本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种暖木条荚蒾的离体快繁方法。
背景技术：
暖木条荚蒾viburnumburejaeticumregeletherder又名暖木条子、修枝荚蒾，忍冬科(caprifoliaceae)荚蒾属落叶灌木。生长于针、阔叶混交林中，主要分布在黑龙江、吉林、辽宁，国外朝鲜北部、俄罗斯远东地区也有分布。该树种耐阴，抗寒、抗旱，生长快，耐修剪，萌发力强，根系发达，可孤植、丛植、群植于公园、广场等绿地，也可作绿篱，在园林绿化中具有良好的应用前景，是东北地区观花赏果的优良绿化树种。
暖木条荚蒾枝叶茂盛，花色素雅，气味清香，是良好的蜜源植物；果实可食；种子含油约17％，供制肥皂用；枝条柔韧性好可供编织。荚蒾属植物药用价值极高，具有清热解毒、祛风除湿、健脾消食、强身、抗衰老等作用。现已研究表明，暖木条荚蒾茎枝的水煎液具有一定的抗炎镇咳祛痰作用。
暖木条荚蒾具有较高的园林应用价值和经济价值，但目前多处于野生状态，未得到很好地开发和利用。现存野生资源也较少，因此培育大量优质苗木势在必行。目前暖木条荚蒾主要通过播种繁殖。但其种子具有形态生理休眠特性，播种繁殖比较困难，制约了暖木条荚蒾的推广种植及应用。因此采用组织培养方法开展离体快繁的研究是一种有效的途径。因此,建立一种暖木条荚蒾的离体快繁方法,可实现规模化育苗，为其良种快速繁育提供技术支撑，从而促进其进一步综合开发利用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种暖木条荚蒾的离体快繁方法，实现规模化育苗。通过外植体选择及消毒、启动诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养、炼苗移栽等过程实现了暖木条荚蒾离体快繁。
本发明提供一种暖木条荚蒾离体快繁方法,包括以下步骤:
(1)外植体的消毒及启动诱导培养：选择生长健壮的无病虫害的幼嫩枝条为外植体，先用流水冲洗30min，剪去幼枝上的叶片，然后用滴加少量吐温80的0.1％hgcl2溶液灭菌5min左右，无菌水漂洗5次。将嫩枝修剪成1cm左右带芽茎段接种于启动诱导培养基上，置于每天光照10～12h，光照强度为15001x，培养温度为23～25℃条件下培养，直至诱导腋芽萌发生长；
(2)继代增殖培养：将腋芽萌发伸长生长的芽苗转入增殖培养基上进行继代增殖培养,置于每天光照12h,光照强度为15001x,培养温度为23～25℃条件下培养，直至腋芽萌发或形成丛生芽，继代周期为40d；
(3)生根诱导培养：将高度约为3cm生长健壮的无根苗接种到生根培养基上进行生根诱导,置于每天光照12h,光照强度为2000～25001x,培养温度为23～25℃条件下培养至生根；
(4)炼苗移栽:暖木条荚蒾在生根培养基中培养25～30d后，挑选生长健壮、根系发达的组培苗,先打开封口膜置于自然光照下炼苗3～5d,然后用清水洗净组培苗根部残留的培养基,然后用800倍多菌灵溶液浸泡20～30min，再移栽到已消毒的等体积比的珍珠岩、蛭石和腐殖土的混合基质中。
上述步骤(1)所述的启动诱导培养基为ms+1.0mg/l6-ba(6-苄氨基腺嘌呤)+0.1～0.3mg/liba(吲哚丁酸)+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph值为5.8。经过20d左右的诱导培养，腋芽萌发抽枝，35d时枝长2cm左右。
上述步骤(2)所述的增殖培养基为ms+1.0mg/l6-ba+0.3mg/liba+0.5mg/lga3(赤霉素)+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph值为5.8；平均增殖系数达6以上。
上述步骤(3)所述的生根培养基为1/2ms+0.3mg/liba+0.3mg/lnaa(萘乙酸)+15g/l蔗糖+6g/l琼脂,ph值为5.8。大约15d开始生根，30d左右时已分化8～12条粗壮的不定根，根长为1.5～2cm，生根率达到100％。
上述步骤(4)移栽前将基质用0.3％高锰酸钾溶液淋透消毒，然后再用清水冲淋2～3遍。移栽前期覆盖塑料薄膜保湿并用遮荫网适当遮阴，每天喷雾1次，移栽后期逐渐降低湿度，增加光照。移栽15d左右长出新根，移栽成活率达85％以上。保证温湿度平衡和光照需求是移栽成功的关键。
本发明的有益效果
目前国内外还未见暖木条荚蒾离体快繁的相关报道，本发明采用植物组织培养技术，通过诱导腋芽萌发和形成丛生芽的途径，可在短时间内繁育大量苗木。本发明具有增殖系数高、移栽成活率高、生长周期短等特点，大大提高了暖木条荚蒾的育苗效率，利于工厂化生产。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,不是对本发明的限制。
具体实施
(1)外植体的消毒及启动诱导培养：选择生长健壮的无病虫害的当年萌发的幼嫩枝条或萌发条为外植体，先用流水冲洗30min，然后剪去幼枝上的叶片，留2～3mm叶柄。采用两种消毒方法：一种是用10％ca(clo)2灭菌20min，无菌水漂洗3次；另一种是在0.1％hgcl2溶液中滴加少量吐温80灭菌5min，无菌水漂洗5次。将嫩枝剪成1cm左右带芽茎段接种于启动诱导培养基上，置于每天光照10～12h，光照强度为15001x，培养温度为23～25℃条件下培养。采用以下4种诱导培养基：ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/liba；ms+1.0mg/l6-ba+0.3mg/liba；ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；ms+1.0mg/l6-ba+0.3mg/lnaa；每种培养基的蔗糖浓度均为30g/l，琼脂浓度均为6g/l,ph值均为5.8。经过20d的诱导培养，添加iba的培养基中,外植体腋芽萌发生长快，两个对生侧芽分别萌发长出2片小叶；而添加naa的培养基中腋芽诱导较慢，腋芽刚刚萌动。采用10％ca(clo)2灭菌效果差，污染率达70％；而采用在0.1％hgcl2溶液中滴加少量吐温80灭菌效果好，污染率仅为10％。
(2)继代增殖培养：将腋芽萌发伸长生长的芽苗转入增殖培养基上进行继代增殖培养,置于每天光照12h,光照强度为15001x,培养温度为23～25℃条件下培养。采用以下3种增殖培养基：ms+1.0mg/l6-ba+0.3mg/liba；ms+1.0mg/l6-ba+0.3mg/liba+0.5mg/lga3；ms+1.0mg/l6-ba+0.5mg/liba；每种培养基的蔗糖浓度均为30g/l，琼脂浓度均为6g/l,ph值均为5.8。继代培养35d观察发现添加赤霉素的培养基中，在暖木条荚蒾腋芽部位形成大量丛生芽，增殖系数大于6。而未加赤霉素的只通过腋芽萌发实现增殖，同时生长素iba浓度为0.5mg/l时，经过3次继代培养，基部形成愈伤组织。
(3)生根诱导培养：将高度约为3cm生长健壮的无根苗接种到生根培养基上进行生根诱导,置于每天光照12小时,光照强度为2000～25001x,培养温度为23～25℃条件下培养。采用以下4种生根培养基：1/2ms+0.5mg/lnaa；1/2ms+0.5mg/liba；1/2ms+0.3mg/lnaa+0.3mg/liba；1/2ms+0.5mg/lnaa+0.5mg/liba。每种培养基的蔗糖浓度均为15g/l，琼脂浓度均为7g/l,ph值均为5.8。培养30d，观察并统计不同处理的生根率、生根数量及根长。
植物生长素对暖木条荚蒾生根的影响
(4)炼苗移栽:暖木条荚蒾在生根培养基中培养35d后，挑选生长健壮、根系发达的组培苗,先打开封口膜置于自然光照下炼苗3～5d,然后用清水洗净根部残留的培养基,移栽到已消毒的基质中(v珍珠岩：v蛭石：v腐殖土＝1：1：1)，移栽期间保证温湿度条件，精心管护，移栽成活率达85％以上。