本发明涉及农业种植技术领域，具体涉及一种澳洲坚果保存种质的方法。
背景技术
澳洲坚果别名:昆士兰栗、澳洲胡桃、夏威夷果、昆士兰果，是一种原产于澳洲的树生坚果。澳洲坚果属常绿乔木，双子叶植物。树冠高大，叶3-4片轮生，披针形、革质，光滑，边缘有刺状锯齿。总状花序腋生，花米黄色，果圆球形，果皮革质，内果皮坚硬，种仁米黄色至浅棕色。适合生长在温和、湿润、风力小的地区。山龙眼科、澳洲坚果属植物在世界上众多的干果之中，澳洲坚果的经济价值最高，素来享有"干果之王"的誉称。分布区域:澳大利亚东部、新喀里多尼亚、印度尼西亚苏拉威西岛。此外澳洲坚果还具有很高的营养价值和药用价值。
种质资源是亲代通过生殖细胞或体细胞直接传递给子代决定其性状的遗传物质，是生物遗传变异和生物多样性的物质基础，是新品种选育和改良的遗传物质基础。种质资源的保存以种子形式保存方法为佳，此法具有最经济并能保持稳定的遗传性等优点。
夏威夷果的脂肪含量很高，因此贮存时需要特别谨慎以防腐坏，目前澳洲坚果种质资源的保存方法多为密封冷藏保存，保存时间约为1年，保存时间较短。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种保存时间长、遗传性稳定、发芽率高的澳洲坚果保存种质的方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种澳洲坚果保存种质的方法，包括以下步骤：
（1）选种：选择直径为25㎜～30㎜、果仁含水量为15.5％～20.0％且果壳表面光滑、无破损的成熟带壳澳洲坚果作为种质；
（2）干燥：将种质干燥至果仁的含水量小于5%；
（3）一次冷冻：将种质放入温度为-5℃～-1℃的冷冻库中冷冻78h～90h，得到冷冻种质；
（4）包覆包衣：在冷冻种质外表面包覆一层包衣剂，得到包覆包衣的种质，所述包衣剂按重量份计由滑石粉60～80份、营养剂10～15份、保水剂2～3份、抗菌剂0.2～0.5份、避虫剂0.01～0.03份、成膜剂5～8份、山梨糖醇15～20份组成；
（5）二次冷冻：将包覆包衣的种质放入温度为-15℃～-10℃的冷冻库中冷冻30min～50min，得到二次冷冻种质；
（6）冷藏：将二次冷冻种质放入温度为2℃～5℃的密闭容器中冷藏保存。
优选地，所述步骤（3）中冷冻库中的湿度为65%～75%。
优选地，所述步骤（4）中包覆包衣的方法为：按重量份比称取冷冻种质、水和包衣剂并混合均匀，于25℃下静置3.5h～5.5h，即得包覆包衣的种质，其中，冷冻种质：水：包衣剂的重量份比为50:47:0.85～0.95。
优选地，所述步骤（4）中的营养剂按重量份计由酪蛋白磷酸肽30～35份、卵磷脂5～10份、维生素e0.2～0.3份、维生素c0.12～0.15份组成。
优选地，所述步骤（4）中的保水剂是交联聚丙烯酸树脂。
优选地，所述步骤（4）中的抗菌剂是磷酸二氢铵。
优选地，所述步骤（4）中的避虫剂是环己胺。
优选地，所述步骤（4）中的成膜剂是水性丙烯酸乳液，所述成膜剂还含有大蒜蒜氨酸，所述大蒜蒜氨酸的浓度为75ppm～85ppm。
优选地，所述二次冷冻种质解除休眠的方法为：将二次冷冻种质放入恒温水浴设备中振荡处理20min～30min，水浴温度为30℃～40℃，振荡转速为25r/min～30r/min。
本发明的有益效果是：本发明一种澳洲坚果保存种质的方法，一次冷冻可极大减弱种质的呼吸作用，延长保存时间长的同时使其遗传性能保持稳定；包覆包衣可以在种子表层形成一层光滑的透气性薄膜，便于种子呼吸，同时具有杀灭种质外表面的病菌，防止病虫害入侵的功能；二次冷冻可以使种质硬实，再次杀灭种质外表面的病菌，同时进一步降低种质的含水量，延长种质的保存时间；一次冷冻时由于热胀冷缩作用种质外表面收缩，常温包覆包衣时种质外表面不断膨胀，使包衣包覆得更均匀，可有效防止因油脂氧化而产生的酸化，可增加包衣对水分和氧气的阻隔性，有益于种质遗传性能的稳定。
本发明一种澳洲坚果保存种质的方法，成膜剂中还含有大蒜蒜氨酸，能有效防止病虫害入侵，同时还避免了种质之间出现黏连的现象。
本发明一种澳洲坚果保存种质的方法，将二次冷冻种质放入恒温水浴设备中振荡处理，可解决硬实种质种皮透水的问题，缩短吸胀进程、提高种质萌发率。
具体实施方式
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
一种澳洲坚果保存种质的方法，包括以下步骤：
（1）选种：选择直径为25㎜、果仁含水量为15.5％且果壳表面光滑、无破损的成熟带壳澳洲坚果作为种质；
（2）干燥：将种质干燥至果仁的含水量小于5%；
（3）一次冷冻：将种质放入温度为-5℃的冷冻库中冷冻78h，得到冷冻种质，冷冻库中的湿度为65%；
（4）包覆包衣：在冷冻种质外表面包覆一层包衣剂，得到包覆包衣的种质，所述包衣剂按重量份计由滑石粉60份、营养剂10份、保水剂2份、抗菌剂0.2份、避虫剂0.01份、成膜剂5份、山梨糖醇15份组成，包覆包衣的方法为：按重量份比称取冷冻种质、水和包衣剂并混合均匀，于25℃下静置3.5h，即得包覆包衣的种质，其中，冷冻种质：水：包衣剂的重量份比为50:47:0.85，所述营养剂按重量份计由酪蛋白磷酸肽30份、卵磷脂5份、维生素e0.2份、维生素c0.12份组成；
（5）二次冷冻：将包覆包衣的种质放入温度为-15℃的冷冻库中冷冻30min，得到二次冷冻种质；
（6）冷藏：将二次冷冻种质放入温度为2℃的密闭容器中冷藏保存。
上述保水剂是交联聚丙烯酸树脂。
上述抗菌剂是磷酸二氢铵。
上述避虫剂是环己胺。
上述成膜剂是水性丙烯酸乳液，所述成膜剂还含有大蒜蒜氨酸，所述大蒜蒜氨酸的浓度为75ppm。
将上述二次冷冻种质解除休眠：将二次冷冻种质放入恒温水浴设备中振荡处理20min，水浴温度为30℃，振荡转速为25r/min，得到待播种质。
实施例2
一种澳洲坚果保存种质的方法，包括以下步骤：
（1）选种：选择直径为30㎜、果仁含水量为20.0％且果壳表面光滑、无破损的成熟带壳澳洲坚果作为种质；
（2）干燥：将种质干燥至果仁的含水量小于5%；
（3）一次冷冻：将种质放入温度为-1℃的冷冻库中冷冻90h，得到冷冻种质，冷冻库中的湿度为75%；
（4）包覆包衣：在冷冻种质外表面包覆一层包衣剂，得到包覆包衣的种质，所述包衣剂按重量份计由滑石粉80份、营养剂15份、保水剂3份、抗菌剂0.5份、避虫剂0.03份、成膜剂8份、山梨糖醇20份组成，包覆包衣的方法为：按重量份比称取冷冻种质、水和包衣剂并混合均匀，于25℃下静置5.5h，即得包覆包衣的种质，其中，冷冻种质：水：包衣剂的重量份比为50:47:0.95，所述营养剂按重量份计由酪蛋白磷酸肽35份、卵磷脂10份、维生素e0.3份、维生素c0.15份组成；
（5）二次冷冻：将包覆包衣的种质放入温度为-10℃的冷冻库中冷冻50min，得到二次冷冻种质；
（6）冷藏：将二次冷冻种质放入温度为5℃的密闭容器中冷藏保存。
上述保水剂是交联聚丙烯酸树脂。
上述抗菌剂是磷酸二氢铵。
上述避虫剂是环己胺。
上述成膜剂是水性丙烯酸乳液，所述成膜剂还含有大蒜蒜氨酸，所述大蒜蒜氨酸的浓度为85ppm。
将上述二次冷冻种质解除休眠：将二次冷冻种质放入恒温水浴设备中振荡处理30min，水浴温度为40℃，振荡转速为30r/min，得到待播种质。
实施例3
一种澳洲坚果保存种质的方法，包括以下步骤：
（1）选种：选择直径为28㎜、果仁含水量为18.8％且果壳表面光滑、无破损的成熟带壳澳洲坚果作为种质；
（2）干燥：将种质干燥至果仁的含水量小于5%；
（3）一次冷冻：将种质放入温度为-3℃的冷冻库中冷冻85h，得到冷冻种质，冷冻库中的湿度为70%；
（4）包覆包衣：在冷冻种质外表面包覆一层包衣剂，得到包覆包衣的种质，所述包衣剂按重量份计由滑石粉70份、营养剂12份、保水剂2.5份、抗菌剂0.3份、避虫剂0.02份、成膜剂7份、山梨糖醇18份组成，包覆包衣的方法为：按重量份比称取冷冻种质、水和包衣剂并混合均匀，于25℃下静置4.5h，即得包覆包衣的种质，其中，冷冻种质：水：包衣剂的重量份比为50:47:0.90，所述营养剂按重量份计由酪蛋白磷酸肽32份、卵磷脂7份、维生素e0.25份、维生素c0.13份组成；
（5）二次冷冻：将包覆包衣的种质放入温度为-13℃的冷冻库中冷冻40min，得到二次冷冻种质；
（6）冷藏：将二次冷冻种质放入温度为3℃的密闭容器中冷藏保存。
上述保水剂是交联聚丙烯酸树脂。
上述抗菌剂是磷酸二氢铵。
上述避虫剂是环己胺。
上述成膜剂是水性丙烯酸乳液，所述成膜剂还含有大蒜蒜氨酸，所述大蒜蒜氨酸的浓度为80ppm。
将上述二次冷冻种质解除休眠：将二次冷冻种质放入恒温水浴设备中振荡处理25min，水浴温度为35℃，振荡转速为27r/min，得到待播种质。
实施例4
一种澳洲坚果保存种质的方法，包括以下步骤：
（1）选种：选择直径为28㎜、果仁含水量为18.8％且果壳表面光滑、无破损的成熟带壳澳洲坚果作为种质；
（2）干燥：将种质干燥至果仁的含水量小于5%；
（3）一次冷冻：将种质放入温度为-3℃的冷冻库中冷冻85h，得到冷冻种质，冷冻库中的湿度为70%；
（4）包覆包衣：在冷冻种质外表面包覆一层包衣剂，得到包覆包衣的种质，所述包衣剂按重量份计由滑石粉70份、营养剂12份、保水剂2.5份、抗菌剂0.3份、避虫剂0.02份、成膜剂7份、山梨糖醇18份组成，包覆包衣的方法为：按重量份比称取冷冻种质、水和包衣剂并混合均匀，于25℃下静置4.5h，即得包覆包衣的种质，其中，冷冻种质：水：包衣剂的重量份比为50:47:0.90，所述营养剂按重量份计由酪蛋白磷酸肽32份、卵磷脂7份、维生素e0.25份、维生素c0.13份组成；
（5）二次冷冻：将包覆包衣的种质放入温度为-13℃的冷冻库中冷冻40min，得到二次冷冻种质；
（6）冷藏：将二次冷冻种质放入温度为3℃的密闭容器中冷藏保存。
上述保水剂是交联聚丙烯酸树脂。
上述抗菌剂是磷酸二氢铵。
上述避虫剂是环己胺。
上述成膜剂是水性丙烯酸乳液。
将上述二次冷冻种质解除休眠：将二次冷冻种质放入恒温水浴设备中振荡处理25min，水浴温度为35℃，振荡转速为27r/min，得到待播种质。
实施例5
一种澳洲坚果保存种质的方法，包括以下步骤：
（1）选种：选择直径为28㎜、果仁含水量为18.8％且果壳表面光滑、无破损的成熟带壳澳洲坚果作为种质；
（2）干燥：将种质干燥至果仁的含水量小于5%；
（3）一次冷冻：将种质放入温度为-3℃的冷冻库中冷冻85h，得到冷冻种质，冷冻库中的湿度为70%；
（4）包覆包衣：在冷冻种质外表面包覆一层包衣剂，得到包覆包衣的种质，所述包衣剂按重量份计由滑石粉70份、营养剂12份、保水剂2.5份、抗菌剂0.3份、避虫剂0.02份、成膜剂7份、山梨糖醇18份组成，包覆包衣的方法为：按重量份比称取冷冻种质、水和包衣剂并混合均匀，于25℃下静置4.5h，即得包覆包衣的种质，其中，冷冻种质：水：包衣剂的重量份比为50:47:0.90，所述营养剂按重量份计由酪蛋白磷酸肽32份、卵磷脂7份、维生素e0.25份、维生素c0.13份组成；
（5）二次冷冻：将包覆包衣的种质放入温度为-13℃的冷冻库中冷冻40min，得到二次冷冻种质；
（6）冷藏：将二次冷冻种质放入温度为3℃的密闭容器中冷藏保存，即得待播种质。
上述保水剂是交联聚丙烯酸树脂。
上述抗菌剂是磷酸二氢铵。
上述避虫剂是环己胺。
上述成膜剂是水性丙烯酸乳液，所述成膜剂还含有大蒜蒜氨酸，所述大蒜蒜氨酸的浓度为80ppm。
对比例1
与实施例3相比，对比例1一种澳洲坚果保存种质的方法未进行步骤（2），其余保存种质的步骤与实施例3相同。
对比例2
与实施例3相比，对比例2一种澳洲坚果保存种质的方法未进行步骤（4），其余保存种质的步骤与实施例3相同。
下表1给出实施例1-5和对比例1-2的澳洲坚果保存种质状况的观察结果。
由上述澳洲坚果种植状况的观察结果可知，本发明一种澳洲坚果保存种质的方法，冷冻后常温包覆包衣可使包衣包覆得更均匀，可增加包衣对水分和氧气的阻隔性，可有效防止因油脂氧化而产生的酸化，有益于种质遗传性能的稳定；成膜剂中还含有大蒜蒜氨酸，能有效防止病虫害入侵，同时还避免了种质之间出现黏连的现象；将二次冷冻种质放入恒温水浴设备中振荡处理，可解决硬实种质种皮透水的问题，缩短吸胀进程、提高种质萌发率。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。