本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种互叶白千层组培苗生根培养方法。
背景技术：
互叶白千层(melaleucaahemifolia)桃金娘科白千层属，原产于澳洲，其树叶提取物俗称“茶树精油”，因其具有强力的消炎杀菌功效，现已被产业化，广泛的应用于医药、化妆品、日化品等领域，我国目前已在广西、广东、福建等多个省市推广种植。
互叶白千层主要通过种播、扦插和组织培养进行繁育，但由于目前国内种植品种混杂，种子败育，种植技术条件限制等问题，致使互叶白千层的发芽率和成活率都较低。若需要规模化生产还需利用组织培养技术，使其后代能保持原品种的优良性状，同时便于人工控制，适合集约化生产。
组织培养过程中不可避免的一个问题是植物材料发生褐化，主要是由于在组织培养过程中，需要分离切取外植体，形成切口，植物自身在受到外界伤害时，其体内的多酚化合物就会在多酚氧化酶的作用下氧化成醌类物质，呈现褐色。在互叶白千层培苗生根培养过程中，也会出现不同程度的褐化现象，严重时常常会导致植物体死亡造成组织培养失败。如吴丽君(吴丽君.高精油互叶白千层组培产业化技术研究.福建农业学报，2014，29(12)：1246-1250)就指出互叶白千层组培继代苗基部易黑褐死亡，其利用3.0g/l花宝1号与vh、vc、vb2的组合物能有效地抑制继代苗褐化死亡。而如何选择合适的生根培养基和适宜的培养方法，在生根培养阶段有效地抑制互叶白千层的褐化，目前还未见报道。
技术实现要素：
为了克服背景技术中的技术缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种互叶白千层生根培养方法，已提高互叶白千层的生根率同时防止生根过程中褐化现象的产生。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供了一种互叶白千层组培苗生根培养方法，包括如下步骤：
(1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基，进行诱导培养20-30d，所述诱导培养基组成为：ms+1.0-1.5mg/l6-ba+0.3-0.5mg/lnaa，所述诱导培养基的ph为5.6-5.8。
(2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基，进行继代培养35-40d，所述继代培养基的组成为：ms+1.5-2mg/l6-ba+1.0-1.5mg/liaa，所述继代培养基的ph为5.6-5.8。
(3)从继代培养的母苗中切取单芽，单芽1-2cm转接至生根培养基中，进行生根培养，黑暗培养7d，之后光照培养25d，光照培养的光暗周期为16/8h；所述生根培养基的组成为：1/2ms+0.2-0.3mg/lnaa+1.0-1.5mg/labt-1、所述培养基ph为5.7-5.9。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种互叶白千层组培苗生根培养方法，包括诱导培养、继代培养和生根培养，其中生根培养基最优组成为：1/2ms+0.3mg/lnaa+1.0mg/labt-1，利用该培养方法对互叶白千层组培苗进行生根培养，生根率高，同时有效的防止了生根过程中的褐化现象，大幅提高互叶白千层组培繁殖的成活率，利于良种无性苗的繁殖，对于规模化生产互叶白千层组培苗具有重要意义。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明最关键的构思在于：提供一种互叶白千层组培苗生根培养方法，保证生根率的同时有效的避免生根过程中出现褐化现象。
本发明提供了一种互叶白千层组培苗生根培养方法，包括如下步骤：
(1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基，进行诱导培养20-30d，所述诱导培养基组成为：ms+1.0-1.5mg/l6-ba+0.3-0.5mg/lnaa，所述诱导培养基的ph为5.6-5.8。
(2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基，进行继代培养35-40d，所述继代培养基的组成为：ms+1.5-2mg/l6-ba+1.0-1.5mg/liaa，所述继代培养基的ph为5.6-5.8。
(3)从继代培养的母苗中切取单芽，单芽1-2cm转接至生根培养基中，进行生根培养，黑暗培养7d，之后光照培养25d，光照培养的光暗周期为16/8h；所述生根培养基的组成为：1/2ms+0.2-0.3mg/lnaa+1.0-1.5mg/labt-1、所述培养基ph为5.7-5.9。
进一步的，所述步骤(3)的生根培养基最优组成为：1/2ms+0.3mg/lnaa+1.0mg/labt-1。
进一步的，所述步骤(1)的外植体取自生长健壮无虫病的一年生植株，剪取生长旺盛的萌生枝条，将枝条除去叶片，切成0.5-1.0cm的茎段即为外植体材料。
进一步的，所述步骤(1)中外植体经过消毒处理，所述消毒处理为：将所述枝条表面洗净干净，用体积浓度为75％的乙醇浸泡枝条15-20s，移入超净工作台，置于0.1％氯化汞溶液中进一步消毒10min，取出枝条后用无菌水冲洗6-8次，随即将枝条放入在无菌水中切割。
进一步的，所述步骤(1)的培养条件为，光照强度为1000-1500lx，光照时间为每天11h，温度为24±1℃
进一步的，所述步骤(2)的培养条件为，光照强度为1500-2000lx，光照时间为每天13h，温度为25±2℃。
进一步的，所述步骤(3)的培养条件为，光照强度为2500-3000lx，温度为25±2℃。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：通过对诱导培养、继代培养和生根培养阶段培养基的设计，添加适宜的激素，调节优化配比与培养条件，针对性的提供了一种互叶白千层组培苗生根培养方法，能够有效地防止互叶白千层组培苗生根培养褐化的问题，且生根率高，在生根培养基最优方案下生根率达到98％，大幅提高互叶白千层组培繁殖的成活率，利于良种无性苗的繁殖，对于规模化生产互叶白千层组培苗具有重要意义。
实施例1：
一种互叶白千层组培苗生根培养方法，包括如下步骤：
(1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基，进行诱导培养20d，所述诱导培养基组成为：ms+1.0mg/l6-ba+0.3mg/lnaa，所述诱导培养基的ph为5.7。
(2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基，进行继代培养35d，所述继代培养基的组成为：ms+1.5mg/l6-ba+1.0mg/liaa，所述继代培养基的ph为5.7。
(3)从继代培养的母苗中切取单芽，单芽1-2cm转接至生根培养基中，进行生根培养，黑暗培养7d，之后光照培养25d，光照培养的光暗周期为16/8h；所述生根培养基的组成为：1/2ms+0.25mg/lnaa+1..25mg/labt-1、所述培养基ph为5.8。
实施例2：
一种互叶白千层组培苗生根培养方法，包括如下步骤：
(1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基，进行诱导培养30d，所述诱导培养基组成为：ms+1.5mg/l6-ba+0.5mg/lnaa，所述诱导培养基的ph为5.8。
(2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基，进行继代培养38d，所述继代培养基的组成为：ms+2mg/l6-ba+1.5mg/liaa，所述继代培养基的ph为5.8。
(3)从继代培养的母苗中切取单芽，单芽1-2cm转接至生根培养基中，进行生根培养，黑暗培养7d，之后光照培养25d，光照培养的光暗周期为16/8h；所述生根培养基的组成为：1/2ms+0.2mg/lnaa+1.5mg/labt-1、所述培养基ph为5.9。
实施例3：
一种互叶白千层组培苗生根培养方法，包括如下步骤：
(1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基，进行诱导培养25d，所述诱导培养基组成为：ms+1.5mg/l6-ba+0.4mg/lnaa，所述诱导培养基的ph为5.6。
(2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基，进行继代培养40d，所述继代培养基的组成为：ms+2mg/l6-ba+1.0mg/liaa，所述继代培养基的ph为5.6。
(3)从继代培养的母苗中切取单芽，单芽1-2cm转接至生根培养基中，进行生根培养，黑暗培养7d，之后光照培养25d，光照培养的光暗周期为16/8h；所述生根培养基的组成为：1/2ms+0.3mg/lnaa+1.0mg/labt-1、所述培养基ph为5.7。
实施例4：
采用正交设计(如表1所示)，共9组试验组，每组设置5个平行，研究ms培养基(1/2、1/3、1/4)、naa(0.1、0.2、0.3mg/l)、abt-1(0.5、1.0、1.5mg/l)对互叶白千层组培苗生根的影响。
一种互叶白千层组培苗生根培养方法，包括如下步骤：
(1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基，进行诱导培养30d，所述诱导培养基组成为：ms+1.5mg/l6-ba+0.5mg/lnaa，所述诱导培养基的ph为5.8。
(2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基，进行继代培养38d，所述继代培养基的组成为：ms+2mg/l6-ba+1.5mg/liaa，所述继代培养基的ph为5.8。
(3)从继代培养的母苗中切取单芽，单芽1-2cm转接至生根培养基中，进行生根培养，黑暗培养7d，之后光照培养25d，光照培养的光暗周期为16/8h；光照强度为2500-3000lx，温度为25±2℃，光照培养25d后统计生根数量、生根率及其褐化情况。
表1不同浓度培养基对互叶白千层生根的影响
9组试验组中，生根条数平均在10条以上，在试验组3的培养基中，即培养基组成为1/2ms+0.3mg/lnaa+1.0mg/labt-1的条件下，互叶白千层组培苗生根率最高为98％，该条件下未出现褐化现象。
综上所述，本发明提供的一种互叶白千层组培苗生根培养方法，该培养基条件和方法下，互叶白千层组培苗生根培养无褐化现象产生，且生根率高达98％，有效的解决了互叶白千层组培苗生根培养阶段的褐化问题，大幅提高互叶白千层组培繁殖的成活率，利于良种无性苗的繁殖。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。