本发明涉及杜鹃繁殖技术领域，具体涉及一种山光杜鹃种子组培快繁方法。
背景技术：
我国杜鹃资源十分丰富，但对杜鹃的开发利用却非常有限。野生杜鹃资源遭到人为破坏、盗采等现象普遍，一些重要的野生杜鹃资源数量急剧减少或已濒临灭绝。因此，保护、开发和利用野生杜鹃花资源已非常紧迫。山光杜鹃分布于甘肃南部、湖北西部和四川西部至西北部，生于海拔2100-3650米的林下或杂木林和箭竹灌丛中，数量有限，如直接从野外采集应用，会对野生资源造成破坏。通常采用的繁殖方法为播种、扦插、嫁接等，这些繁殖方法一方面受母株材料和繁殖季节的影响，不适宜进行大规模商业化生产，无法满足市场的需要。另一方面存在着种子不易采集、扦插不易生根等问题，短期无法繁育出大量苗木。
山光杜鹃的繁殖方式主要为播种、扦插和嫁接。但因分布海拔高，种子、插穗、接穗不易采集。扦插、嫁接繁殖，因采穗数量有限和扦插、嫁接受季节影响，导致育苗数量不能满足大规模种植的需要。
技术实现要素：
针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种杜鹃种子组培快繁方法，该方法可有效解决现有的繁殖方法存在的受母株材料和繁殖季节的影响大，繁殖速度慢的问题。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于超净工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用次氯酸钠浸泡消毒，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于anderson培养基中，在适宜条件下培养；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到增殖培养基中培养；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至1-2cm时，置于含生根培养基的培养瓶中进行生根培养；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡3min，最后将组培苗移栽到混合基质中培养。
进一步地，步骤(1)中用浓度为2％的次氯酸钠进行消毒，消毒时间为2-4min。
进一步地，步骤(2)中的anderson培养基中还包含有28-32g/l的蔗糖溶液和4-8g/l的琼脂溶液。
进一步地，步骤(2)中的anderson培养基中还包含有30g/l的蔗糖溶液和6g/l的琼脂溶液，所述anderson培养基的ph值为5.8。
进一步地，步骤(3)中的增殖培养基是以read培养基为基础培养基，再加入0.5-2.5mg/lzt和0.05-0.25mg/lnaa组成。
进一步地，步骤(3)中的增殖培养基是以read培养基为基础培养基，再加入2mg/lzt和0.1mg/lnaa组成。
进一步地，步骤(4)中的生根培养基是以anderson培养基为基础培养基，再加入0.5-1.5mg/liba和0.5-1.5mg/lnaa组成。
进一步地，步骤(4)中的生根培养基是以anderson培养基为基础培养基，再加入1mg/liba和1mg/lnaa组成。
进一步地，步骤(5)中的培养瓶中还添加有活性炭，其浓度为0.5-2g/l。
进一步地，步骤(6)中的混合基质由草炭土、珍珠岩和蛭石按照1-2:1-2:1-2的重量比混合制成。
采取上述方案的有益效果为：
1、本发明通过将山光杜鹃种子进行灭菌、基础培养、增殖培养和生根培养等一系列工序，快速获得大量的山光杜鹃组培苗，在灭菌过程中，选用合适浓度的次氯酸钠作为杀菌剂，可有效将山光杜鹃种子表面的细菌杀死，并且不会对种子造成损伤；增殖培养时选用read培养基，由于read培养基中的营养成分浓度较低，其中的n含量适中，更加适合杜鹃的生长发育；并向其中添加了合适浓度的细胞分裂素zt和生长素naa，细胞分裂素zt与生长素naa协同作用，使丛生芽增殖速度加快，缩短增殖时间。
生根培养基采用wpm培养基做为基础培养基，向其中添加有合适浓度的生长素iba和naa，相对于前两阶段，此时生长素浓度进一步增多，以便满足于山光杜鹃生根的需要，iba协同naa，促使根系粗壮；从基础培养到增殖培养再到生根培养，前面每一步均作为后续步骤的生长基础，在该基础上对培养基、生长调节剂进行调整，满足山光杜鹃不同阶段对营养的需求，以便快速繁殖出优质的组培苗；整个培养过程中，具有使用的外加激素少，操作简单，增殖速度快的优势。
2、生根培养的培养瓶中添加有活性炭，活性炭既可以作为吸附的介质，将培养瓶中产生的有害物质吸附，可以促进山光杜鹃根系健康快速生长，由于其中含有微量的氧、氮等元素，还可以增加水中的氧、氮等元素的含量，为山光杜鹃根系提供营养，促进根系快速生长发育。
3、移栽时，混合基质中草炭土：珍珠岩：蛭石的比例为1:1:1，此时能显著增加移栽成活率，草炭土具有丰富的营养和良好的保水性；而珍珠岩、蛭石具有独特的毛细管作用，可提高基质的孔隙度，改善其通气、排水性，有利于氧气扩散。因此，珍珠岩、蛭石和草炭土配合作用可以具有良好的生根效果，特别是显著促进根长的生长。
具体实施方式
实施例1
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于超净工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用2％次氯酸钠浸泡消毒2min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有28g/l的蔗糖和4g/l的琼脂的anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到由read培养基添加0.5mg/lzt和0.1mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度为23℃，空气相对湿度为57％，光照时间为14h/d，光照强度为4000lx的条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加0.5mg/liba、0.5mg/lnaa和1g/l活性炭组成的生根培养基进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡3min，最后将组培苗移栽到由草炭土、珍珠岩和蛭石按照1:1:1的重量比混合的基质中，20天后统计移栽成活率。
实施例2
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于超净工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用2％次氯酸钠浸泡消毒4min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有32g/l的蔗糖和8g/l的琼脂的anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到由read培养基添加2.5mg/lzt和0.25mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加1.5mg/liba、1.5mg/lnaa和2g/l活性炭组成的生根培养基进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡3min，最后将组培苗移栽到由草炭土、珍珠岩和蛭石按照1:2:2的重量比混合的基质中，20天后统计移栽成活率。
实施例3
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于超净工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用2％次氯酸钠浸泡消毒3min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有30g/l的蔗糖和6g/l的琼脂的anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到由read培养基添加2mg/lzt和0.1mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加1mg/liba、1mg/lnaa和0.5g/l活性炭组成的生根培养基进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡3min，最后将组培苗移栽到由草炭土、珍珠岩和蛭石按照1:1:1的重量比混合的基质中，20天后统计移栽成活率。
实施例4
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于超净工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用2％次氯酸钠浸泡消毒5min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有32g/l的蔗糖和8g/l的琼脂的anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的苗茎段，将其接种到由read培养基添加2mg/lzt和0.05mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加1mg/liba、1mg/lnaa和1.5g/l活性炭组成的生根培养基进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡3min，最后将组培苗移栽到由草炭土、珍珠岩和蛭石按照2:1:1的重量比混合的基质中，20天后统计移栽成活率。
对比例1
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍；然后用0.1％升汞浸泡消毒1min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有30g/l的蔗糖和6g/l的琼脂的anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到由wpm培养基添加2mg/lzt和0.1mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加1mg/lnaa和0.1g/l活性炭组成的生根培养基进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡3min，最后将组培苗移栽到由珍珠岩和蛭石按照1:1的重量比混合的基质中，20天后统计移栽成活率。
对比例2
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用0.1％升汞浸泡消毒2min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有35g/l蔗糖和7g/l琼脂anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到由anderson培养基添加2mg/lzt和0.1mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加1mg/lnaa和0.5g/l活性炭组成的生根培养基中进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡2min，最后将组培苗移栽到由草炭土和蛭石按照1:1的重量比混合的基质中，20天后统计移栽成活率。
对比例3
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用0.1％升汞浸泡消毒3min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有30g/l的蔗糖和6g/l的琼脂的anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到由read培养基添加0.25mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加1mg/liba和1mg/lnaa组成的生根培养基中进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡2min，最后将组培苗移栽到由草炭土、珍珠岩和蛭石按照1:1:1的重量比混合的基质中，20天后统计移栽成活率。
对比例4
一种山光杜鹃组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材与灭菌：选取山光杜鹃成熟种子，用纱布包裹，置于流水下冲洗10min后置于工作台上，先用75％酒精漂洗30s，再用无菌水清洗两遍，然后用0.1％升汞浸泡消毒4min，最后用无菌水冲洗3次；
(2)培养基培养：将步骤(1)处理后的种子播种于含有30g/l的蔗糖和6g/l的琼脂的anderson培养基中，培养基的ph值为5.8，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，统计发芽率、发芽势和萌发时滞；
(3)增殖培养：在步骤(2)培养的无菌苗上剪取1-1.5cm的茎段，将其接种到由read培养基添加3mg/lzt和0.5mg/lnaa组成的增殖培养基中，在温度(25±2)℃，空气相对湿度60％左右，光照时间为16h/d，光照强度4000-5000lx条件下培养，40天后统计增殖倍数；
(4)瓶内生根：当步骤(3)增殖培养得到的丛生芽长至2cm时，置于由anderson培养基添加1mg/liba组成的生根培养基中进行生根培养，30天后统计生根率和根长；
(5)炼苗：当步骤(4)中的组培苗根系长至1-2cm时，将培养瓶口打开，在室内散射光下开口炼苗，一周后取出组培苗；
(6)移栽：将组培苗根部培养基洗净，然后将组培苗根部置于质量浓度为0.2％的多菌灵溶液中浸泡3min，最后将组培苗移栽到由草炭土中，20天后统计移栽成活率。
试验例
按照实施例1-4和对比例1-4的方法进行繁殖，并记录结果，具体试验结果见表1和表2。
表1：发芽率的统计
表2：组培苗的生长状况
通过表1和表2的数据可以看出，按照实施例1-4中的方法进行种子组培快繁相对于按照对比例1-4中的方法进行种子组培快繁具有发芽率、增殖倍数和生根率高的优点，尤其是按照实施例3中的方法对山光杜鹃种子进行组培快繁，其发芽率、增殖倍数和生根率最高，培养出的组培苗根系最多，且粗壮；组培苗的叶片最厚，颜色最深。