香腮杜鹃的扦插育苗方法与流程

本发明属于杜鹃花种植技术领域，具体涉及香腮杜鹃的扦插育苗方法。

背景技术：

香腮杜鹃所开花为粉红色，株型紧凑，花朵繁密，宜作盆栽，亦可地栽。其幼枝粗壮、绿色，散生刚毛；叶片纸质，椭圆形，密被黄棕色毛，叶长4.0-5.0cm，叶宽1.5-2.0cm，花朵直径约为7-10cm，半重瓣套筒花，深粉色，开阔漏斗形，花冠裂片内有红色斑点，雄蕊部分或完全瓣化，雌蕊1个，柱头黄色。该品种繁殖方式为扦插或嫁接繁殖，生长势强健，种植时间为一年四季，露地种植自然花期7-11月份，单花持续花期15-20天，可栽培作国庆、圣诞节日用花。

杜鹃花自然杂交机率大，播种育苗难以保持基因纯度，组培快繁对设施条件要求严、技术复杂，且成本高、难以有效推广；而扦插繁殖不仅可保持母本的优良性状、缩短育苗时间、提早花期，且成本低、易推广。目前，扦插育苗技术已被广泛应用于小叶落叶及半常绿类杜鹃及其品种的规模化生产。扦插的原理是植物幼嫩的体细胞具有潜在的全能性，每个体细胞都包含有全套的遗传基因信息，在人工诱导分裂、分化的基础上，可重组建成完整的个体。包括硬枝扦插、嫩枝扦插、根插。在扦插技术中影响因子很多，有扦插基质，扦插时间，插穗的规格、外界环境因素等等。

现有技术如授权公告号为cn105210753b的中国发明专利，该发明公开了一种大树杜鹃扦插技术，包括如下步骤：取熟土、生土以及腐殖土按1∶1∶1混合后，用薄膜覆盖；扦插前3-4天将基质(混合后的)揭薄膜后装入容器袋内，并置于育苗床上；采集大树杜鹃具有绿色(或白中有绿)的当年生枝条，保留顶部茎干10-12cm，保留3-5个叶，且每个叶保留整个叶片的1/4；扦插前将育苗床上容器袋用清水浇透后，把用生根粉处理后的枝条插入袋中，浇一遍清水，浇上多菌灵；在扦插育苗床上搭建小拱棚，用薄膜覆盖，并在拱棚上加盖遮阳网，保持棚内的温度和空气相对湿度；1个月后打开小拱棚观察扦插情况。该发明通过培养基质的合理选择，以及对扦插枝条的特殊处理，提高了大树杜鹃扦插繁育的成功率。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供香腮杜鹃的扦插育苗方法，该方法能够抑制插穗木质部即发生栓塞化，抑制导水率降低，提高扦插穗条的成活率，提高扦插育苗的根系细胞呼吸关键酶的活力，提高叶片中的叶绿素含量，促进插穗生长发育，提高苗木质量。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

提供一种香腮杜鹃的扦插育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：

s1、苗床准备：用0.1-0.3％多菌灵对基质进行消毒后，铺设苗床；

s2、插穗的采集：选取2-4年生生长健壮、无病虫害的母株，于1-3月份对母株进行修剪，5-6月份或9-10月份选择阴天或清晨从母株取当年生半木质化嫩枝作为插穗枝条；

s3、插穗的切制：修剪插穗枝条，修剪后枝条长度7-9cm，枝条顶端保留3-5片叶子，叶片大小在3-4.5cm；

s4、扦插：扦插前18-30h再用0.1-0.3wt％的高锰酸钾对基质进行消毒，扦插前4-8h用水浇透基质，将插穗在激素溶液中浸泡5-8min后立即扦插；

s5、扦插管理：扦插后前25-35d温度不超过35℃，空气相对湿度保持在80-90％，，遮光率保持在75-85％；

其中，在上述步骤s2插穗采集后，上述步骤s3插穗切制后均立即蘸取海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠的混合溶液。蒸腾作用使植物的枝叶中的水分不断流失到周围环境中，由木质部导管内的水分内聚力而产生的蒸腾力使水柱具有一定的张力或负压。因此，当插穗剪离母体后，木质部导管中的水分便会因张力的解除迅速缩回，插穗一直处在失水状态中。如果剪离后不及时扦插或沙藏，水分在插穗暴露在空气中时会大量散失。插穗没有根系，无法从土壤中吸收大量的水分，只能通过切口及皮孔吸收少量水分，而插穗自身体内水分的散失不利于不定根的形成，失水严重时致使插穗死亡。在插穗具备吸水功能前，常因自身含水量过低而不能生根、发芽，导致成活率很低。扦插穗条剪离母体后和切制后，立刻蘸取海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠的混合溶液，可减少扦插前间隔过程中插穗水分的损失，从而抑制木质部水势降低，抑制插穗木质部即发生栓塞化，抑制导水率降低，进而提高扦插穗条的成活率，促进插穗生长发育。且具有简便、易操作、成本低、有利于对香腮杜鹃进行大规模的扦插育苗。

在一些实施方式中，上述步骤s1中的基质包括河沙、泥炭、蛭石、岩棉、石英砂、蘑菇渣。

在一些实施方式中，步骤s3中插穗的切制方法选自以下其中之一：直角切、斜切、双面反切、nearing式。

在一些实施方式中，步骤s4中的激素溶液包括500-800mg/liba。

在一些实施方式中，基质还包括杨树花提取物。基质中添加杨树花提取物，能够提高扦插育苗的根系细胞呼吸关键酶的活力，促进细胞呼吸，提高能量代谢，促进对矿质元素的吸收，促进叶绿素的合成，提高叶片中的叶绿素含量，增强光合作用，进而促进扦插苗根茎叶形态指标的生长发育，提高苗木质量。

在一些实施方式中，杨树花提取物的含量为1-3wt％。

本发明提供一种扦插基质，其特征在于，包括河沙、泥炭、蛭石、岩棉、石英砂、蘑菇渣、杨树花提取物。

本发明提供一种海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠在提高香腮杜鹃插穗的导水率中的用途。

本发明提供一种扦插育苗方法在香腮杜鹃产业化育苗中的用途。

本发明还提供一种扦插基质在提高香腮杜鹃扦插苗质量中的用途。

本发明的有益效果为：

1)本发明通过在扦插穗条剪离母体后和切制后，立刻蘸取海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠的混合溶液，可减少扦插前间隔过程中插穗水分的损失，从而抑制木质部水势降低，抑制插穗木质部即发生栓塞化，抑制导水率降低，进而提高扦插穗条的成活率，促进插穗生长发育；

2)本发明通过在基质中添加杨树花提取物，能够提高扦插育苗的根系细胞呼吸关键酶的活力，促进细胞呼吸，提高能量代谢，促进对矿质元素的吸收，促进叶绿素的合成，提高叶片中的叶绿素含量，增强光合作用，进而促进扦插苗根茎叶形态指标的生长发育，提高苗木质量；

3)本发明提供的扦插育苗方法具有简便、易操作、成本低、成活率高，有利于对香腮杜鹃进行大规模的扦插育苗。

附图说明

图1为本发明试验例1中插穗的含水率，水势；

图2为本发明试验例1中插穗的导水率；

图3为本发明试验例2中扦插苗根系细胞的hk、pek、pk、icdh活性；

图4为本发明试验例3中扦插苗的n、mg、fe含量；

图5为本发明试验例3中扦插苗的叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量；

图6为本发明试验例4中苗木的株高、着叶数、生根数、成活率；

图7为本发明试验例4中苗木的茎粗、叶面积、平均根长、总生物量。

具体实施方式

除非另外说明，本文所提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都以整体援引的方式并入本文中，如同将其全文进行阐述。

除非另外定义，本文所使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的相同含义。在相抵触的情况下，则以本说明书中的定义为准。

当以范围、优选范围或一系列上限优选值和下限优选值给出数量、浓度或其他数值或参数时，应理解其具体公开了由任何较大的范围限制或优选值和任何较小的范围限制或优选值的任何一对数值所形成的所有范围，而无论这些范围是否分别被公开。例如，当描述“1至5”的范围时，所描述的范围应解释为包括“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等范围。除非另有说明，在本文描述数值范围之处，所述的范围意图包括范围端值和范围内的所有整数和分数。

另外，在本发明的要素或组分之前的词语“一”和“一种”意图表示对于该要素或组分的出现(即发生)次数没有限制性。因此，“一”或“一种”应理解为包括一种或至少一种，除非明确表示数量为单数，否则单数形式的所述要素或组分也包括复数的情况。

本发明的实施方式，包括在发明内容部分中所述本发明的实施方式以及本文下述的任何其他的实施方式，均可任意地进行组合。

以下详述本发明。

提供一种香腮杜鹃的扦插育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：

s1、苗床准备：用0.1-0.3％、(优选地，例如0.1％、0.12％、0.15％、0.24％、0.28％、0.3％等)多菌灵对基质进行消毒后，铺设苗床；

s2、插穗的采集：选取2-4年(优选地，例如2年、2.5年、3年、4年等)生生长健壮、无病虫害的母株，于1-3月份(优选地，例如1月份下旬、2月上旬、3月上旬等)对母株进行修剪，5-6月份(优选地，例如5月上旬、6月中旬、6月下旬等)或9-10月份(优选地，例如9月中旬、9月下旬、10月下旬等)选择阴天或清晨从母株取当年生半木质化嫩枝作为插穗枝条；

s3、插穗的切制：修剪插穗枝条，修剪后枝条长度7-9cm(优选地，例如7cm、7.6cm、7.9cm、8cm、8.8cm、9cm等)，枝条顶端保留3-5片(优选地，例如3片，4片，5片)叶子，叶片大小在3-4.5cm(优选地，例如3cm、3.6cm、4.2cm、4.5cm等)；

s4、扦插：扦插前18-30h(优选地，例如18h、22h、24h、25h、28h、30h等)再用0.1-0.3wt％(优选地，例如0.1wt％、0.18wt％、0.2wt％、0.25wt％、0.3wt％等)的高锰酸钾对基质进行消毒，扦插前4-8h(优选地，例如4h、5h、6h、7h、8h等)用水浇透基质，将插穗在激素溶液中浸泡5-8min(优选地，例如5min、6min、7min、8min等)后立即扦插；

s5、扦插管理：扦插后前25-35d(优选地，例如25d、28d、30d、32d、35d等)温度不超过35℃(优选地，例如28℃、30℃、32℃、35℃等)，空气相对湿度保持在80-90％(优选地，例如80％、82％、85％、90％等)，遮光率保持在75-85％(优选地，例如75％、76％、78％、80％、85％等)，及时锄草；

其中，在上述步骤s2插穗采集后，上述步骤s3插穗切制后均立即蘸取海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠的混合溶液。优选地，海藻酸钠：对羟基苯甲酸丙酯钠：水的质量比为5-6:1-2:300-450，更为优选地，海藻酸钠：对羟基苯甲酸丙酯钠：水的质量比为5:1:350。蒸腾作用使植物的枝叶中的水分不断流失到周围环境中，由木质部导管内的水分内聚力而产生的蒸腾力使水柱具有一定的张力或负压。因此，当插穗剪离母体后，木质部导管中的水分便会因张力的解除迅速缩回，插穗一直处在失水状态中。如果剪离后不及时扦插或沙藏，水分在插穗暴露在空气中时会大量散失。插穗没有根系，无法从土壤中吸收大量的水分，只能通过切口及皮孔吸收少量水分，而插穗自身体内水分的散失不利于不定根的形成，失水严重时致使插穗死亡。在插穗具备吸水功能前，常因自身含水量过低而不能生根、发芽，导致成活率很低。扦插穗条剪离母体后和切制后，立刻蘸取海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠的混合溶液，可减少扦插前间隔过程中插穗水分的损失，从而抑制木质部水势降低，抑制插穗木质部即发生栓塞化，抑制导水率降低，进而提高扦插穗条的成活率，促进插穗生长发育。且具有简便、易操作、成本低、有利于对香腮杜鹃进行大规模的扦插育苗。

在一些实施方式中，上述步骤s1中的基质包括河沙、泥炭、蛭石、岩棉、石英砂、蘑菇渣。优选地，河沙、泥炭、蛭石、岩棉、石英砂、蘑菇渣、杨树花提取物的质量比为7-10:12-18:10-13:11-13:8-11:18-25，更为优选地，河沙、泥炭、蛭石、岩棉、石英砂、蘑菇渣的质量比为8:12:11:12:10:22。

在一些实施方式中，步骤s3中插穗的切制方法选自以下其中之一：直角切、斜切、双面反切、nearing式。在一些实施方式中，步骤s3中插穗的切制方法为nearing式切制。

在一些实施方式中，步骤s4中的激素溶液包括500-800mg/l(优选地，例如500mg/l、680mg/l、750mg/l、800mg/l等)iba。

在一些实施方式中，基质还包括杨树花提取物。基质中添加杨树花提取物，能够提高扦插育苗的根系细胞呼吸关键酶的活力，促进细胞呼吸，提高能量代谢，促进对矿质元素的吸收，促进叶绿素的合成，提高叶片中的叶绿素含量，增强光合作用，进而促进扦插苗根茎叶形态指标的生长发育，提高苗木质量。

在一些实施方式中，杨树花提取物的含量为1-3wt％，优选地，例如1wt％、1.2wt％、1.8wt％、2.6wt％、3wt％等。

本发明提供一种扦插基质，其特征在于，包括河沙、泥炭、蛭石、岩棉、石英砂、蘑菇渣、杨树花提取物。

本发明提供一种海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠在提高香腮杜鹃插穗的导水率中的用途。

本发明提供一种扦插育苗方法在香腮杜鹃产业化育苗中的用途。

本发明还提供一种扦插基质在提高香腮杜鹃扦插苗质量中的用途。

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：

实施例1：

一种香腮杜鹃的扦插育苗方法，包括：

插穗防栓塞混合物的制备：将50g海藻酸钠，10g对羟基苯甲酸丙酯钠溶于3.5kg水中，搅拌至充分溶解，400w微波辐射6min，超声30min。

苗床准备：称取11kg河沙、16kg泥炭、15kg蛭石、16kg岩棉、14kg石英砂、27kg蘑菇渣、1kg杨树花提取物，搅拌均匀，分批装入8cm×11cm的营养袋，用0.1％的多菌灵消毒，充分混合均匀后装入32孔穴盘(50×27×10cm)，将穴盘整齐摆放在长50m，宽7m的温室大棚内。

插穗的采集：选取3年生生长健壮、无病虫害的香腮杜鹃母株，于1月份对母株进行修剪，6月下旬清晨8点前拿干净、锋利的枝剪从母株剪取当年生半木质化嫩枝作为插穗枝条，长度在11cm左右，立即蘸取插穗防栓塞混合物。

插穗的切制：修剪插穗枝条，修剪后枝条长度8cm左右，枝条顶端保留3片叶子，叶片大小在3.6-4.5cm，立即蘸取插穗防栓塞混合物。

扦插：扦插前24h再用0.3wt％的高锰酸钾对基质进行消毒，扦插前6h用水浇透基质，将插穗在含有500mg/liba溶液中浸泡6min后立即扦插，扦插的株距为2cm，行距5cm，深度为2cm，叶片正面统一朝向，腋芽方向竖直向上。

扦插管理：扦插后及时在床面用竹条，做成高约50cm左右的小拱棚，随即用农膜密闭覆盖(农膜要绷紧)，四周用砖头或泥土压实、压紧，前30d温度不超过32℃，空气相对湿度保持在85％，遮光率保持在80％。检查农膜密封情况，破损应及时修复并补充水分，补水时应做到浇透浇匀。扦插45d后，可打开农膜一端通风。

对比例1：

插穗防栓塞混合物不包含对羟基苯甲酸丙酯钠，其余部分和实施例1完全一致。

对比例2：

插穗防栓塞混合物不包含海藻酸钠，其余部分和实施例1完全一致。

对比例3：

插穗采集和切制后，未蘸取插穗防栓塞混合物，其余部分和实施例1完全一致。

对比例4：

扦插基质不包括杨树花提取物，其余部分和实施例1完全一致。

对比例5：

插穗采集和切制后，未蘸取插穗防栓塞混合物，扦插基质不包括杨树花提取物，其余部分和实施例1完全一致。

试验例1：

插穗的含水率、水势、导水率的测定：

在切制后扦插前对插穗进行编号并用游标卡尺对插穗的外径进行测量，测定插穗的含水量，测定步骤为先记录每个插穗对应的5cm长的插穗的鲜重，然后将其放入鼓风干燥机中进行干燥处理至衡重，并记录最后的质量，计算含水率，含水率＝(烘干后重量-插穗鲜重)/插穗鲜重；使用兰州大学生产的zlz-5型压力室测定插穗水势；使用“冲洗法”定插穗测导水率。插穗的含水率，水势的测定结果见图1。插穗的导水率的测定结果见图2。

由图1，图2可以看出，实施例1和对比例4中插穗的含水率、水势、导水率明显高于对比例1、对比例2、对比例3、对比例5，这说明，插穗采集和切制后，立刻蘸取海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠的混合溶液，可减少扦插前间隔过程中插穗水分的损失，从而抑制木质部水势降低，抑制插穗木质部即发生栓塞化，抑制导水率降低。

试验例2：

扦插苗根系细胞呼吸关键酶活性的测定：

1.己糖激酶(hk)活性的测定：取0.5g香腮杜鹃扦插苗根系于3ml磷酸缓冲液(含1.4mmβ-巯基乙醇，0.1gpvp40,000，ph8.0)中冰浴研磨，将匀浆于4℃下11000rpm离心10min，用己糖激酶检测试剂盒测定酶活。

2.磷酸果糖激酶(pek)活性的测定：取1.0g香腮杜鹃扦插苗根系于5mlph7.50.1mol/ltris-hcl中冰浴研磨，将匀浆于4℃下4000rpm离心30min。用植物磷酸果糖激酶检测试剂盒测定酶活。

3.丙酮酸激酶(pk)活性的测定：取3g香腮杜鹃扦插苗根系于10mlph7.5tris-hcl缓冲液(含10％甘油，15mm巯基乙醇，1mmedta，5mmmgcl2)冰浴研磨。匀浆经过4层纱布过滤后，11000rpm离心15min。用丙酮酸激酶检测试剂盒测定酶活。

4.异柠檬酸脱氢酶活性(icdh)的测定：取0.5g香腮杜鹃扦插苗根系，加3ml0.03mol/lph7.5磷酸钾(含1.1m亮抑肽酶，2mmβ-巯基乙醇，1％pvp)缓冲液，冰溶研磨，11000rpm离心15min。取上清液用于酶活测定。用异柠檬酸脱氢酶检测试剂盒测定酶活。扦插苗根系细胞的hk、pek、pk、icdh活性的测定结果见图3。

由图3可以看出，实施例1、对比例1、对比例2、对比例3中扦插苗根系细胞的hk、pek、pk、icdh活性明显高于对比例4，对比例5，这说明，扦插基质中添加杨树花提取物，能够提高扦插育苗的根系细胞呼吸关键酶的活力，促进细胞呼吸。

试验例3：

1.扦插苗矿质元素含量的测定：

本试验主要对影响叶绿素合成的关键矿质元素n、mg、fe的含量进行测定。取香腮杜鹃扦插苗根系烘干后研磨，过筛待测。

1)n含量的测定：称取0.25g样品于100ml玻璃消煮管中，加入5ml浓硫酸(h2so4,ar,98％)，放在涡旋振荡器上震荡摇匀后静置过夜，备用，同时每批需做2个空白对照(不加样品)。将消煮炉消煮温度设置为375℃，待温度达到后，将样品加热消煮30min，后取下冷却30min(冷却至15min时，加入5ml双氧水，摇晃振匀)，再放至消煮炉加热消煮30min，再取下冷却30min(冷却至15min时，加入5ml双氧水，摇晃振匀)。反复消煮，待消煮液变为澄清透明后结束消煮。待消煮管冷却后加入电导率小于1μs/cm的去离子水定容至100ml，摇匀后，通过连续流动分析仪测定。

2)mg及fe含量的测定：称取0.1g样品于聚乙烯消煮管底部，避免样品粘到内壁，加入5ml浓硝酸(hno3,ar,65％)，然后用高通量微波消解仪进行消解，消解完成后将消解液转移至25ml容量瓶，用电导率小于1μs/cm的去离子水定容至刻度25ml，摇匀后待测。mg含量通过原子吸收分光光度计测定。fe含量通过电感耦合等离子体质谱仪测定。扦插苗的n、mg、fe含量的测定结果见图4。

由图4可以看出，实施例1、对比例1、对比例2、对比例3中扦插苗的n、mg、fe含量高于对比例4，对比例5，这说明，扦插基质中添加杨树花提取物，能够促进扦插苗对矿质元素的吸收。

2.扦插苗叶绿素含量的测定：将叶片清洗干净擦干，用剪刀剪成0.1cm左右的细丝混匀，期间避免剪到主脉，称取0.1g装入10ml离心管中，加入8ml80％丙酮，摇晃均匀后室温避光静置，期间摇晃3-4次，待浸提完全后，用uv-2250分光光度计进行测定，测定波长为663nm、645nm和470nm，以80％丙酮为对照调零。分别计算叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量。扦插苗的叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量的测定结果见图5。

由图5可以看出，实施例1、对比例1、对比例2、对比例3中扦插苗的叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量均高于对比例4，对比例5，这说明，扦插基质中添加杨树花提取物，能够提高叶片中的叶绿素含量，增强光合作用。

试验例4：

苗木生长参数的测定：

扦插4个月后统计成活率，测量苗木的株高、茎粗、着叶数、叶面积、生根数、平均根长、总生物量，然后求平均值。采用破坏性取样方式来统计扦插苗生根数，测量根长，计算平均根长；将香腮杜鹃整株于60℃条件下烘干至恒重。冷却后，以分析天平测定总生物量。苗木的株高、着叶数、生根数、成活率的测定结果见图6。苗木的茎粗、叶面积、平均根长、总生物量的测定结果见图7。

由图6，图7可以看出，实施例1的株高、着叶数、生根数、成活率、茎粗、叶面积、平均根长、总生物量明显高于对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、对比例5，对比例3和对比例4明显高于对比例5，这说明，插穗采集和切制后，立刻蘸取海藻酸钠与对羟基苯甲酸丙酯钠的混合溶液，提能够高扦插穗条的成活率，促进插穗生长发育；扦插基质中添加杨树花提取物，能够促进扦插苗根茎叶形态指标的生长发育，提高苗木质量。

上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。