本发明涉及花生种植
技术领域：
，特别是涉及一种花生根结线虫病的生物防治方法。
背景技术：
：花生根结线虫病(peanutrootknotnematode)又名花生线虫病，俗称地黄病、地落病、矮黄病、黄秧病等。花生根结线虫病是一种世界性病害，几乎所有种植花生的国家和地区都有发生。我国最早发现于山东省，目前在山东、安徽、江苏、河北、北京、辽宁、吉林、河南、湖南、湖北、广东、广西、贵州、陕西、甘肃、海南等省(市、区)均有发生，其中以山东发病最为普遍。花生感病后根的吸收功能被破坏，植株矮小发黄，结果少而稀。一般减产20％～30％，严重的可减产70％以上，甚至绝收。花生根结线虫病主要为害植株的地下部，因地下部受害引起地上部生长发育不良。幼苗被害，一般出土半个月后即可表现症状，植株萎缩不长，下部叶变黄，始花期后，整株茎叶逐渐变黄，叶片小，底叶叶缘焦灼，提早脱落，开花迟，病株矮小，似缺肥水状，田间常成片成窝发生。雨水多时，病情可减轻。花生播种半个月后，当主根开始生长时，线虫便可侵入主根尖端，使之膨大形成纺锤形虫瘿(根结)，初期为乳白色，后变为黄褐色，直径一般2～4mm，表面粗糙。以后在虫瘿上长出许多细小的须根，须根尖端又被线虫侵染形成虫瘿，经这样多次反复侵染，根系就形成乱丝状的须根团。被害主根畸形歪曲，停止生长，根部皮层往往变褐腐烂。在根颈、果柄上可形成葡萄穗状的虫瘿簇。在果壳上则形成疮痂状虫瘿，初为乳白色，后变为褐色，较少见。剖视虫瘿，可见乳白色针头大小的雌线虫。病株根瘤少，结果亦少而小，甚至不结果。目前根结线虫病的防治措施主要分为化学农药防治、物理防治和生物防治。对于根结线虫的防治，其中化学农药防治是目前应用最为普遍的农业措施，通常采用卤代烃类化合物、异硫氰酸甲酯类、有机磷类和氨基甲酸酯类化合物，这些化合物能够杀死或麻痹根结线虫，但是其缺点是显而易见的，能导致线虫抗药性增强、虫口密度上升、污染环境、杀伤天敌、农药残留、病虫菌的抗药性增强、威胁人类健康等。除了化学农药防治方法以外，另一个应用较广的方法是物理防治，主要有：热力处理、种子淘汰、高频处理、射频处理、高温闷棚、水肥管理、改良土壤、材料隔离等方法。高温闷棚、热力处理、种子淘汰、高频处理、射频处理主要是用来处理温室的种子、苗床和苗木，可能需要较长一段休棚期，打乱生产计划，影响作物生长周期，一般不适用于大田防治线虫。其应用范围有限，防治效果一般，有些需要特殊的仪器设备，增加生产成本。所以除继续探索一些化学和物理防治根结线虫的有效方法外，对根结线虫的生物防治应越来越重视。根结线虫生防资源包括食线虫真菌(nematophagousfungi)、细菌(bacteria)、放线菌(actinomycetes)、病毒(virus)、立克次氏体(rickettsia)、原生动物(protozoa)、水熊(tardigrade)、扁虫(turbellarians)、螨类(mites)、跳虫(collembola)、enchytraids以及捕食性线虫(predaciousnematodes)等。其中较常见有淡紫拟青霉素、厚坦孢普奇尼亚霉、阿维菌素、芽孢杆菌等，防治效率在40～60％左右，其防治根结线虫的效果较好，但是作用菌株单一，导致生防机制单一，无菌株间的协同增效作用，不能进一步提高防治效率。技术实现要素：本发明的目的就是要提供一种花生根结线虫病的生物防治方法，专用于防治花生根结线虫，安全有效。为实现上述目的，本发明是通过如下方案实现的：一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。优选的，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.5～0.6：1.5～2：8～10：1～1.5。优选的，步骤(1)中，堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤10～15天。优选的，步骤(1)中，所述人畜粪便选自人粪便、牛粪或猪粪中的任一种或多种。优选的，步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1～2ma条件下电解处理10～15分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2～3倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。优选的，步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，然后以体积比1：0.5～0.8：1.5～2：0.8～1混合，即得所述复合发酵菌剂。进一步优选的，活化培养至菌体浓度为108～1010cfu·ml-1。进一步优选的，苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8～7.2；培养温度为28～30℃。进一步优选的，蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8～7.2；培养温度为28～30℃。进一步优选的，淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8～7.2；培养温度为27～29℃。进一步优选的，哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8～7.2；培养温度为27～29℃。优选的，步骤(1)中，厌氧发酵的条件为：温度25～30℃，ph为6.5～7.5，时间为10～15天。优选的，步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.2～1.5m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度25～30℃，ph为6.5～7.5，时间为5～7小时。优选的，步骤(2)中，浸泡时间为5～6小时，浸泡后立即播种。优选的，步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：250～300混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：100～150混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。优选的，步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。优选的，步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高15～20cm。与现有技术相比，本发明的有益效果是：(1)本发明先以人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、符合发酵菌剂等为原料制备生物发酵液，然后利用该生物发酵液浸种，挖低垄于垄底播种，并且在播种前后均利用生物发酵液稀释后喷洒。通过对花生种子的预处理和播种环境的改善，有效抑制根结线虫卵的孵化和根结线虫对花生根系的侵染，防治花生根结线虫，安全有效；另一方面，生物发酵液中含有丰富的有益活性菌，可以改善花生根系生长环境，促进花生根系对水分和养分的吸收，增产增质。(2)本发明人畜粪便中含有丰富的植物营养元素和有机质，糠醛渣中含有丰富的纤维素、半纤维素、木质素等，粉煤灰中含有大量金属氧化物及二氧化硅，人畜粪便与活性污泥处理液中均含有大量的微生物群体，好氧发酵过程中，一方面产生有利于花生生长的营养物质的游离与释放，另一方面促进微生物的生长和繁殖，这些微生物与后续加入的苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422协同作用，可以促进花生种子萌发，并促进幼苗生长，在根结线虫虫卵上生长，使得虫卵空壳而死，可以穿透花生根部及根部周围，杀灭根结线虫。(3)本发明利用该生物发酵液浸种，从源头上杀灭根结线虫虫卵。挖低垄于垄底播种，并且在播种前后均利用生物发酵液稀释后喷洒，由于在垄底播种，喷洒的生物发酵液成分会随着水分蒸发而上升，也会随着自然降水而下降，促进生物发酵液成分在花生根周围的分布，充分杀灭根结线虫。(4)本发明在制备生物发酵液时，先厌氧发酵后好氧发酵，有利于杀灭原料中的相当一部分微生物，这部分微生物中包含了大量的有害菌，以免对花生生长造成不良影响。具体实施方式下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明涉及的苏云金芽孢杆菌accc03838，蜡样芽孢杆菌accc02368，淡紫拟青霉accc32001，哈茨木霉accc30422，均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。实施例1一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.5：1.5：8：1。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤10天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理10分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为108cfu·ml-1，然后以体积比1：0.5：1.5：0.8混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8；培养温度为28℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8；培养温度为28℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8；培养温度为27℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为6.8；培养温度为27℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.2m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度25℃，ph为6.5，时间为5小时。厌氧发酵的条件为：温度25℃，ph为6.5，时间为10天。步骤(2)中，浸泡时间为5小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：250混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：100混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高15cm。实施例2一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.6：2：10：1.5。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤15天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流2ma条件下电解处理15分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入3倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为1010cfu·ml-1，然后以体积比1：0.8：2：1混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.2；培养温度为30℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.2；培养温度为30℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.2；培养温度为29℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.2；培养温度为29℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.5m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度30℃，ph为7.5，时间为7小时。厌氧发酵的条件为：温度30℃，ph为7.5，时间为15天。步骤(2)中，浸泡时间为6小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：300混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：150混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高20cm。实施例3一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.55：1.8：9：1.2。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤12天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理12分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2.5倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为109cfu·ml-1，然后以体积比1：0.6：1.8：0.9混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为28℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.1；培养温度为28℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.4m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度28℃，ph为7，时间为6小时。厌氧发酵的条件为：温度28℃，ph为6.9，时间为12天。步骤(2)中，浸泡时间为5.5小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：280混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：120混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高18cm。对比例1一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：1.8：9：1.2。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤12天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理12分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2.5倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为109cfu·ml-1，然后以体积比1：0.6：1.8：0.9混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为28℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.1；培养温度为28℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.4m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度28℃，ph为7，时间为6小时。厌氧发酵的条件为：温度28℃，ph为6.9，时间为12天。步骤(2)中，浸泡时间为5.5小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：280混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：120混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高18cm。对比例2一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.55：1.8：9：1.2。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤12天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理12分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2.5倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为109cfu·ml-1，然后以体积比1：1.8：0.9混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为28℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.1；培养温度为28℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.4m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度28℃，ph为7，时间为6小时。厌氧发酵的条件为：温度28℃，ph为6.9，时间为12天。步骤(2)中，浸泡时间为5.5小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：280混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：120混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高18cm。对比例3一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.55：1.8：9：1.2。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤12天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理12分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2.5倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为109cfu·ml-1，然后以体积比1：0.6：1.8混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为28℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.4m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度28℃，ph为7，时间为6小时。厌氧发酵的条件为：温度28℃，ph为6.9，时间为12天。步骤(2)中，浸泡时间为5.5小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：280混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：120混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高18cm。对比例4一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)省略；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.55：1.8：9：1.2。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤12天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理12分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2.5倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为109cfu·ml-1，然后以体积比1：0.6：1.8：0.9混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为28℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.1；培养温度为28℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.4m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度28℃，ph为7，时间为6小时。厌氧发酵的条件为：温度28℃，ph为6.9，时间为12天。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：280混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底；步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：120混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高18cm。对比例5一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于覆土表面，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.55：1.8：9：1.2。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤12天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理12分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2.5倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为109cfu·ml-1，然后以体积比1：0.6：1.8：0.9混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为28℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.1；培养温度为28℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.4m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度28℃，ph为7，时间为6小时。厌氧发酵的条件为：温度28℃，ph为6.9，时间为12天。步骤(2)中，浸泡时间为5.5小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：120混匀实现稀释，然后均匀喷洒于覆土表面。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高18cm。对比例6一种花生根结线虫病的生物防治方法，包括步骤：(1)生物发酵液的制备：先将人畜粪便、糠醛渣与粉煤灰混合后堆沤处理；然后加入活性污泥处理液，厌氧发酵，得到发酵料；最后向发酵料中加入苏云金芽孢杆菌accc03838、蜡样芽孢杆菌accc02368、淡紫拟青霉accc32001、哈茨木霉accc30422的复合发酵菌剂，好氧发酵，过滤，得到生物发酵液，备用；(2)浸种：利用步骤(1)所得生物发酵液浸泡，准备播种；(3)播种、生长和收获：挖低垄，步骤(1)所得生物发酵液稀释后均匀喷洒于垄底，然后在垄底播种步骤(2)浸种处理后的种子，覆土，覆盖地膜，生长，直至成熟收获。其中，步骤(1)中，人畜粪便、糠醛渣、粉煤灰、活性污泥处理液、复合发酵菌剂的质量比为1：0.55：1.8：9：1.2。堆沤处理的具体方法是：用塑料薄膜覆盖，堆沤12天。步骤(1)中，所述活性污泥处理液为活性污泥经预处理而得，具体方法如下：(a)先将活性污泥在电流1ma条件下电解处理12分钟，得电解产物；(b)然后将电解产物加入2.5倍重量的水中，采用超声破碎污泥细胞，离心分离后取清液，即得活性污泥处理液。步骤(1)中，所述复合发酵菌剂的制备方法如下：先将苏云金芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、淡紫拟青霉和哈茨木霉分别进行活化培养，活化培养至菌体浓度为109cfu·ml-1，然后以体积比1：0.6：1.8：0.9混合，即得所述复合发酵菌剂。苏云金芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含氯化钠10g·l-1、胰蛋白胨10g·l-1和酵母粉5g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。蜡样芽孢杆菌的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，琼脂18g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为29℃。淡紫拟青霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7；培养温度为28℃。哈茨木霉的活化培养条件为：培养基以蒸馏水配制，含马铃薯200g·l-1，羟腺嘌呤0.3g·l-1，烯酰腺嘌呤0.3g·l-1，葡萄糖20g·l-1，经121℃灭菌20分钟所得，ph为7.1；培养温度为28℃。步骤(1)中，好氧发酵的条件为：空气流量1.4m3空气/(m3发酵液·分钟)，温度28℃，ph为7，时间为6小时。厌氧发酵的条件为：温度28℃，ph为6.9，时间为12天。步骤(2)中，浸泡时间为5.5小时，浸泡后立即播种。步骤(3)中，步骤(1)所得生物发酵液与水按照体积比1：280混匀实现稀释，然后均匀喷洒于垄底。步骤(3)中，低垄深12cm，宽65cm，垄上种两行，穴距15cm，每穴2粒；地膜厚度0.015mm。步骤(3)中，覆盖地膜后在低垄四周覆土，覆土宽20cm，高18cm。试验例将一块理化性质均一的棕壤随机划分为10小块进行花生种植，其中一小块作为空白对照组直接播种，剩余9小块分别采用实施例1～3或对比例1～6的方法进行播种，花生品种为花育20号。考察花生根结线虫病的发病率、亩产量和出仁率，结果见表1。表1.花生种植情况比较根结线虫发病率(％)亩产量(kg)出仁率(％)实施例11.232397实施例21.132597实施例30.833899对比例11525581对比例23523970对比例33823071对比例41126885对比例51026785对比例61126683对照组9216075由表1可知，与对照组相比，实施例1～3花生根结线虫发病率低，并且产量高，品质好。对比例1在制备生物发酵液时略去糠醛渣，对比例2在制备生物发酵液时略去蜡样芽孢杆菌accc02368，对比例3在制备生物发酵液时略去哈茨木霉accc30422，对比例4略去浸种步骤，对比例5略去播种前喷洒步骤，对比例6略去播种后喷洒步骤，根结线虫发病率明显变高，亩产量和出仁率也明显降低。对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。当前第1页12