本发明属于花生种植
技术领域：
，具体涉及一种富硒花生的种植方法。
背景技术：
硒是一种人和动物必需的微量营养元素，具有抗氧化、抗癌、提高机体免疫力、保护心脏、保护肝脏、防治近视和白内障、解毒、延缓衰老和增强生殖能力等多种药理作用，被誉为“生命之火”、“心脏守护神”、“抗癌之王”、“光明使者”和“长寿元素”。硒与人体的健康有着密切的联系，目前已知与缺硒有关的人类疾病多达40余种，包括心脑血管疾病、糖尿病、自身免疫性疾病、克山病、大骨节病等。随着医学和营养学研究的不断深入，人们越来越认识到硒在人体中的生理作用和维持身体健康的重要性。1988年中国营养学会将硒列入人体必需的微量营养元素，推荐成人摄入量为50~250ug/d，且膳食硒最高安全摄入量为400ug/d。然而，我国有72%的地区处于低硒或缺硒地带，中国营养学会对我国13个省市做过调查，结果表明，成人平均硒摄入量为26~32ug/d，与中国营养学会推荐的最低摄入量50ug/d相距甚远。因此需通过食用含硒较高的食品来满足对硒营养元素的需要，这成为我国保障居民身体健康的通行做法。硒富集途径中，植物转化法是一种非常常见的途径，现有的生产富硒花生的方法主要有两种，一种是在花生种植后，施以富硒肥料，肥料本身湿度较大，容易滋生很多细菌，严重的会滋生病菌，导致花生施肥的同时又给它们带来了病原菌，不仅没有促进花生生长，反而阻碍它们正常发育，而且花生对富硒肥料中硒的生物利用度非常低；另外一种是通过富硒浸种液对花生进行浸种处理，此种方法富硒率非常低，同样也会导致资源的浪费；此外现有大多数富硒，多是添加亚硒酸钠来获得富硒花生果实，但是亚硒酸钠毒性大，安全范围窄，生物利用率低，添加量过多会导致花生病变，添加过少有无法得到富硒花生。技术实现要素：本发明的目的是针对现有的问题，提供了一种富硒花生的种植方法。通过本方法种植的花生安全、无毒、无害、生物利用度高，并且繁殖率高，产出的花生品质好，经济效益高，具有很好的市场推广价值。本发明是通过以下技术方案实现的：一种富硒花生的种植方法，包括以下步骤：（1）前处理：将花生置于自来水下流水冲洗30-40min，然后将花生置于超净工作台中进行消毒、灭菌，后在取出花生米，切成30-40mm3的小块备用；（2）接种：将步骤（1）中的小块花生米置于富硒培养基中，每瓶接种2-4块小块花生米，它们接近等间距，然后封口膜封好培养瓶；（3）激光照射：将步骤（2）中的培养瓶进行激光照射3-7min；（4）培养：将步骤（3）中激光照射后的培养瓶置于培养箱中进行培养，培养时间为31-48d，获得花生组培苗；（5）移栽：打开步骤（4）中培养瓶的封口膜，将培养瓶置于室温放置3-5d，然后取出组培苗移栽到种植田内。进一步的，所述步骤（1）中消毒、灭菌的具体程序，包括以下步骤：a.灭菌液的制备：称取3-5份十二烷基二羟乙基甜菜碱、4-6份芦荟胶、6-8份75%酒精共同置于无菌三角瓶中，将三角瓶置于磁力搅拌器上，磁力搅拌器的转速为150-180rpm，温度为39-43℃，搅拌的时间为35-45min；b.将操作a制得的灭菌液置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为120-122℃，灭菌的时间为16-20min；c.取出操作b中灭菌后的灭菌液置于超净工作台中冷却至室温备用；d.在超净工作台中，将花生置于500ml的烧杯中，然后向烧杯中加入重量份为花生总重量份7-8倍的操作c所获得的灭菌液，灭菌时间为15-21min，期间用手腕不断晃动烧杯；e.取出操作d获得的花生置于无菌水中浸泡12-14min，然后取出花生用无菌水淋洗6-8min后备用。优选的，所述步骤（2）中富硒培养基的配制，包括以下步骤：a.量取500-600份的去离子水置于大烧杯中，将水煮至沸腾，再称取6-8份琼脂、10-30份白糖、2-3份富硒酵母、1.5-1.7份硝酸铵、1.8-2份硝酸钾、0.16-0.18份磷酸二氢钾、0.36-0.38份硫酸镁、0.0007-0.0009份碘化钾、0.005-0.007份硼酸、0.021-0.023份硫酸锰、0.0085-0.0087份硫酸锌、0.0002-0.0003份钼酸钠、0.00002-0.00003份硫酸铜、0.00002-0.00003份氯化钴、0.035-0.036份乙二胺四乙酸二钠、0.026-0.028份硫酸亚铁、1-2份复合维生素、0.001-0.002份甘氨酸依次加入到大烧杯中，待各组分完全溶解后，称取0.43-0.45份氯化钙加入到大烧杯中，继续加热3-5min后，向大烧杯内加入去离子水定容至1l，得富硒培养基溶液；b.将操作a获得的富硒培养基溶液分装到培养瓶中，每瓶分装20-30ml，然后封口膜封好，将所有的培养瓶均置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为120-122℃，灭菌的时间为18-20min；c.将操作b中灭菌后的富硒培养基置于超净工作台中，带培养瓶的温度冷却至50-60℃时，量取0.002-0.003份摩尔浓度为1mol/l的6-苄氨基腺嘌呤和0.001-0.003份摩尔浓度为1.5mol/l的2,4-二氯苯氧乙酸加到每个培养瓶中，摇匀静置备用。优选的，所述步骤（3）中激光照射的激光强度为400-500w/cm2。优选的，所述步骤（4）中培养的光照条件为每天光照16-20h，黑暗4-8h，培养的温度为25-29℃。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明是利用细胞的全能性来对花生种子进行组织培养，将富硒物质加入到组织培养的培养基中，从而生产出富硒花生植株的方法，在通过生物转化的方式，硒元素倍转移到花生果实中。植物细胞的全能性即一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整植株，在组织培养过程中保证无菌的环境很重要，现有的技术基本都是通过75%酒精、95%酒精、次氯酸钠、升汞等化学物质对植物组织进行消毒灭菌，其中95%的酒精对组织的刺激非常大，处理时间很难把握，稍有不慎，细胞就会被杀死，次氯酸钠属于腐蚀品，经常用手接触本品的工人，手掌大量出汗，指甲变薄，毛发脱落，次氯酸钠有致敏作用，其放出的氯气有可能引起中毒，升汞虽然使用量非常小，但是升汞对人体有致癌性、致突变性、导致中毒等危害，而且升汞处理不当，会污染环境，本发明灭菌液的组成成分为十二烷基二羟乙基甜菜碱、芦荟胶和75%酒精，无毒，刺激性小，易溶于水，对酸碱稳定，杀菌性能好，芦荟胶还能激活细胞活力，提高组织培养的诱导率；组织培养繁殖技术相比较其他繁殖方式，具有占用空间小，不受地区、季节限制、培养周期短、不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征、投资少，经济效益高、繁殖方式多，试用品种多的优势；本发明富硒培养基中添加富硒酵母，富硒酵母就是在培养酵母的过程中加入硒元素，酵母生长时吸收利用了硒，使硒与酵母体内的蛋白质和多糖有机结合转化为生物硒，从而消除了化学硒（如亚硒酸钠）对人体的毒副反应和肠胃刺激，使硒能够更高效、更安全地被人体吸收利用；目前组织培养技术虽然比较成熟，但是仍存在诱导率低的问题，本发明将接种后的培养瓶，进行一定激光强度的照射，可加快有丝分裂频率，促使细胞分化增殖，增加组织培养的诱导率，提高花生的产量，此外激光刺激，加速细胞对硒元素以及其他营养元素的吸收富集，使培养基中的营养成分的生物利用度达到最大，此外富硒培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤和2,4-二氯苯氧乙酸促进细胞分裂、分化，加快植株生长发育。本发明种植方法产出的花生安全、无毒、无害、生物利用度高，并且繁殖率高，花生品质好，富含硒元素，对人体健康非常有益，具有很好的市场推广价值。具体实施方式实施例1一种富硒花生的种植方法，包括以下步骤：（1）前处理：将花生置于自来水下流水冲洗30min，然后将花生置于超净工作台中进行消毒、灭菌，后在取出花生米，切成30mm3的小块备用；（2）接种：将步骤（1）中的小块花生米置于富硒培养基中，每瓶接种2块小块花生米，它们接近等间距，然后封口膜封好培养瓶；（3）激光照射：将步骤（2）中的培养瓶进行激光照射3min；（4）培养：将步骤（3）中激光照射后的培养瓶置于培养箱中进行培养，培养时间为31d，获得花生组培苗；（5）移栽：打开步骤（4）中培养瓶的封口膜，将培养瓶置于室温放置3d，然后取出组培苗移栽到种植田内。进一步的，所述步骤（1）中消毒、灭菌的具体程序，包括以下步骤：a.灭菌液的制备：称取3份十二烷基二羟乙基甜菜碱、4份芦荟胶、6份75%酒精共同置于无菌三角瓶中，将三角瓶置于磁力搅拌器上，磁力搅拌器的转速为150rpm，温度为39℃，搅拌的时间为35min；b.将操作a制得的灭菌液置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为120℃，灭菌的时间为16min；c.取出操作b中灭菌后的灭菌液置于超净工作台中冷却至室温备用；d.在超净工作台中，将花生置于500ml的烧杯中，然后向烧杯中加入重量份为花生总重量份7倍的操作c所获得的灭菌液，灭菌时间为15min，期间用手腕不断晃动烧杯；e.取出操作d获得的花生置于无菌水中浸泡12min，然后取出花生用无菌水淋洗6min后备用。优选的，所述步骤（2）中富硒培养基的配制，包括以下步骤：a.量取500份的去离子水置于大烧杯中，将水煮至沸腾，再称取6份琼脂、10份白糖、2份富硒酵母、1.5份硝酸铵、1.8份硝酸钾、0.16份磷酸二氢钾、0.36份硫酸镁、0.0007份碘化钾、0.005份硼酸、0.021份硫酸锰、0.0085份硫酸锌、0.0002份钼酸钠、0.00002份硫酸铜、0.00002份氯化钴、0.035份乙二胺四乙酸二钠、0.026份硫酸亚铁、1份复合维生素、0.001份甘氨酸依次加入到大烧杯中，待各组分完全溶解后，称取0.43份氯化钙加入到大烧杯中，继续加热3min后，向大烧杯内加入去离子水定容至1l，得富硒培养基溶液；b.将操作a获得的富硒培养基溶液分装到培养瓶中，每瓶分装20ml，然后封口膜封好，将所有的培养瓶均置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为120℃，灭菌的时间为18min；c.将操作b中灭菌后的富硒培养基置于超净工作台中，带培养瓶的温度冷却至50℃时，量取0.002份摩尔浓度为1mol/l的6-苄氨基腺嘌呤和0.001份摩尔浓度为1.5mol/l的2,4-二氯苯氧乙酸加到每个培养瓶中，摇匀静置备用。优选的，所述步骤（3）中激光照射的激光强度为400w/cm2。优选的，所述步骤（4）中培养的光照条件为每天光照16h，黑暗8h，培养的温度为25℃。实施例2一种富硒花生的种植方法，包括以下步骤：（1）前处理：将花生置于自来水下流水冲洗35min，然后将花生置于超净工作台中进行消毒、灭菌，后在取出花生米，切成35mm3的小块备用；（2）接种：将步骤（1）中的小块花生米置于富硒培养基中，每瓶接种3块小块花生米，它们接近等间距，然后封口膜封好培养瓶；（3）激光照射：将步骤（2）中的培养瓶进行激光照射5min；（4）培养：将步骤（3）中激光照射后的培养瓶置于培养箱中进行培养，培养时间为39d，获得花生组培苗；（5）移栽：打开步骤（4）中培养瓶的封口膜，将培养瓶置于室温放置4d，然后取出组培苗移栽到种植田内。进一步的，所述步骤（1）中消毒、灭菌的具体程序，包括以下步骤：a.灭菌液的制备：称取4份十二烷基二羟乙基甜菜碱、5份芦荟胶、7份75%酒精共同置于无菌三角瓶中，将三角瓶置于磁力搅拌器上，磁力搅拌器的转速为165rpm，温度为41℃，搅拌的时间为40min；b.将操作a制得的灭菌液置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为121℃，灭菌的时间为18min；c.取出操作b中灭菌后的灭菌液置于超净工作台中冷却至室温备用；d.在超净工作台中，将花生置于500ml的烧杯中，然后向烧杯中加入重量份为花生总重量份7.5倍的操作c所获得的灭菌液，灭菌时间为18min，期间用手腕不断晃动烧杯；e.取出操作d获得的花生置于无菌水中浸泡13min，然后取出花生用无菌水淋洗7min后备用。优选的，所述步骤（2）中富硒培养基的配制，包括以下步骤：a.量取550份的去离子水置于大烧杯中，将水煮至沸腾，再称取7份琼脂、20份白糖、2.5份富硒酵母、1.6份硝酸铵、1.9份硝酸钾、0.17份磷酸二氢钾、0.37份硫酸镁、0.0008份碘化钾、0.006份硼酸、0.022份硫酸锰、0.0086份硫酸锌、0.00025份钼酸钠、0.000025份硫酸铜、0.000025份氯化钴、0.0355份乙二胺四乙酸二钠、0.027份硫酸亚铁、1.5份复合维生素、0.0015份甘氨酸依次加入到大烧杯中，待各组分完全溶解后，称取0.44份氯化钙加入到大烧杯中，继续加热4min后，向大烧杯内加入去离子水定容至1l，得富硒培养基溶液；b.将操作a获得的富硒培养基溶液分装到培养瓶中，每瓶分装25ml，然后封口膜封好，将所有的培养瓶均置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为121℃，灭菌的时间为19min；c.将操作b中灭菌后的富硒培养基置于超净工作台中，带培养瓶的温度冷却至55℃时，量取0.0025份摩尔浓度为1mol/l的6-苄氨基腺嘌呤和0.002份摩尔浓度为1.5mol/l的2,4-二氯苯氧乙酸加到每个培养瓶中，摇匀静置备用。优选的，所述步骤（3）中激光照射的激光强度为450w/cm2。优选的，所述步骤（4）中培养的光照条件为每天光照18h，黑暗6h，培养的温度为27℃。实施例3一种富硒花生的种植方法，包括以下步骤：（1）前处理：将花生置于自来水下流水冲洗40min，然后将花生置于超净工作台中进行消毒、灭菌，后在取出花生米，切成40mm3的小块备用；（2）接种：将步骤（1）中的小块花生米置于富硒培养基中，每瓶接种4块小块花生米，它们接近等间距，然后封口膜封好培养瓶；（3）激光照射：将步骤（2）中的培养瓶进行激光照射7min；（4）培养：将步骤（3）中激光照射后的培养瓶置于培养箱中进行培养，培养时间为48d，获得花生组培苗；（5）移栽：打开步骤（4）中培养瓶的封口膜，将培养瓶置于室温放置5d，然后取出组培苗移栽到种植田内。进一步的，所述步骤（1）中消毒、灭菌的具体程序，包括以下步骤：a.灭菌液的制备：称取5份十二烷基二羟乙基甜菜碱、6份芦荟胶、8份75%酒精共同置于无菌三角瓶中，将三角瓶置于磁力搅拌器上，磁力搅拌器的转速为180rpm，温度为43℃，搅拌的时间为45min；b.将操作a制得的灭菌液置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为122℃，灭菌的时间为20min；c.取出操作b中灭菌后的灭菌液置于超净工作台中冷却至室温备用；d.在超净工作台中，将花生置于500ml的烧杯中，然后向烧杯中加入重量份为花生总重量份8倍的操作c所获得的灭菌液，灭菌时间为21min，期间用手腕不断晃动烧杯；e.取出操作d获得的花生置于无菌水中浸泡14min，然后取出花生用无菌水淋洗8min后备用。优选的，所述步骤（2）中富硒培养基的配制，包括以下步骤：a.量取600份的去离子水置于大烧杯中，将水煮至沸腾，再称取8份琼脂、30份白糖、3份富硒酵母、1.7份硝酸铵、2份硝酸钾、0.18份磷酸二氢钾、0.38份硫酸镁、0.0009份碘化钾、0.007份硼酸、0.023份硫酸锰、0.0087份硫酸锌、0.0003份钼酸钠、0.00003份硫酸铜、0.00003份氯化钴、0.036份乙二胺四乙酸二钠、0.028份硫酸亚铁、份复合维生素、0.002份甘氨酸依次加入到大烧杯中，待各组分完全溶解后，称取0.45份氯化钙加入到大烧杯中，继续加热5min后，向大烧杯内加入去离子水定容至1l，得富硒培养基溶液；b.将操作a获得的富硒培养基溶液分装到培养瓶中，每瓶分装30ml，然后封口膜封好，将所有的培养瓶均置于高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌的温度为122℃，灭菌的时间为20min；c.将操作b中灭菌后的富硒培养基置于超净工作台中，带培养瓶的温度冷却至60℃时，量取0.003份摩尔浓度为1mol/l的6-苄氨基腺嘌呤和0.003份摩尔浓度为1.5mol/l的2,4-二氯苯氧乙酸加到每个培养瓶中，摇匀静置备用。优选的，所述步骤（3）中激光照射的激光强度为500w/cm2。优选的，所述步骤（4）中培养的光照条件为每天光照20h，黑暗4h，培养的温度为29℃。对比实施例1本对比实施例1与实施例2相比，将步骤（1）前处理中的消毒、灭菌程序换成常规的消毒、灭菌程序，除此外的方法步骤均相同。对比实施例2本对比实施例2与实施例2相比，省去步骤（2）激光照射，除此外的方法步骤均相同。对照组1现有的花生种子的组织培养方法。为了对比本发明的效果，选用同一块种植田同一批收取的品质几乎完全一致的花生作为实验对象，然后分别用实施例2、对比实施例1、对比实施例2、对照组1的培养方法进行培养，实验条件和环境控制一致，期间观察培养植株的生长、以及染菌情况，统计实验数据。具体实验对比数据如下表1所示：表1诱导率（%）染菌率（%）实施例294.71.3对比实施例191.812.3对比实施例278.54.7对照组81.612.1注：上表1中所述的诱导率具体统计的是组培苗诱导成功之后，移栽之前的诱导率，诱导率具体统计的是组培苗诱导成功之后，移栽之前的染菌率。上表1可以看出，本发明对花生的组织培养方法，其诱导率高，染菌率低，繁殖率高，培养周期短，经济效益高。对照组2申请号为201711063608.9公开的富硒花生的种植方法。为了对比本发明的效果，选用同一块种植田同一批收取的品质几乎完全一致的花生20kg作为实验对象，将选取的20kg花生均匀分成4组，每组花生5kg，然后分别用实施例2、对比实施例1、对比实施例2、对照组2的种植方法进行培养，管理方式完全一致，期间观察花生的生长状况，统计实验数据。具体实验对比数据如下表2所示：表2花生硒含量（mg/kg）花生产量kg实施例20.156875对比实施例10.152801对比实施例20.143726对照组0.132698注：上表2中所述的花生产量为实验中5kg花生种植后收取的花生产量。上表2可以看出，本发明种植方法产出的花生安全、无毒、无害、生物利用度高，并且繁殖率高，花生品质好，富含硒元素，对人体健康非常有益，具有很好的市场推广价值。当前第1页12