本发明属于植物培育技术领域，具体涉及一种白芨无菌苗快速诱导丛生芽及生根快繁的方法。
背景技术：
白芨(bletillastriata)，为兰科白芨属多年生草本，亦称连及草、白及、甘根、紫兰等，广泛分布于长江流域各省，日本、朝鲜也有分布。白芨鳞茎可入药，为我国传统中药，具有止血补肺、生肌止痛之效，常用来治疗吐血、肺病、慢性胃溃疡等。白芨花色为白色、黄色或红紫色，也是一种很好的观赏植物。另外，由于白芨中含量较高的白芨胶可替代阿拉伯胶等，作为混悬剂及乳化剂，广泛用于食品及化工领域。近年来，随着白芨市场需求量的不断攀升，野生白芨遭到过度采挖，导致其野生资源急剧减少，濒临灭绝，已被列为《国家重点保护野生植物(第二批)》ii级、《濒危动植物种国际贸易公约(cites)》附录ii级(管制国际贸易的物种)保护物种。
白芨目前通过种子无菌萌发快繁实现产业化育苗，因为种子无菌萌发被认为是非常有效的途径，但是这些方法周期较长、步骤多，这种方法培养的无菌苗只有一个芽，未进行丛生芽的诱导。自然状况下，白芨经过一次倒苗另外萌发2～3个侧芽实现假鳞茎的增殖增重，因此白芨瓶苗移栽到苗圃或移栽之后，经过冬天倒苗，春天发芽形成2～3个侧芽，实现白芨产量增加。因此，如果没有诱导侧芽，则形成侧芽要至少多消耗一年时间。
目前公开的文献中，公开号cn105123529a白芨快繁和高效栽培方法，该方法种子萌芽时间周期长，该现有发明的白芨种子萌芽时间有29～31d；另外诱导原球茎时间周期长，该现有发明的白芨苗诱导原球茎的时间为90天，不利于产业化发展。
发明cn109169275a一种紫花三叉白芨组培快繁培养基及方法，操作步骤复杂繁琐，该现有技术从诱导白芨种子发芽到诱导白芨苗生根，一共涉及到四个不同的培养基配方，这不仅增加了操作转接步骤，使得白芨苗的生长过程中更容易受到污染，而且还增加了大量的物资成本以及劳动力成本，同样扩繁时间周期长，该现有发明完成整个扩繁时间周期为5～6个月，时间周期过长不仅增加了投入成本，同时增加了市场成本，不利于产业化发展。
技术实现要素：
本发明主要实现了白芨苗快速诱导丛生芽以及将白芨苗诱导丛生芽和生根两步融合到一步实现，解决了目前白芨苗组织培养诱导丛生芽速率慢、增殖率低、扩繁周期长、生根率低、操作步骤繁琐等一系列问题。在白芨种子无菌萌发基础上，控制性诱导白芨丛生芽，促进假鳞茎增大，形成有3～5个侧芽的瓶苗植株，炼苗后在3个月左右即形成相当于原来两年时间形成的带2～3个侧芽的白芨多芽种苗，实现了快速、高增殖率、增殖生根一体化、稳定地增殖白芨苗，保障了中药材市场上白芨的供应量和药材质量。
具体的技术方案为：
一种白芨无菌苗快速诱导丛生芽及生根快繁的方法，包括以下步骤：
(1)采集野生成熟前黄色的白芨蒴果，密封保存于4℃环境下，接种前将白芨蒴果果荚在纯水溶液中刷洗去灰土，选择未破裂的果荚置超净工作台上用75％乙醇浸泡40s～60s，用超纯水冲洗2次，再用消毒剂浸泡15min，用超纯水冲洗3次，将其用无菌纸吸干水分后，用手术刀切去果实顶部，再从果实中部纵向剖开，将种子均匀的撒播到配制好的发芽培养基上；
步骤(1)中所述的消毒剂为0.1％升汞；所述的种子发芽培养基的配方为：1/3ms+zt0.05～0.10mg/l+naa0.8～1.2mg/l+蔗糖3％+琼脂0.5％，ph＝5.8～6.0。
(2)将步骤(1)中经处理后的白芨种子发芽培养基放入培养箱中培养，先经暗培养后转到正常培养，得到白芨无菌苗；
所述的白芨种子发芽的暗培养条件为：在暗室、温度22±2℃的条件培养48h；正常培养条件为：白天8h、温度25±2℃、光强1500～3000lx，夜晚8h、温度22±2℃，培养时间20～24d。
(3)将步骤(2)得到的白芨无菌苗在超净台中移入丛生芽诱导及生根一体化培养基中，在一定的条件下培养，得到大量生根的白芨苗；
所述白芨苗的丛生芽诱导及生根一体化培养基配方为：1/2ms+iba0.1～0.3mg/l+naa0.3～0.5mg/l+蔗糖2％+活性炭0.1％+琼脂0.6％+香蕉100g/l+蛋白胨3g/l，该培养基ph值5.7～6.3，优选为6.0。所述的培养条件为：白天8h、温度25±2℃、光强3000～7000lx，夜晚8h、温度22±2℃，培养时间40～50d；从种子发芽培养基转接到丛生芽诱导及生根一体化培养基的条件是白芨苗生长到长度为2～3cm。
(4)将步骤(3)中假鳞茎直径1～2cm的生根白芨苗移出培养箱，移到室内进行驯化；驯化完成后，洗净白芨苗上附着的培养基，然后将其移栽到生长基质中保湿培养，在一定条件下培养一段时间后移栽到大田。所述的驯化条件为：在室内自然光照下培养2～3d后，拧松培养瓶瓶盖，继续在室内自然光照下培养5～7d；所述的清洗方法为：用清水泡洗2～3次后，用清水缓慢冲洗；所述的生长基质为：疏松的沙质土壤；所述的培养条件为：每天光照时间10～12h，光强3000～4000lx，温度23～27℃，空气湿度为80％～90％。
本发明提供的一种白芨无菌苗快速诱导丛生芽及生根快繁的方法，具有的技术效果有：
(1)缩短了白芨组培苗扩繁时间，本发明将整个白芨苗组培扩繁时间缩短至2～3个月，大大节省了生产时间，降低了生产成本，增加了市场效益；
(2)将白芨苗的丛生芽诱导以及生根融合到一步完成，在一个培养基中完成了白芨苗诱导丛生芽、生根、炼苗，大大简化了操作步骤，降低了白芨苗因操作不当而造成的损失，同时降低了人工成本，增加了白芨苗的市场竞争力；
(3)稳定了白芨苗的性状表现，在白芨苗的增殖过程中，过多种类的生长激素会造成其性状表达的不稳定，该发明技术仅用了两个不同种类的培养基配方，降低了其发生性状变异的可能性，保证了白芨组培苗中各药性成分的稳定，从源头保证了药材的质量。
具体实施方式
结合实施例说明本发明的具体技术方案。
实施例1
(1)将采集到成熟的白芨蒴果果荚在纯水溶液中刷洗去灰土，选择未破裂的果荚置超净工作台上用75％乙醇浸泡60s，用超纯水冲洗2次，再用0.1％升汞浸泡15min，用超纯水冲洗3次，将其用灭菌的滤纸吸干水分后，用手术刀切去果实顶部，再从果实中部纵向剖开，将种子均匀的撒播到配方为：1/3ms+zt0.0mg/l+naa1.2mg/l+蔗糖3％+琼脂0.5％的白芨种子发芽培养基上。
(2)将步骤(1)中经处理后的白芨种子发芽培养基放入培养箱中培养，先在暗室、温度22℃的条件培养48h。然后在培养条件为：白天8h、温度25℃、光强1500～3000lx，夜晚8h、温度22℃下正常培养24d，得到白芨无菌苗；
(3)将步骤(2)得到的白芨无菌苗在超净台中移入配方为：1/2ms+iba0.3mg/l+naa0.5mg/l+蔗糖2％+活性炭0.1％+琼脂0.6％+香蕉100g/l+蛋白胨3g/l的丛生芽诱导及生根一体化培养基中，在培养条件为：白天8h、温度25℃、光强3000～7000lx，夜晚8h、温度22℃下培养45d，得到大量生根的白芨苗；
(4)将步骤(3)中得到的生根白芨苗移出培养箱，移到室内进行驯化，在室内自然光照下培养2d后，拧松培养瓶瓶盖，继续在室内自然光照下培养7d。驯化完成后，用清水泡洗2次后，用清水缓慢洗净白芨苗上附着的培养基，然后将其移栽到疏松的沙质土壤中培养，在每天光照时间为10～12h，光强3000～4000lx，温度23～27℃，空气湿度为80％～90％的条件培养一段时间后移栽到大田。
实施例2
(1)将采集到成熟的白芨蒴果果荚在纯水溶液中刷洗去灰土，选择未破裂的果荚置超净工作台上用75％乙醇浸泡50s，用超纯水冲洗2次，再用0.1％升汞浸泡15min，用超纯水冲洗3次，将其用灭菌的滤纸吸干水分后，用手术刀切去果实顶部，再从果实中部纵向剖开，将种子均匀的撒播到配方为：1/3ms+zt0.10mg/l+naa0.9mg/l+蔗糖3％+琼脂0.5％的白芨种子发芽培养基上。
(2)将步骤(1)中经处理后的白芨种子发芽培养基放入培养箱中培养，先在暗室、温度22℃的条件培养48h。然后在培养条件为：白天8h、温度25℃、光强1500～3000lx，夜晚8h、温度22℃下正常培养20～24d，得到白芨无菌苗；
(3)将步骤(2)得到的白芨无菌苗在超净台中移入配方为：1/2ms+iba(0.1～0.3mg/l)+naa0.5mg/l+蔗糖2％+活性炭0.1％+琼脂0.6％+香蕉100g/l+蛋白胨3g/l的丛生芽诱导及生根一体化培养基中，在培养条件为：白天8h、温度25℃、光强3000～7000lx，夜晚8h、温度22℃下培养50d，得到大量生根的白芨苗；
(4)将步骤(3)中得到的生根白芨苗移出培养箱，移到室内进行驯化，在室内自然光照下培养3d后，拧松培养瓶瓶盖，继续在室内自然光照下培养6d。驯化完成后，用清水泡洗2～3次后，用清水缓慢洗净白芨苗上附着的培养基，然后将其移栽到疏松的沙质土壤中培养，在每天光照时间为10～12h，光强3000～4000lx，温度23～27℃，空气湿度为80％～90％的条件培养一段时间后移栽到大田。