]④母液D:乙二胺四乙酸二钠3.73克和硫酸亚铁2.78克加水定容到1000毫升，配I升培养基加15毫升。
[0057]⑤母液E:硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘酸钾83毫克，鉬酸钠25毫克和氯化钴2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培养基量取15毫升。
[0058]⑥母液F.:肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克和盐酸硫铵素5晕克加水定容到500毫升,配I升培养基量取15毫升。
[0059]按上述顺序量取母液混合后制得100毫升的MS培养基母液；
[0060]步骤二，称取7克的琼脂放在热水中充分搅拌溶解后待用；本文所述的热水的水温在80°C左右。
[0061]步骤三，称量5克的壳聚糖和4克的茶多酚，及120克的香蕉泥、30克的蔗糖和4克蛋白胨放在热水中充分搅拌溶解后待用；
[0062]步骤四，在MS培养基母液或B5培养基母液中加入吲哚丁酸钾0.5毫克、萘乙酸钠
0.6毫克、6嘌呤-苄氨基I毫克，并充分溶解；
[0063]步骤五，在步骤二中的琼脂中加入步骤三配制的溶液，并充分搅拌溶解；
[0064]步骤六，混合步骤四和步骤五所配制的溶液，并充分搅拌溶解，加热水定量制得1000毫升的培养基抗菌剂。所述培养基抗菌剂用盐酸或氢氧化钠调PH值至5.7。其中，步骤一、步骤二和步骤三的顺序可置换，步骤四和步骤五的顺序可置换。
[0065]将配制好的培养基抗菌剂趁热倒入培养器中，培养基抗菌剂占容器的体积为1/4,在126°C，压力115千帕下维持20分钟，灭菌后冷却静置5天后使用。
[0066] 上述说明示出并描述了本发明的优选实施例，如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
【权利要求】
1.一种金线莲组培的培养基抗菌剂，包括MS培养基母液或B5培养基母液，其特征在于:还包括有壳聚糖和茶多酚；每1000毫升的所述培养基抗菌剂中，壳聚糖的添加比例是1-5克，茶多酚的添加比例是1-4克。
2.如权利要求1所述的一种金线莲组培的培养基抗菌剂，其特征在于:还包括有香蕉泥、蔗糖和蛋白胨；每1000毫升的所述培养基抗菌剂中，香蕉泥的添加比例是80-120克，鹿糖的添加比例是15-30克，蛋白腺的添加比例是2_4克。
3.如权利要求2所述的一种金线莲组培的培养基抗菌剂，其特征在于:还包括有吲哚丁酸钾、萘乙酸钠和6嘌呤-苄氨基；每1000毫升的所述培养基抗菌剂中，吲哚丁酸钾的添加比例是0.2-0.5毫克、萘乙酸钠的添加比例是0.2-0.6毫克、6嘌呤-苄氨基的添加比例是0.5-1晕克。
4.如权利要求1、2或3所述的一种金线莲组培的培养基抗菌剂，其特征在于:所述培养基抗菌剂用盐酸或氢氧化钠调PH值至5.4-5.7。
5.一种金线莲组培的培养基抗菌剂的制备方法，其特征在于:每1000毫升的培养基抗菌剂制备步骤如下: 步骤一，称取70毫升-100毫升的MS培养基母液或B5培养基母液待用； 步骤二，称取5.5-7克的琼脂放在热水中充分搅拌溶解后待用； 步骤三，称量1-5克的壳聚糖和1-4克的茶多酚，及80-120克的香蕉泥、15-30克的蔗糖和2-4克的蛋白胨放在热水中充分搅拌溶解后待用； 步骤四，在MS培养基母液或B5培养基母液中加入吲哚丁酸钾0.2-0.5毫克、萘乙酸钠0.2-0.6毫克、6嘌呤-苄氨基0.5-1毫克，并充分溶解； 步骤五，在步骤二中的琼脂中加入步骤三配制的溶液，并充分搅拌溶解； 步骤六，混合步骤四和步骤五所配制的溶液，并充分搅拌溶解，加热水定量制得1000毫升的培养基抗菌剂； 其中，步骤一、步骤二和步骤三的顺序可置换，步骤四和步骤五的顺序可置换。
6.如权利要求5所述的一种金线莲组培的培养基抗菌剂的制备方法，其特征在于:将配制好的培养基抗菌剂趁热倒入培养器中，培养基抗菌剂占容器的体积为1/3-1/4，在121°C _126°C，压力111-115千帕下维持15-20分钟，灭菌后冷却静置5天后使用。
7.如权利要求5或6所述的一种金线莲组培的培养基抗菌剂的制备方法，其特征在于:所述MS培养基母液是按下面顺序量取母液混合后制得的: 母液A:硫酸镁18.5克硝酸铵82.5克硝酸钾95.0克，加入水定容到1000毫升，配I升培养基量取20-25毫升 母液B:氯化钙22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培养基取10-15毫升。 母液C:磷酸二氢钾8.5克加入水定容500毫升，配I升培养基量取10-15毫升母液D:乙二胺四乙酸二钠3.73克和硫酸亚铁2.78克加水定容到1000毫升，配I升培养基加10-15毫升。 母液E:硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘酸钾83毫克，鉬酸钠25毫克和氯化钴2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培养基量取10-15毫升。 母液F:肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克和盐酸硫铵素5晕克加水定容到500毫升，配1升培养基量取10-15毫升。
【文档编号】A01N43/16GK103918714SQ201410035582
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年1月25日 优先权日:2014年1月25日
【发明者】黄阿贤 申请人:漳州美利德生物工程有限公司