一种用于脱细胞板层角膜的保存运输液的制作方法

本发明涉及医疗材料的保存运输技术领域，具体涉及一种脱细胞板层角膜的保存运输液。

背景技术：

目前角膜移植根据移植片成分和手术方式分为穿透性角膜移植、板层角膜移植和角膜内皮移植，板层角膜移植和角膜内皮移植具有排斥发生率少，远期并发症少等优点，手术量逐年增加。板层角膜移植由于不受材料保存时限的限制，非常适合于角膜材料来源不足的国家使用。

角膜保存液的成分直接影响角膜质量。现有的角膜保存液仅适合于穿透角膜移植或内皮移植，不适合脱细胞板层角膜的保存。亟需研发一种脱细胞板层角膜的保存运输液。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种用于脱细胞板层角膜的保存运输液。该用于脱细胞板层角膜的保存运输液适用于生物材料如脱细胞板层角膜胶原结构和稳定性的保护以及角膜外观和透明度的维持，同时可以避免角膜因为辐照灭菌所造成的伤害。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于脱细胞板层角膜的保存运输液，包括以下重量百分含量的成分：厚度维持剂61%~90%，抗氧化剂0.1%~2%，余量为溶剂；所述厚度维持剂为右旋糖酐、硫酸软骨素、海藻酸钠和透明质酸钠中的一种或几种与甘油的混合物，保存运输液中甘油的重量百分含量为60%~80%；所述抗氧化剂为超氧化物歧化酶、褪黑素、n-乙酰半胱氨酸和还原型谷胱甘肽中的一种或几种。

进一步地，所述保存运输液的ph值为6.0~8.0。

优选地，所述透明质酸钠的分子量为20万~80万。

更优选地，所述透明质酸钠的分子量为20万~40万。

进一步地，所述右旋糖苷的分子量为2万~4万。

进一步地，所述保存运输液中n-乙酰半胱氨酸的重量百分含量为0.1%~1.5%。

进一步地，所述超氧化物歧化酶的活性为2500iu/mg~3000iu/mg，超氧化物歧化酶选自铜锌超氧化物歧化酶、锰超氧化物歧化酶或铁超氧化物歧化酶。

进一步地，所述溶剂为去离子水、磷酸盐缓冲液或生理盐水。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明采用右旋糖酐、硫酸软骨素、海藻酸钠和透明质酸钠中的一种或几种与甘油的混合物作为厚度维持剂，特定量的甘油具有脱水效果，并且具有抗菌和使病毒失活作用，在维持角膜胶原结构方面具有一定的优势，且甘油无细胞毒性，分子量小，易溶于水。

2、本发明优选分子量为20万~80万的透明质酸钠，尤其是分子量为20万~40万的透明质酸钠，透明质酸钠广泛存在于动物和人体中，是人眼球玻璃体的主要组成部分，在特定的浓度时有脱水效果，高分子透明质酸钠分子量较高，容易成膜，形成溶液较粘稠，不方便角膜的保存，而低分子量的透明质酸钠在保证溶液黏度的前提下，还能够维持角膜的厚度，是较理想的组分之一。硫酸软骨素对角膜胶原纤维具有保护作用，能促进基质中纤维的增长，与角膜有较强的亲和性；海藻酸钠作为亲水性物质，对角膜胶原厚度的维持有一定的作用。

3、右旋糖酐根据聚合葡萄糖的数目不同，具有不同分子量的产品，本发明优选分子量2万~4万的低分子右旋糖酐，在保存运输液中，可以有效提高保存运输液的胶体渗透压，防止角膜复水。

4、本发明采用超氧化物歧化酶、褪黑素、n-乙酰半胱氨酸和还原型谷胱甘肽中的一种或几种作为抗氧化剂，可以有效的清除自由基；由于单独甘油保存过程中氧化还原反应会造成脱细胞角膜基质的胶原破坏，造成角膜的老化和变黄，应用本发明中的抗氧化剂可以有效的清除自由基，保护角膜的胶原结构和透明度，防止角膜变黄老化。

5、本发明的脱细胞板层角膜保存运输液适用于生物材料如脱细胞板层角膜胶原结构和稳定性的保护以及角膜外观和透明度的维持，同时可以避免角膜因为辐照灭菌所造成的伤害。

附图说明

图1为采用本发明实施例3的保存运输液保存3个月后的脱细胞板层角膜外观图。

图2为采用本发明实施例4的保存运输液保存3个月后的脱细胞板层角膜外观图。

图3为采用本发明实施例5的保存运输液保存6个月后的脱细胞板层角膜外观图。

图4为采用95%甘油保存3个月后的脱细胞板层角膜外观图。

图5为采用95%甘油保存6个月后的脱细胞板层角膜外观图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

实施例1

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油65%，分子量为2万~4万的右旋糖苷6%，n-乙酰半胱氨酸0.2%，余量为去离子水。

本实施例的脱细胞板层角膜保存运输液的制备方法为：将n-乙酰半胱氨酸和分子量为2万~4万的右旋糖苷溶解于去离子水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.2，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对厚度为0.49mm的脱细胞板层角膜进行保存，保存1周后测量角膜厚度为0.49±0.04mm，保存2周后测量角膜厚度为0.48±0.05mm，保存6个月后测量角膜厚度为0.48±0.08mm，保存后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例2

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油65%，硫酸软骨素2%，分子量为20万~40万的透明质酸钠0.5%，分子量为2万~4万的右旋糖苷6%，n-乙酰半胱氨酸0.2%，余量为去离子水。

本实施例的脱细胞板层角膜保存运输液的制备方法为：将n-乙酰半胱氨酸、硫酸软骨素、透明质酸钠和分子量为2万~4万的右旋糖苷溶解于去离子水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.2，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对厚度为0.49mm的脱细胞板层角膜进行保存，保存1周后测量角膜厚度为0.47±0.06mm，保存2周后测量角膜厚度为0.49±0.04mm，保存6个月后测量角膜厚度为0.48±0.05mm，保存后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例3

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油65%，硫酸软骨素6%，n-乙酰半胱氨酸0.2%，余量为去离子水。

本实施例的脱细胞板层角膜保存运输液的制备方法为：将n-乙酰半胱氨酸和硫酸软骨素溶解于去离子水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.2，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存3个月后的角膜透明度良好，无发黄现象（见图1），且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例4

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油65%，硫酸软骨素6%，n-乙酰半胱氨酸0.2%，还原型谷胱甘肽0.5%，余量为去离子水。

本实施例的脱细胞板层角膜保存运输液的制备方法为：将n-乙酰半胱氨酸、硫酸软骨素和还原型谷胱甘肽溶解于去离子水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.2，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存3个月后的角膜透明度良好，无发黄现象（见图2），且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例5

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油70%、分子量为20万~80万的透明质酸钠0.5%、硫酸软骨素1%、分子量2万~4万的右旋糖酐6%、海藻酸钠0.2%、锰超氧化物歧化酶0.5%、n-乙酰半胱氨酸0.1%、余量为去离子水。

本实施例的保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、硫酸软骨素、右旋糖酐、海藻酸钠、锰超氧化物歧化酶、n-乙酰半胱氨酸溶解于去离子水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.2，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象（见图3），且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例6

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油70%、分子量为20万~80万的透明质酸钠0.5%、硫酸软骨素2%、分子量2万~4万的右旋糖酐6%、海藻酸钠0.6%、铜锌超氧化物歧化酶0.5%、n-乙酰半胱氨酸0.4%、褪黑素0.1%、余量为生理盐水。

本实施例的保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、硫酸软骨素、右旋糖酐、海藻酸钠、铜锌超氧化物歧化酶、n-乙酰半胱氨酸、褪黑素0.1%溶解于去生理盐水，混合均匀后调节溶液ph值为7.0，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例7

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油65%、分子量为20万~80万的透明质酸钠1%、硫酸软骨素1%、分子量2万~4万的右旋糖酐10%、海藻酸钠0.2%、锰超氧化物歧化酶0.5%、n-乙酰半胱氨酸1.5%、余量为生理盐水。

本实施例的保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、硫酸软骨素、右旋糖酐、海藻酸钠、锰超氧化物歧化酶、n-乙酰半胱氨酸溶解于生理盐水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.2，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例8

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油65%、分子量为20万~80万的透明质酸钠1%、硫酸软骨素1%、分子量2万~4万的右旋糖酐10%、海藻酸钠0.2%、n-乙酰半胱氨酸0.1%、余量为生理盐水。

本实施例的保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、硫酸软骨素、右旋糖酐、海藻酸钠、n-乙酰半胱氨酸溶解于生理盐水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.5，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例9

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油60%、分子量为20万~80万的透明质酸钠0.5%、硫酸软骨素0.5%、锰超氧化物歧化酶1%、n-乙酰半胱氨酸0.5%、褪黑素0.1%、还原型谷胱甘肽0.4%、余量为磷酸盐缓冲液。

本实施例的保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、硫酸软骨素、锰超氧化物歧化酶、n-乙酰半胱氨酸、褪黑素、还原型谷胱甘肽溶解于磷酸盐缓冲液中，混合均匀后调节溶液ph值为7.5，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例10

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油60%，分子量为20万~80万的透明质酸钠0.5%、n-乙酰半胱氨酸0.5%、余量为磷酸盐缓冲液。

本实施例的脱细胞板层角膜保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、n-乙酰半胱氨酸溶解于磷酸盐缓冲液中，混合均匀后调节溶液ph值为8.0，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例11

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油80%、分子量为20万~80万的透明质酸钠1%、分子量2万~4万的右旋糖酐6%、硫酸软骨素2%、海藻酸钠1%、铁超氧化物歧化酶0.5%、n-乙酰半胱氨酸0.5%、余量为磷酸盐缓冲液。

本实施例的脱细胞板层角膜保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、右旋糖酐、硫酸软骨素、海藻酸钠、铁超氧化物歧化酶、n-乙酰半胱氨酸溶解于磷酸盐缓冲液中，混合均匀后调节溶液ph值为7.2，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

实施例12

本实施例的保存运输液包括以下重量百分含量的成分：甘油80%、分子量为20万~80万的透明质酸钠0.5%、分子量2万~4万的右旋糖酐6%、海藻酸钠0.1%、锰超氧化物歧化酶0.6%、褪黑素0.1%、还原型谷胱甘肽0.1%、余量为去离子水。

本实施例的脱细胞板层角膜保存运输液的制备方法为：将透明质酸钠、右旋糖酐、海藻酸钠、锰超氧化物歧化酶、褪黑素和还原型谷胱甘肽溶解于去离子水中，混合均匀后调节溶液ph值为7.4，然后加入甘油混合均匀。

采用本实施例的保存运输液对脱细胞板层角膜进行保存，保存6个月后的角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

本发明实施例提供的保存运输液，可以长时间维持脱细胞角膜的厚度和透明度，能广泛应用于医疗领域。采用本发明的保存运输液对削切好的脱细胞角膜产品，有一定的脱水效果，能够维持角膜的透明度和厚度。

效果评价：

将脱细胞角膜产品脱水至原始角膜厚度，然后采用400μm刀头削切特定厚度的前弹力层和部分基质层，采用测厚规测定角膜厚度，之后放入本发明实施例5的保存运输液中和95%浓度的甘油保存液中，一段时间后测定角膜的厚度、外观和透明度等参数，得到放入保存液后不同时间的厚度变化比例，见表1。

表1脱细胞角膜产品放入不同保存液后的相关参数变化

从表1中可以看出，传统的甘油保存液，虽然可以维持角膜的厚度，但是角膜有变黄变硬趋势。本发明的保存运输液可以有效的维持角膜的厚度和透明度以及弹性，且手术前只需稍加涮洗，操作简单方便。

经试验，本发明的保存运输液，辐照或电子束灭菌后无颜色变化，且无刺激性气味。本发明的保存运输液于4℃保存角膜6个月，角膜透明度良好，无发黄现象，且能保持良好的厚度，韧性和弹性，复水后不会出现溶胀现象。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。