本发明涉及细胞冻存技术领域，特别涉及一种免疫细胞冻存方法。
背景技术：
现有细胞冻存液的配当多采用dmso联合动物血清，大部分为10％的dmso与90％的胎牛血清，但由于dmso含量仍较高，具有相当的毒性，对病人身体不利，并且免疫细胞易受冷冻损伤，安全性低，对细胞的损伤大，免疫细胞的复苏成活率低。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种免疫细胞冻存方法，所要解决的技术问题是：免疫细胞易受冷冻损伤，安全性低，对细胞的损伤大，免疫细胞的复苏成活率低。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜3-7ml、右旋糖酐2-6ml、细胞培养基15-25ml、人血清白蛋白2-4ml、棉籽糖2-4ml、葡萄糖2-4ml、丙二醇1-3ml和人自体血浆60-80ml；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
进一步，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜3ml、右旋糖酐2ml、细胞培养基15ml、人血清白蛋白2ml、棉籽糖2ml、葡萄糖2ml、丙二醇1ml和人自体血浆80ml。
进一步，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜7ml、右旋糖酐6ml、细胞培养基25ml、人血清白蛋白4ml、棉籽糖4ml、葡萄糖4ml、丙二醇3ml和人自体血浆60ml。
进一步，所述免疫细胞冻存液由以下原料组成：二甲基亚砜5ml、右旋糖酐4ml、细胞培养基20ml、人血清白蛋白3ml、棉籽糖3ml、葡萄糖3ml、丙二醇2ml和人自体血浆70ml。
进一步，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
进一步，所述细胞培养基为dmem/f12培养基或rpmi-1640培养基。
进一步，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
本发明的有益效果是：本发明冻存液中细胞培养基可保持渗透压、酸碱平衡和提供营养，人血白蛋白在一定程度上可以替代胎牛血清在冻存中发挥的作用，同时添加了棉籽糖、葡萄糖和人血清白蛋白有助于延长细胞的存活期，保护细胞结构组织不被自由基破坏，丙二醇可替代二甲基亚砜的保护作用，保证细胞在接近冰点时胞内水分不会结晶，降低二甲基亚砜的使用量，避免产生副作用；从而实现有效保护免疫细胞免受冷冻损伤，安全性高，对细胞的损伤小，可以提高免疫细胞的复苏成活率，复苏后的成活率可以达到96%以上。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜3ml、右旋糖酐2ml、细胞培养基15ml、人血清白蛋白2ml、棉籽糖2ml、葡萄糖2ml、丙二醇1ml和人自体血浆80ml；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为dmem/f12培养基或rpmi-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例2：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜7ml、右旋糖酐6ml、细胞培养基25ml、人血清白蛋白4ml、棉籽糖4ml、葡萄糖4ml、丙二醇3ml和人自体血浆60ml；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为dmem/f12培养基或rpmi-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例3：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜5ml、右旋糖酐4ml、细胞培养基20ml、人血清白蛋白3ml、棉籽糖3ml、葡萄糖3ml、丙二醇2ml和人自体血浆70ml；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为dmem/f12培养基或rpmi-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例4：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜2ml、右旋糖酐4ml、细胞培养基18ml、人血清白蛋白3ml、棉籽糖3ml、葡萄糖4ml、丙二醇1ml和人自体血浆75ml；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为dmem/f12培养基或rpmi-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例5：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜5ml、右旋糖酐5ml、细胞培养基22ml、人血清白蛋白2ml、棉籽糖2ml、葡萄糖2ml、丙二醇1ml和人自体血浆69ml；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为dmem/f12培养基或rpmi-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
实施例6：
一种免疫细胞冻存方法，包括以下步骤：
制备免疫细胞冻存液，免疫细胞冻存液由以下原料组成：
二甲基亚砜5ml、右旋糖酐4ml、细胞培养基22ml、人血清白蛋白2ml、棉籽糖2ml、葡萄糖4ml、丙二醇2ml和人自体血浆65ml；
利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞。
上述实施例中，所述人自体血浆的制备包括以下步骤：将人体外周血置于无菌离心管中进行离心，取上层血浆进行灭活，将灭火后的血浆转移至新的离心管中，再进行离心吸取上清，即为人自体血浆。
上述实施例中，所述细胞培养基为dmem/f12培养基或rpmi-1640培养基。
上述实施例中，所述葡萄糖由食用玉米淀粉用食品级酸和/或酶部分水解后所得的糖类水溶液，经净化、浓缩而成。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。