本发明属于含有微生物真菌的杀生剂
技术领域：
，具体涉及一种绿僵菌和白僵菌复配杀草地贪夜蛾的组合物。
背景技术：
：草地贪夜蛾spodopterafrugiperda又名伪黏虫、秋行军虫、秋粘虫、草地夜蛾等，为昆虫纲，有翅亚纲，鳞翅目，夜蛾科，灰翅夜蛾属草地贪夜蛾种。草地贪夜蛾原产于美洲热带和亚热带地区，广泛分布于美洲大陆，是玉米等粮食作物上的重大跨境迁飞性农业害虫。随着国际贸易活动的日趋频繁以及草地贪夜蛾自身强大的迁飞扩散能力，草地贪夜蛾目前已入侵到非洲的46个国家和地区，包括中国在内的9个亚洲国家。草地贪夜蛾自2019年1月确认入侵我国云南省，至2019年5月21日，已扩散到华南、西南、华中和华东的16省(市、区)的617个县(市、区)，发生面积达12.67万hm2，并已呈现出向我国黄淮海夏玉米产区和北方春玉米产区蔓延的态势(“草地贪夜蛾的生物学特性、发展趋势及防控对策”，郭井菲等，应用昆虫学报，2019年第56卷第3期，第361页左栏第1段第1行至362页左栏第1段倒数第14行，公开日2019年05月26日)。草地贪夜蛾为多食性迁飞昆虫，明显嗜好禾本科植物，主要危害玉米、高粱、甘蔗，也危害棉花以及十字花科和葫芦科植物(“草地贪夜蛾细胞系iplb-sf-9酵母双杂交cdna文库的构建”，王春苗等，环境昆虫学报，2009年第31卷第1期，第41页左栏第1段第1-4行，公开日2009年05月14日；“中国热带和亚热带地区草地贪夜蛾春夏两季迁飞轨迹的分析”，吴秋琳等，植物保护，2019年第3期，第1页摘要第1-5行，公开日2019年07月03日)。由于草地贪夜蛾食性杂(寄主植物可达76科353种)、为害重(在玉米上，低龄幼虫取食也难形成半透明薄膜“窗孔”，高龄幼虫取食叶片形成不规则长形孔洞，甚至新出的叶片严重被害，呈破烂状，也可取食未抽出玉米雄穗和幼嫩果穗，在西非和中非，其对玉米的为害程度明显高于其他非洲本土的同属昆虫)、繁殖能力强(雌成虫寿命一般7-21天，在此期间可以多次交配产卵，单头雌虫平均一生可产卵1500粒，最高可达2000粒)、迁飞远(成虫每晚可借助风力定向迁飞100km，若风向风速适宜，迁飞距离会更长，最长迁飞记录是30h内迁飞1600km)、适应性强(11-30℃均为其适宜的温度范围，在28℃条件下，30天左右即可完成一个世代。因此，草地贪夜蛾严重威胁玉米生产，据统计，若田间55％-100％的植株被害，将导致玉米减产15％-73％(“草地贪夜蛾的生物学特性、发展趋势及防控对策”，郭井菲等，应用昆虫学报，2019年第56卷第3期，第362页左栏第3段第1-8行、第362页右栏第2段第1-3行、第362页右栏第3段第1-8行、第362页左栏第2段第6-8行、第362页右栏第4段第1-5行，公开日2019年05月26日)。目前，草地贪夜蛾已在我国20个省市为害玉米，已严重威胁我国农业及粮食生产安全。现阶段，草地贪夜蛾的防治较为困难。在长期的化学农药和bt蛋白的选择压下，草地贪夜蛾对氨基甲酸盐类、有机磷类、拟除虫菊酯类中的多种农药产生了抗药性，对cry1f、cry1ab、cry2ab2抗虫基因玉米也产生了不同程度的田间抗性(“草地贪夜蛾的生物学特性、发展趋势及防控对策”，郭井菲等，应用昆虫学报，2019年第56卷第3期，第363页左栏第2段第19-25行，公开日2019年05月26日)。因此，为了减少农药使用，减缓抗药性产生，利用杀虫真菌等生物防治手段对草地贪夜蛾进行防控迫在眉睫。昆虫病原真菌(entomopathogenicfungi)是指能够直接侵入健康昆虫体内、迅速增殖和导致昆虫死亡的真菌类群。昆虫病原真菌是昆虫病原微生物中最大的类群，是多种农、林、卫生害虫的重要寄生性天敌。其侵染方式独特，与细菌、线虫和病毒相比，昆虫病原真菌是唯一能够直接穿透寄主体壁实现成功侵入的昆虫病原微生物。昆虫病原真菌具有种类多、寄主范围广、安全有效、不伤害天敌、不易产生抗性，能够达到持续控害效果，易于培养和快速大量生产等优点(“昆虫病原真菌在农林害虫生物防治中的应用”，刘春来，黑龙江农业科学，2017年第3期，第68页右栏第2段第1-15行，公开日2017年05月21日)。然而，现有的防治草地贪夜蛾的昆虫病原真菌杀虫剂在实际应用中，对草地贪夜蛾的防效不佳。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种对草地贪夜蛾的防治效果好的药剂，该药剂中的绿僵菌和白僵菌具有对草地贪夜蛾的显著协同增效作用。为实现上述目的，本发明的技术方案为：杀草地贪夜蛾的药剂，包括绿僵菌和白僵菌。所述杀草地贪夜蛾是指物质提高昆虫纲，有翅亚纲，鳞翅目，夜蛾科，灰翅夜蛾属草地贪夜蛾种昆虫的死亡率或抑制其生长率的能力。发明人在研究过程中意外发现，绿僵菌和白僵菌具有对草地贪夜蛾的显著协同增效作用。进一步，所述绿僵菌为金龟子绿僵菌。进一步，所述金龟子绿僵菌为金龟子绿僵菌cqma421。进一步，所述白僵菌为球孢白僵菌。进一步，所述球孢白僵菌为球孢白僵菌zju435。进一步，绿僵菌和白僵菌的分生孢子数配比为1-5:5-9。进一步，所述药剂为油悬浮剂。进一步，所述药剂还包括表面活性剂和溶剂油。进一步，所述表面活性剂包括脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、司班和吐温中的1-4种。进一步，所述溶剂油包括大豆油、菜籽油或玉米油等植物油。进一步，所述药剂，以质量份计，包括绿僵菌与白僵菌共计15-35份，表面活性剂5-15份和溶剂油40-80份。本发明的目的还在于保护所述药剂的制备方法，包括以下步骤：将原料混合均匀，即得。本发明的有益效果在于：本发明的药剂对草地贪夜蛾的防治效果好。本发明的药剂中的绿僵菌和白僵菌具有对草地贪夜蛾的显著协同增效作用。本发明的药剂速效性好，其致死中时为2.48-2.69d。本发明的药剂对草地贪夜蛾的田间防效好，持效期长，对草地贪夜蛾的田间防效在第7天可达63.97％-69.22％，在第14天防效可达56.92％-64.77％。本发明的药剂害虫不易产生抗药性。具体实施方式所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。室内生测复配联合毒力测定试验：供试药剂：金龟子绿僵菌cqma421干孢子粉、球孢白僵菌zju435干孢子粉；供试虫源：于2019年6月在自云南省江城宝藏乡玉米地采集草地贪夜蛾幼虫，并在实验室用玉米叶人工饲养至f1代进行试验，饲养温度为26℃±1℃、相对湿度为60％-70％、光照/黑暗(16h/8h)；试验方法：将金龟子绿僵菌cqma421干孢子粉和球孢白僵菌zju435干孢子粉分别用0.1％wt的吐温80分别配制成2×106、2×107、2×108、2×109、1×109孢子/克；然后采用喷雾处理分别测定绿僵菌、白僵菌对草地贪夜蛾3龄虫的毒力作用；每处理3个重复，每重复20条幼虫；处理后为防止其相互残杀，喷药后立即将其分装放置于上口径为4cm，下口径3cm，高3cm的养虫盒内，饲喂干净的无药玉米叶片后放置于26℃±1℃，相对湿度为65％-75％的温室饲养；每天定时更换新鲜叶片，5天后观察其死活虫数，计算出各种试验浓度下的死亡率(％)；再根据剂量对数-死亡率几率值分析法，求出毒力回归方程和lc50；不同配比组合物的联合毒力测定方法为：将绿僵菌和白僵菌按不同分生孢子数配比组合(具体见表1)，采用上述方法进行，配制成绿僵菌和白僵菌总孢子数为2×106、2×107、2×108、2×109、1×109孢子/克系列浓度，测定组合物的联合毒力，计算lc50；联合毒力评价方法：采用孙云沛共毒系数法：毒力指数(ti)＝(标准药剂的lc50/供试药剂的lc50)×100混剂实际毒力指数(ati)＝药剂a单用的lc50/药剂a和b混用的lc50)×100混剂理论毒力指数(tti)＝ti(a)×a+ti(b)×ba：表示药剂a在混剂中的百分含量；b：表示药剂b在混剂中的百分含量。共毒系数ctc＝(混剂实际毒力指数ati/混剂理论毒力指数tti)×100；根据农业部农药检定所的规定，混剂配方增效的判断标准为：共毒系数大于120为增效作用；共毒系数80-120，为相加作用；共毒系数小于80，为拮抗作用；以上各个组别除药剂不同外，其他处理方式相同；结果如表1所示。表1对草地贪夜蛾幼虫的联合毒力测定结果由表1可知，在金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435的分生孢子数配比为1-5:5-9的配比范围内，两者复配，其共毒系数均大于120，均表现出协同增效作用；其中在菌cqma421与球孢白僵菌zju435的分生孢子数配比为3:7时，其共度系数最高，达227.16。由此证明，金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435具有对草地贪夜蛾的显著协同增效作用。实施例1制剂，具体组成为：按金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435分生孢子数比为5:5，根据每克含孢量计算金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435的重量比为2:1，称取两种孢子粉，用大豆色拉油配制含10％(w/w)脂肪醇聚氧乙烯醚、5％(w/w)烷基酚聚氧乙烯醚的30％(w/w)绿僵菌·白僵菌孢子油悬浮剂(绿僵菌和白僵菌分生孢子总量为100亿孢子/ml)。所述制剂的制备方法为：将悬浮油、表面活性剂加入1l的搅拌机中搅拌转速(转速500rpm)，边搅拌边加入金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435干孢子粉，加完干孢子粉后，将转速调至转速1800rpm再混合5分钟，制得绿僵菌·白僵菌油悬浮剂。实施例2制剂，具体组成为：按按金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435分生孢子数比为4:6，根据每克含孢量计算金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435重量比为4:3，称取两种孢子粉，用大豆色拉油配制含10％(w/w)脂肪醇聚氧乙烯醚、5％(w/w)烷基酚聚氧乙烯醚的30％(w/w)绿僵菌·白僵菌孢子油悬浮剂(绿僵菌和白僵菌分生孢子总量为100亿孢子/ml)。所述制剂的制备方法为：将悬浮油、表面活性剂加入1l的搅拌机中搅拌转速(转速500rpm)，边搅拌边加入金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435干孢子粉，加完干孢子粉后，将转速调至转速1800rpm再混合5分钟，制得绿僵菌·白僵菌油悬浮剂。实施例3制剂，具体组成为：按按金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435分生孢子数比为3:7，根据每克含孢量计算金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435重量比为6:7，称取两种孢子粉，用大豆色拉油配制成含10％(w/w)脂肪醇聚氧乙烯醚、5％(w/w)烷基酚聚氧乙烯醚的30％(w/w)的绿僵菌·白僵菌孢子油悬浮剂(绿僵菌和白僵菌分生孢子总量为100亿孢子/ml)。所述制剂的制备方法为：将悬浮油、表面活性剂加入1l的搅拌机中搅拌转速(转速500rpm)，边搅拌边加入金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435干孢子粉，加完干孢子粉后，将转速调至转速1800rpm再混合5分钟，制得绿僵菌·白僵菌油悬浮剂。实施例4制剂，具体组成为：按金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435分生孢子数比为2:8，根据每克含孢量计算金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435重量比为1:2，称取两种孢子粉，用大豆色拉油配制成含10％(w/w)脂肪醇聚氧乙烯醚、5％(w/w)烷基酚聚氧乙烯醚的30％(w/w)的绿僵菌·白僵菌孢子油悬浮剂(绿僵菌和白僵菌分生孢子总量为100亿孢子/ml)。所述制剂的制备方法为：将悬浮油、表面活性剂加入1l的搅拌机中搅拌转速(转速500rpm)，边搅拌边加入金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435干孢子粉，加完干孢子粉后，将转速调至转速1800rpm再混合5分钟，制得绿僵菌·白僵菌油悬浮剂。实施例5制剂，具体组成为：按金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435分生孢子数比为1:9，根据每克含孢量计算金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435重量比为2:9，称取两种孢子粉，用大豆色拉油配制成含10％(w/w)脂肪醇聚氧乙烯醚、5％(w/w)烷基酚聚氧乙烯醚的30％(w/w)的绿僵菌·白僵菌孢子油悬浮剂(绿僵菌和白僵菌分生孢子总量为100亿孢子/ml)。所述制剂的制备方法为：将悬浮油、表面活性剂加入1l的搅拌机中搅拌转速(转速500rpm)，边搅拌边加入金龟子绿僵菌cqma421与球孢白僵菌zju435干孢子粉，加完干孢子粉后，将转速调至转速1800rpm再混合5分钟，制得绿僵菌·白僵菌油悬浮剂。实施例6制剂，具体组成为：称取金龟子绿僵菌cqma421干孢子粉，用大豆色拉油配制成含10％(w/w)脂肪醇聚氧乙烯醚、5％(w/w)烷基酚聚氧乙烯醚的30％(w/w)的绿僵菌油悬浮剂(孢子含量为100亿孢子/ml)。所述制剂的制备方法为：将悬浮油、表面活性剂加入1l的搅拌机中搅拌转速(转速500rpm)，边搅拌边加入金龟子绿僵菌cqma421干孢子粉，加完干孢子粉后，将转速调至转速1800rpm再混合5分钟，制得绿僵菌油悬浮剂。实施例7制剂，具体组成为：称取球孢白僵菌zju435干孢子粉，用大豆色拉油配制成含10％(w/w)脂肪醇聚氧乙烯醚、5％(w/w)烷基酚聚氧乙烯醚的30％(w/w)的白僵菌油悬浮剂(孢子含量为100亿孢子/ml)。所述制剂的制备方法为：将悬浮油、表面活性剂加入1升的搅拌机中搅拌转速(转速500rpm)，边搅拌边加入球孢白僵菌zju435干孢子粉，加完干孢子粉后，将转速调至转速1800rpm再混合5分钟，制得白僵菌油悬浮剂。室内毒力测定检测实施例1-7的制剂的室内毒力，并以清水处理为空白对照；供试虫源：于2019年6月在自云南省江城宝藏乡玉米地采集草地贪夜蛾幼虫，并在实验室用玉米叶人工饲养至f1代进行试验，饲养温度为26℃±1℃、相对湿度为60％-70％、光照/黑暗(16h/8h)；毒力测试方法：使用potter喷雾塔，以每处理400ul药液量对幼虫进行直接喷雾；每处理3个重复，每重复20只幼虫；为防止其相互残杀喷药后立即将其分装放置于上口径为4cm，下口径3cm，高3cm的养虫盒内，饲喂干净的无药玉米叶片后放置于26℃±1℃，相对湿度为65％-75％的温室饲养；每天定时更换新鲜叶片，连续观察7天观察其死活虫数，计算出各种试验浓度下的死亡率(％)；供药后每天观察其死活虫数，计算出死亡率(％)，用dps软件统计致死中量时(lt50)；以上各个组别除药剂不同外，其他处理方式相同；结果如表2所示。表2室内毒力检测结果制剂药后3d药后4d药后5d药后6d药后7dlt50(d)实施例155.56％86.36％86.05％90.70％92.68％2.48实施例257.78％72.73％83.72％88.37％92.68％2.43实施例357.78％72.73％79.07％88.37％90.24％2.64实施例457.78％72.73％83.72％87.67％89.59％2.68实施例557.78％72.73％79.07％86.97％89.34％2.69实施例617.78％34.09％46.51％48.84％53.66％5.68实施例737.78％52.73％74.42％88.37％90.24％3.61空白对照00000--由表2可知，与实施例6和实施例7相比，实施例1-5的制剂的死亡率得到了显著提高，致死中时lt50缩短了1-2天。由此证明，金龟子绿僵菌cqma421和球孢白僵菌zju435联合使用对草地贪夜蛾的室内毒力明显高于绿僵菌cqma421单剂和球孢白僵菌zju435单剂的毒力，杀虫时间明显缩短。草地贪夜蛾田间应用试验试验地点：在重庆黔江区，选取草地贪夜蛾虫害发生较重的地块；试验方法：按照《gb/t17980.4-2000农药田间药效试验准则(一)》的要求，试验设4个处理，3次重复，共设12个小区；此次试验选择小区面积为50m2，随机区组排列；试验药剂及用量如表3所示，在玉米苗期至喇叭口期，施用方法为喷雾，叶片正反两面和喇叭口上均匀喷施，在整个生育期施药1次；于药前、药后3天、7天、14天调查虫数并计算防治效果；并设置对照组(未进行任何药剂处理)；药效计算公式为：以上各个组别除药剂不同外，其他处理方式相同；结果如表3所示。表3绿僵菌与白僵菌复配防治草地贪夜蛾田间防效药剂绿僵菌与白僵菌分生孢子数配比药后3d药后7d药后14d实施例15:533.62％a67.09％a61.90％a实施例24:637.84％a69.22％a64.77％a实施例33:737.59％a67.07％a61.03％a实施例42:833.88％a65.57％a56.92％a实施例51:927.27％a63.97％a57.51％a实施例6--17.94％b48.58％b41.09％b实施例7--14.60％b56.66％b47.31％b空白对照--000备注：表中小写字母不同表示在0.01水平上差异显著。由表3可知，实施例1-5的药剂对草地贪夜蛾的田间防效在第7天可达63.97％-69.22％，在第14天防效可达56.92％-64.77％；与实施例6和7相比，实施例1-5的制剂对草地贪夜蛾的防效得到了明显提高。由此证明，本发明的药剂对草地贪夜蛾的田间防效好，持效期长。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其它实施方式。当前第1页12