本发明涉及一种葡萄新品种培育的方法。
背景技术：
：葡萄一直是全世界最重要的水果之一，其产量和面积在世界水果中均居于前列。据农业部统计资料显示，截至2016年底，我国葡萄栽培总面积为80.96万公顷，居世界第二位；产量达1374.5万吨，居世界第一位。新疆是全国最大的葡萄产区，2017年葡萄栽培面积达14.3万公顷，产量260余万吨，栽培面积和产量分别占全国的18.79％和19.47％，是新疆最具优势的果树之一。目前亟需选育适宜露地葡萄栽培优质早熟、耐贮、带香味的品种。木纳格，新疆地方特色鲜食品种，具有皮薄、肉脆、品质优、货架期长、较耐贮运等特点，但易掉粒、有大小粒现象，栽培不当易发生裂果，有红、白木纳格两个品系，在新疆栽培历史悠久，品质优异，但迁移其他地区，品质下降严重，对环境适应性不佳。莫利莎无核，由美国加利福尼亚福勒斯诺us-da-ars分部的davidramming和rontarailo培育而成，是克瑞森无核和b40-208的杂交后代，具有玫瑰香味、白色、无核、成熟晚等特点，但果穗不整齐、大小年明显。葡萄杂交育种是一项周期性较长的工作。由于杂种实生苗的童期较长，由播种至第一次开花结果一般需要3-5年时间，育成一个新品种一般需要10-15年的时间。而且葡萄和其它无性繁殖的木本果树一样，遗传上杂合程度高杂种后代分离幅度大，所需性状出现的频率较低，给育种工作带来很大的困难，需要花费较长时间和较大的人力、物力和财力。技术实现要素：本发明的目的是为了得到葡萄优良新品种，同时对现有葡萄杂交育种方法周期长、所需性状出现的频率较低的技术问题，提供了一种快速培育的方法。一种葡萄新品种快速培育的方法按照以下步骤进行：一、杂交：a、父本花粉采集5月上旬采集莫利莎葡萄的花粉；b、母本去雄5月中旬将50穗白木纳格葡萄标记，去雄后套袋；c、杂交授粉两天后的早晨，用莫利莎的花粉给去雄的白木纳格授粉，间隔一天重复一次。二、杂交胚珠及成苗培养：d、取胚准备培养基：以1lnitsch培养基为基本培养基，添加2.0mgiba、0.5mgga3、0.5mg6-ba、1.0g活性炭，各30毫升分装于玻璃三角瓶中，高温灭菌；当年7月初，采集白木纳格与莫利莎杂交后的果实，果粒留果柄从果穗剪下，用自来水、无菌水冲洗果实两遍，晾干10分钟，用75％的酒精浸泡果粒并搅动5分钟，送进超净工作室，在超净工作室中将浸泡果粒的酒精倒入500ml空杯，倒200ml酒精到另一个500ml玻璃杯中，再将果粒夹入200ml酒精中浸泡5分钟，滤干；用75％的酒精清洗双手，戴无菌手套，在超净工作室中，用一只手抓住果柄及果实上部，另一只手持手术刀在果粒靠近果柄2/5处横切一圈，深入果肉2mm，双手掰开果实，看清胚着生部位，第二刀从中竖切一刀成两半，用另一把刀的刀尖将胚珠挑入培养基中，每瓶播种胚珠20粒，每瓶胚珠播种完，将瓶口在酒精灯灭菌后盖严，将2把手术刀在酒精灯上灭菌；e、胚珠培养在温度为25℃、相对湿度45％、光强度2000lx、每天光照12h的条件下，将胚珠放入光照培养箱中进行离体培养60d；f、切胚准备胚萌发培养基：以1lnitsch培养基为基本培养基，添加1.0mgiba、0.2mgga3、1.0mg6-ba、0.5g活性炭，各30毫升分装于玻璃三角瓶中，高温灭菌；9月初，在超净工作台中，将胚珠用镊子夹住，放在培养皿上，用手术刀从中间横切，胚乳放入胚萌发培养基，每瓶播种10-12粒；每瓶播种完，将瓶口在酒精灯灭菌后盖严，将镊子、手术刀在酒精灯上灭菌，培养皿用无菌水冲洗；g、胚萌发培养在温度为25℃、相对湿度45％、光强度2000lx、每天光照12h的条件下，将胚乳放入光照培养箱中进行离体培养10d-20d，至胚开始萌发，长出胚芽和细根；h、成苗培养将胚芽接入添加iba浓度为0.1mg/l、活性炭浓度为1.0g/l、蔗糖浓度为30g/l的1/2ms培养基中，每瓶1芽，分别标记，在温度为25℃、相对湿度45％、光强度2000lx、每天光照12h的条件下，在培养箱中培养30d；三、扩繁及移栽：i、扩繁将长有8-10片叶的幼苗剪成每芽一段，接种到ms培养基中，分别标记，在组培室培养，15d-25d左右继续扩繁；j、练苗第二年2月中旬，选择根为4-5条、长3-5cm、叶子为4-5片，茎秆粗壮，基部无愈伤组织的壮苗，将三角瓶封口膜解开透气锻炼苗2-3天；将基质加水润湿后采用120℃(30min)灭菌，装入纸杯体积的1/3；用无菌水冲洗幼苗根系后移栽到纸杯中，再加纸杯体积1/3的基质，上扣塑料杯，分别标记；在组培室进行炼苗，温度控制在18-25℃、相对湿度60％-70％、光照强度1200lx，每周浇灌1000倍的多菌灵和稀释30％的ms营养液各50ml；20天后，通过斜放的方式，逐步扩大塑料杯的通风口位置至杯口1/3处；k、移栽第二年3月下旬，幼苗连同底部穿洞透水的纸杯移栽到温室中，分别标记，按照500ml/株灌足定根水并遮阴；15天后去除塑料杯和遮阴，20天为一周期灌水，同时补充10g尿素、10g磷酸钾；每月叶面喷质量浓度为25％的多菌灵可湿性粉剂500倍液，质量浓度为25％的多菌灵可湿性粉剂500倍液中尿素的质量浓度为0.3％、百菌清水乳剂1000倍液交替使用预防病虫害；每株留1蔓，副梢留2叶反复摘心，株高达到2m摘心；11月初停止生长，饱满芽30个以上，径粗0.8厘米以上；l、高接第二年5月末，采用绿枝嫁接技术，将温室中杂交苗半木质化的芽高接到大树上，分别标记。分别在6月、7月、8月，以20天为灌水周期，每月补加200g尿素+100g磷酸钾/株，8月底结束，可提早打破童期。四、鉴定l、鉴定第三年1月初，温室升温，按照温室葡萄栽培管理技术要求进行管理；5月份对有果实的株系进行品质评价，筛选出优株；m、高接第三年5月中旬，采用绿枝嫁接技术，将优株半木质化的芽高接到大树上，分别标记。第四年重复l、鉴定和m、高接，筛选出有特殊玫瑰香味、红色、早熟、粒重6-8g的优株；优选单株保留种条扩繁；五、区试第五年5月，将优选单株繁育的营养袋苗定植于苗圃；优株绿枝高接扩繁；优株评价；第六年，优株区试并评价；扩繁；第七年，优株区试并评价，示范推广。步骤j中所述基质为椰糠或蛭石。步骤h、i、j中所述ms营养液的各成分及含量如下：大量元素分子量使用浓度(mg/l)硝酸钾kno3101.211900硝酸铵nh4no380.041650磷酸二氢钾kh2po4136.09170硫酸镁mgso4·7h2o246.47370氯化钙cacl2·2h2o147.02440微量元素碘化钾ki166.010.83硼酸h3bo361.836.2硫酸锰mnso4·4h2o223.0122.3硫酸锌znso4·7h2o287.548.6钼酸钠na2moo4·2h2o241.950.25硫酸铜cuso4·5h2o249.680.025氯化钴cocl2·6h2o237.930.025铁盐乙二胺四乙酸二钠na2.edta372.2537.25硫酸亚铁feso4·7h2o278.0327.85有机成分肌醇100甘氨酸2盐酸硫胺素vb10.1盐酸吡哆醇vb60.5烟酸vb5或vpp0.5蔗糖sucrose342.3130g/l琼脂agar7g/l本发明方法缩短了葡萄杂交育种的周期，只用了6-7年的时间，就培育出葡萄杂交品种，并且得到所需性状(不仅有特殊玫瑰香味、红色、早熟等特色优势，而且兼具了木纳格葡萄肉质细致和莫莉莎特殊香味的品种特点，避免了2个亲本的晚熟劣势)，芽的多种培育方法的有机结合，芽的高接和初期高效营养扩繁技术，尤其是严格准确的高效肥水管理，以及病虫害严控，其中尿素的合理使用是本技术成功的关键，可以使得新品种周期缩短。具体实施方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式一种葡萄新品种快速培育的方法按照以下步骤进行：一、杂交：a、父本花粉采集采集带玫瑰香味的中早熟品种莫利莎的花粉；b、母本去雄将50穗白木纳格葡萄，去雄后套袋；c、杂交授粉将白木纳格与莫利莎杂交；二、杂交胚珠及成苗培养d、取胚第一年7月初，进行果实灭菌，果粒留果柄从果穗剪下，分别标记，用自来水、无菌水冲洗果实两遍，晾干10分钟，用75％的酒精浸泡果粒并搅动5分钟，送进超净工作室，在超净工作室中将浸泡果粒的酒精倒入500ml空杯，倒200ml酒精到另一个500ml玻璃杯中，再将果粒夹入200ml酒精中浸泡5分钟，滤干；用75％的酒精清洗双手，戴无菌手套，在超净工作室中，用一只手捏住果柄及果实上部，另一只手持手术刀在果粒靠近果柄2/5处横切一圈，深入果肉2mm，沿切口掰开果实，看清胚着生部位，第二刀从中竖切一刀成两半，用另一把刀的刀尖将胚珠挑入培养基中，每瓶播种胚珠20粒，每瓶胚珠播种完，将瓶口在酒精灯火焰处灭菌后盖严，将2把手术刀在酒精灯上灭菌；培养基：以1lnitsch培养基为基本培养基，添加浓度为2.0mg/liba(吲哚丁酸)、浓度为0.5mg/lga3(赤霉素)、浓度为0.5mg/l6-ba(6-苄氨基嘌呤)、浓度为1.0g/l的活性炭各30毫升分装于玻璃三角瓶中，高温灭菌；e、胚珠培养在温度为25℃、相对湿度45％、光强度2000lx、每天光照12h的条件下，将胚珠放入光照培养箱中进行离体培养60d；f、切胚准备胚萌发培养基：以1lnitsch培养基为基本培养基，添加浓度为2.0mg/liba(吲哚丁酸)、浓度为0.5mg/lga3(赤霉素)、浓度为0.5mg/l6-ba(6-苄氨基嘌呤)、浓度为0.5g/l的活性炭各30毫升分装于玻璃三角瓶中，于120℃灭菌30min；将胚珠用镊子夹住，放在培养皿上，用手术刀从中间横切，胚乳放入胚萌发培养基，每瓶播种10-12粒，分别标记；每瓶播种完，将瓶口在酒精灯灭菌后盖严，将镊子、手术刀在酒精灯上灭菌，培养皿用无菌水冲洗；g、胚萌发培养在温度为25℃、相对湿度45％、光强度2000lx、每天光照12h的条件下，将胚乳放入光照培养箱中进行离体培养10d-20d，至胚开始萌发，长出胚芽和细根；h、成苗培养将胚芽接入添加iba浓度为0.1mg/l、活性炭浓度为1.0g/l、蔗糖浓度为30g/l的1/2ms培养基中，每瓶1芽，分别标记，在温度为25℃、相对湿度45％、光强度2000lx、每天光照12h的条件下，在培养箱中培养30d；三、扩繁及移栽：i、扩繁将长有8-10片叶的幼苗剪成每芽一段，接种到培养基中，分别标记，在组培室培养，15d-25d左右继续扩繁；j、练苗第二年2月中旬，选择根为4-5条、长3-5cm、叶子为4-5片，茎秆粗壮，基部无愈伤组织的壮苗，将三角瓶封口膜解开透气锻炼苗2-3天；将基质加水润湿后采用120℃(30min)灭菌，装入纸杯体积的1/3；用无菌水冲洗幼苗根系后移栽到纸杯中，再加纸杯体积1/3的基质，上扣塑料杯，分别标记；在组培室进行炼苗，温度控制在18-25℃、相对湿度60％-70％、光照强度1200lx，每周浇灌1000倍的多菌灵和稀释30％的ms营养液各50ml；20天后，通过斜放的方式，逐步扩大塑料杯的通风口位置至杯口1/3处；k、移栽幼苗连同纸杯(底部穿洞透水)移栽到温室中，分别标记，灌足定根水(500ml/株)并遮阴；15天后去除遮阴，20天为一周期灌水，同时补充10g尿素。30天通过叶面喷25％多菌灵可湿性粉剂500倍液(加0.3％尿素)、百菌清水乳剂1000倍液交替使用，可加强肥水管理和病虫害防治，打破童期，第二年的11月初起苗假植；l、高接第二年5月末，采用绿枝嫁接技术，将温室中部分半木质化的芽高接到大树上，分别标记。分别在6、7、8月，以20天为灌水周期，每月初补加500g/株尿素，8月底结束，可提早打破童期；四、鉴定第三年4月，将温室中的全部杂交苗定植于苗圃，分别标记，分别在6、7、8月，以20天为灌水周期，每月初补加500g/株尿素，8月底结束；通过叶面喷25％多菌灵可湿性粉剂500倍液(加0.3％尿素)、百菌清水乳剂1000倍液交替使用，进行病虫害防治。提早打破童期；第四年8月，对有果实的株系进行品质评价；观察记录生物学特性；第五年9月，对有果实的株系进行品质评价，筛选出有特殊玫瑰香味、红色、早熟、粒重6-8g的优株；观察记录生物学特性；优选单株保留种条扩繁；第六年5月，将优选单株繁育的营养袋苗定植于苗圃；第七年，试种优选单株。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤g中将胚乳放入光照培养箱中进行离体培养15d。其他与具体实施方式一相同。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤i中20d继续扩繁。其他与具体实施方式一或二相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤j中所述基质为椰糠或蛭石。其他与具体实施方式一至三之一相同。具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是步骤j中所述ms营养液的各成分及含量如下：浓度为1900mg/l的硝酸钾、浓度为1650mg/l的硝酸铵、浓度为170mg/l的磷酸二氢钾、浓度为370mg/l的硫酸镁、浓度为440mg/l的氯化钙、浓度为0.83mg/l的碘化钾、浓度为6.2mg/l的硼酸、浓度为22.3mg/l的硫酸锰、浓度为8.6mg/l的硫酸锌、浓度为0.25mg/l的钼酸钠、浓度为0.025mg/l的硫酸铜、浓度为0.025mg/l的氯化钴、浓度为37.25mg/l的乙二胺四乙酸二钠、浓度为27.85mg/l的硫酸亚铁、浓度为100mg/l的肌醇、浓度为2mg/l的甘氨酸、浓度为0.1mg/l的盐酸硫胺素、浓度为0.5mg/l的盐酸吡哆醇、浓度为0.5mg/l的烟酸、浓度为30g/l的蔗糖和浓度为7g/l的琼脂。其他与具体实施方式一至四之一相同。采用下述实验验证本发明效果：新品种葡萄鉴定评价的方法和结果如下：2015年5月，将优选单株繁育的营养袋苗定植于苗圃，绿枝高接于葡萄园。2016年，优选单株在新疆昌吉州、吐鲁番、阿图什市等多地试种，建立区试点，面积10亩，观察优质新品系生长发育及结果情况。物候观测采用一般的物候观测方法，结果如下：新疆北疆萌芽期4月下旬或者5月上旬，开花期：5月下旬或者6月初，成熟期：8月底。品质检测方法如下：葡萄萌芽后调查结果母枝芽眼总数，萌芽数，计算萌芽率；开花前调查新梢总数、果枝数和果穗数，统计果枝率；在3株上分别取5穗果穗，用百分之一天平称重，取平均，为穗重，用数显游标卡尺测量其穗长、穗宽。取30粒果实，用百分之一天平称重，取平均，为粒重，用数显游标卡尺测量其粒长、粒宽。取30粒果实，用日本pal-1数显折光糖度仪测定，取平均，为可溶性固形物含量。品种特点：叶片中等偏大，五裂，裂刻浅。叶柄绿带紫红色，果穗中等大而紧密，多为圆锥形，一般穗重700g左右；果粒大小中等，椭圆形，完全成熟后呈紫红色或深紫红色，平均粒重6.5g左右，疏花疏果后平均粒重可达8～10g；有果粉，不裂果；果肉脆，可溶性固形物含量18％～21％，具有玫瑰香味，甜，每果粒含种子3～4个。具体指标参见表1。表1新品种种质特点当前第1页12