用于预防或减少真菌病原体在植物上生长的微生物组合物的制作方法

文档序号：22754753发布日期：2020-10-31 09:50阅读：639来源：国知局

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本申请要求于2018年2月12日提交的美国临时申请号62/629,525的优先权，其通过引用以其整体并入本文。

背景技术：

真菌病原体造成重大的农业损失，导致作物损失、食物浪费和经济损失。具有抗真菌特性的微生物已经被开发作为生物防治剂，以减少由这些真菌病原体造成的作物损失和食物腐败。市售产品可能未显示出期望的植物或真菌特异性或有效性。此外，对于农产品，尤其是有机农产品的采后保护存在有限的选择。阻止真菌生长的生物防治组合物可以提供目前可用产品的替代品。

技术实现要素：

在某些实施方案中，本文描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体；其中所述至少一种微生物具有与选自seqidno:1和seqidno:9的组的16srrna序列呈大于99％同一性的16srrna序列，或者其中所述至少一种微生物具有与选自seqidno:17和seqidno:20的组的its序列呈大于99％同一性的its序列，或者其中所述至少一种微生物具有与seqidno:18的its序列呈大于90％同一性的its序列。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体；其中所述至少一种微生物包含与大于200碱基的序列呈大于99％同一性的rrna序列，所述序列包含选自seqidno:1和seqidno:9的rrna序列，或者其中所述至少一种微生物具有与seqidno:17的its序列呈大于99％同一性的its序列，或者其中所述至少一种微生物具有与seqidno:18呈大于90％同一性的its序列。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中如通过分别测量尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum)或大丽轮枝菌(verticilliumdahliae)的存活所测定的，所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制尖孢镰刀菌的生长25％或更多，或相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制大丽轮枝菌的生长60％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述至少一种微生物具有与seqidno:22的16srrna序列呈大于99％同一性的16srrna序列。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述至少一种微生物具有与seqidno:23的16srrna序列呈大于99％同一性的16srrna序列。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述至少一种微生物具有与选自seqidno:24的组的16srrna序列呈大于99％同一性的16srrna序列，或者其中所述至少一种微生物具有与选自seqidno:25的组的its序列呈大于99％同一性的its序列，或者其中所述至少一种微生物具有与seqidno:25的its序列呈大于90％同一性的its序列。

在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制灰葡萄孢(botrytiscineria)的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制蓝莓干枯病菌(moniliniavaccinii-corymbosi)的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制白蜡树炭疽菌(colletotrichumspaethanium)的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制高粱柄锈菌(pucciniasorghi)的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制葡萄生轴霜霉(plasmoparaviticola)的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制葡萄白粉菌(erysiphenecator)的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制podasphaeramacularis的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制pytium属的生物体的生长25％或更多。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物，以及(ii)载体，其中所述生物防治组合物能够相对于未暴露于所述生物防治组合物的对照抑制根霉菌属(rhizopus)的生物体的生长25％或更多。

在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物的次级代谢产物，以及(ii)载体；其中所述至少一种微生物具有与选自seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21和seqidno:25的组的its序列呈大于99％同一性的its序列。在某些实施方案中，本文还描述了生物防治组合物，其包含：(i)至少一种微生物的次级代谢产物，以及(ii)载体；其中所述至少一种微生物具有与选自seqidno:1、seqidno:9、seqidno:22、seqidno:23和seqidno:24的组的16srrna序列呈大于99％同一性的16srrna序列。

一方面，所述生物防治组合物还包含第二微生物，其中所述第二微生物与所述至少一种微生物不相同。所述第二微生物可以包含与选自seqidno:1-25的序列呈至少95％同一性的rna序列。所述第二微生物可以包含与选自seqidno:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、22、23和24的16srrna序列呈至少95％同一性的16srrna序列。所述第二微生物可以包含与选自seqidno:17、18、19、20、21和25的its序列呈至少95％同一性的内转录间隔区(its)序列。所述第二微生物可以包含与选自seqidno:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、22、23和24的16srrna序列呈至少99％同一性的16srrna序列。所述第二微生物可以包含与选自seqidno:17、18、19、20、21和25的its序列呈至少99％同一性的内转录间隔区(its)序列。所述第二微生物可以包含16srrna序列，所述16srrna序列是选自seqidno:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、22、23和24的16srrna序列。所述第二微生物可以包含内转录间隔区(its)序列，所述内转录间隔区(its)序列是选自seqidno:17、18、19、20、21和25的its序列。

在一些实施方案中，所述至少一种微生物包含与seqidno:24呈至少99％同一性的16srrna序列，并且所述第二微生物包含与seqid:no25呈至少99％同一性的its序列。

一方面，所述生物防治组合物还包含第三微生物，并且所述第三微生物与所述第二微生物或所述至少一种微生物均不相同。在一些实施方案中，所述至少一种微生物包含与seqid:23呈大于99％同一性的16srrna序列，所述第二微生物包含与seqid:23呈大于99％同一性的16srrna序列，并且所述第三微生物包含与seqid:23呈大于99％同一性的16srrna序列。一方面，所述生物防治组合物还包含第四微生物，并且所述第四微生物与所述第三微生物、所述第二微生物或所述至少一种微生物中的任何一个均不相同。一方面，所述生物防治组合物还包含第五微生物，并且所述第五微生物与所述第四微生物、所述第三微生物、所述第二微生物或所述至少一种微生物中的任何一个均不相同。所述生物防治组合物中的任何一种所述微生物可以是分离和纯化的微生物。如本文所公开的生物防治组合物可以包含一种或多种分离和纯化的微生物。如本文所公开的生物防治组合物可以包含一种或更多种、两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种或者五种或更多种分离和纯化的微生物。在一些情况下，所述生物防治组合物可以包含来自单一微生物菌种的分离和纯化的微生物的不同菌株。

所述至少一种微生物可以具有与seqidno:18呈大于90％同一性的its序列，并且其中所述第二微生物是葡糖醋杆菌属(gluconacetobacter)种。所述葡糖醋杆菌属种可以是产液葡糖醋杆菌(gluconacetobacterliquefaciens)。所述葡糖醋杆菌种可以具有选自seqidno:2、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14和seqidno:16的16srrna序列。

一方面，所述至少一种微生物的所述次级代谢产物是从所述至少一种微生物的培养物的上清液中分离出来的。至少一种微生物的所述次级代谢产物可以包含脂肽。所述脂肽可以是选自表面活性素、丰原素和伊枯草菌素的环脂肽。至少一种微生物的所述次级代谢产物可以包含聚酮。至少一种微生物的所述次级代谢产物可以包含挥发性抗真菌化合物。

一方面，所述对照暴露于枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)菌株qst713。一方面，所述至少一种微生物经分离和纯化。一方面，所述生物防治组合物是液体或粉末。一方面，所述生物防治组合物包含孢子。

在某些实施方案中，本文描述了预防或减少真菌病原体在植物、根、种子、向其中添加所述种子的土壤或犁沟或者其农产品上生长的方法，包括：向所述植物、根、种子、向其中添加所述种子的土壤或犁沟或者农产品施用本文所述的生物防治组合物，其中所述生物防治组合物具有抗真菌活性。在某些实施方案中，本文还描述了预防或减少真菌病原体在植物、种子、根、向其中添加所述种子或植物的土壤或犁沟或者其农产品上生长的方法，包括：向所述土壤施用本文所述的生物防治组合物，其中所述生物防治组合物具有抗真菌活性。在某些实施方案中，本文还描述了预防或减少真菌病原体在农产品上生长的方法，包括：在收获前用本文所述的生物防治组合物喷涂或以其他方式处理所述农产品，其中所述生物防治组合物具有抗真菌活性。在某些实施方案中，本文还描述了预防或减少真菌病原体在农产品上生长的方法，包括：用本文所述的生物防治组合物喷涂、浸渍或以其他方式处理所述农产品，其中所述生物防治组合物具有抗真菌活性。在某些实施方案中，本文还描述了预防或减少真菌病原体在农产品上生长的方法，包括：向用于运输或储存所述农产品的包装材料施用本文所述的生物防治组合物，其中所述生物防治组合物具有抗真菌活性。在某些实施方案中，本文还描述了预防或减少真菌病原体在种子或农产品上生长的方法，包括：将本文所述的生物防治组合物结合到选自以下的过程中：清洗所述农产品或所述种子、涂覆所述农产品或所述种子及其组合。

一方面，所述植物、种子或其农产品是蔷薇科植物或农产品。所述蔷薇科的所述植物、种子或其农产品可以是悬钩子属、苹果属、梨属、榅桲属、李属、蔷薇属或草莓属。所述悬钩子属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是覆盆子或黑莓。所述草莓属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是草莓。所述梨属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是梨。所述榅桲属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是榅桲。所述李属的所述植物、所述种子或所述其农产品是扁桃、桃、李子、杏、樱桃或黑刺李。所述蔷薇属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是玫瑰。所述苹果属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是苹果。

一方面，所述植物、种子或其农产品是杜鹃花科植物或其农产品。所述植物、所述种子或所述其农产品可以是杜鹃花科越橘属的植物、种子、花或其农产品。所述越橘属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是蓝莓。

一方面，所述植物、种子或其农产品是葡萄科植物或农产品。所述植物、所述种子或所述其农产品可以是葡萄科葡萄属的植物、种子或农产品。所述葡萄属的所述植物、所述种子或所述其农产品可以是葡萄。

一方面，施用所述生物防治组合物包括使用所述生物防治组合物撒粉、浸渍、滚动、注入、擦抹、喷涂或刷涂所述植物、种子或所述农产品。向所述植物施用所述生物防治组合物可以包括将所述生物防治组合物添加至滴线、灌溉系统、化学灌溉系统、喷雾剂或浸剂。

向所述植物施用所述生物防治组合物可以包括向所述植物的根施用所述生物防治组合物。向所述根的施用可以是间接的。可以在将所述农产品从所述植物移除之后向所述农产品施用所述生物防治组合物。一方面，所述施用不会杀死所述植物。一方面，所述方法还包括向所述植物施用肥料、除草剂、农药或其组合。所述肥料、除草剂或农药可以在所述生物防治组合物之前、在所述生物防治组合物之后或者与所述生物防治组合物同时施用。

一方面，所述包装材料包括：聚对苯二甲酸乙二醇酯(pet)、模塑纤维、定向聚苯乙烯(ops)、聚苯乙烯(ps)泡沫、聚丙烯(pp)或其组合。向包装材料的施用可以包括清洗或浸渍所述包装材料。

一方面，所述抗真菌活性阻止所述真菌病原体生长至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天。所述抗真菌活性可以是相对于所述真菌病原体在对照上的生长，所述真菌病原体在所述植物、所述种子或所述其农产品上减少的生长，所述对照是未暴露于所述生物防治组合物的蔷薇科植物、种子或其农产品。在所述真菌病原体暴露于所述生物防治组合物之后，所述真菌病原体的所述生长可以相对于所述真菌病原体在未暴露于所述生物防治组合物的植物、种子或其农产品上的生长减少至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天。一方面，所述生物防治组合物具有针对丝状或非丝状真菌病原体的抗真菌活性。所述丝状或非丝状真菌病原体可以选自：白锈菌(albugocandida)、西方白锈(albugooccidentalis)、烟草赤星病菌(alternariaalternata)、瓜链格孢(alternariacucumerina)、胡萝卜链格孢(alternariadauci)、茄链格孢(alternariasolani)细链格孢(alternariatenuis)、细极链格孢(alternariatenuissima)、番茄链格孢(alternariatomatophila)、根腐丝囊霉(aphanomyceseuteiches)、萝卜丝囊霉(aphanomycesraphani)、蜜环菌(armillariamellea)、botrydiatheobromae、灰葡萄孢(botrytiscinerea)、富克葡萄孢盘菌(botrytiniafuckeliana)、莴苣盘霜霉(bremialactuca)、甜菜生尾孢(cercosporabeticola)、黑莓小尾孢(cercosporellarubi)、多主枝孢(cladosporiumherbarum)、尖孢炭疽菌(colletotrichumacutatum)、胶孢炭疽菌(colletotrichumgloeosporioides)、菜豆炭疽菌(colletotrichumlindemuthianum)、香蕉炭疽菌(colletotrichummusae)、白蜡树炭疽菌(colletotrichumspaethanium)、香蕉暗双孢(cordanamusae)、多主棒孢(corynesporacassiicola)、葡萄根瘤蚜(daktulosphairavitifoliae)、泻根亚隔孢壳(didymellabryoniae)、痂囊腔菌(elsinoeampelina)、芒果痂囊腔菌(elsinoemangiferae)、覆盆子痂囊腔菌(elsinoeveneta)、菊科白粉菌(erysiphecichoracearum)、葡萄白粉菌(erysiphenecator)、葡萄藤猝倒病菌(eutypalata)、尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum)、茄镰刀菌(fusariumsolani)、狭长孢灵芝(ganodermaboninense)、葡萄球座菌(guignardiabidwellii)、悬钩子裸双孢锈菌(gymnoconiapeckiana)、茄长蠕孢(helminthosporiumsolani)、盾壳霉小球腔菌(leptosphaeriaconiothyrium)、油菜小球腔菌(leptosphaeriamaculans)、鞑靼内丝白粉菌(leveillulataurica)、菜豆壳球孢(macrophominaphaseolina)、桤叉丝壳(microsphaeraalni)、果产链核盘菌(moniliniafructicola)、蓝莓干枯病菌(moniliniavaccinii-corymbosi)、角球腔菌(mycosphaerellaangulate)、芸苔球腔菌(mycosphaerellabrassicicola)、草莓球腔菌(mycosphaerellafragariae)、斐济球腔菌(mycosphaerellafijiensis)、鞑靼拟粉孢(oidopsistaurica)、黄钉孢(passalorafulva)、霜霉菌(peronosporasparse)、粉霜霉(peronosporafarinosa)、短小茎点霉(phomaexigua)、昏暗拟茎点霉(phomopsisobscurans)、牛痘拟茎点霉(phomopsisvaccinia)、葡萄拟茎点霉(phomopsisviticola)、辣椒疫霉(phytophthoracapsica)、红腐疫霉(phytophthoraerythroseptica)、致病疫霉(phytophthorainfestans)、寄生疫霉(phytophthoraparasitica)、葡萄生轴霜霉(plasmoparaviticola)、甘蓝根肿菌(plasmodiophorabrassicae)、斑点单囊壳(podosphaeramacularis)、马铃薯皮斑病菌(polyscytalumpustulans)、葡萄假尾孢(pseudocercosporavitis)、葱柄锈菌(pucciniaallii)、高粱柄锈菌(pucciniasorghi)、牛痘膨痂锈菌(pucciniastrumvaccinia)、德巴利腐霉(pythiumdebaryanum)、腐霉沟(pythiumsulcatum)、终极腐霉(pythiumultimum)、茄科雷尔氏菌(ralstoniasolanacearum)、厚环柱隔孢(ramulariatulasneii)、茄丝核菌(rhizoctoniasolani)、少根根霉(rhizopusarrhizus)、匍枝根霉(rhizopusstoloniferz)、小核盘菌(sclerotiniaminor)、核盘菌(sclerotiniasclerotiorum)、白腐小核菌(sclerotiumcepivorum)、齐整小核菌(sclerotiumrolfsii)、小核盘菌(sclerotiniaminor)、核盘菌(sclerotiniasclerotiorum)、芹菜生壳针孢(septoriaapiicola)、莴苣壳针孢(septorialactucae)、番茄壳针孢(septorialycopersici)、欧芹壳针孢(septoriapetroelini)、鳄梨痂圆孢(sphacelomaperseae)、斑点单囊壳(sphaerothecamacularis)、马铃薯粉痂菌(spongosporasubterrannea)、囊状匍柄霉(stemphyliumvesicarium)、内生瓶菌(synchytriumendobioticum)、根串珠霉(thielaviopsisbasicola)、葡萄钩丝壳(uncinulanecator)、疣顶单孢锈菌(uromycesappendiculatus)、蓼单孢锈菌(uromycesbetae)、黑白轮枝菌(verticilliumalbo-atrum)、大丽轮枝菌(verticilliumdahliae)、可可轮枝菌(verticilliumtheobromae)及其任何组合。所述丝状真菌病原体可以选自由以下组成的组：尖孢镰刀菌、大丽轮枝菌、灰葡萄孢、白蜡树炭疽菌、葡萄白粉菌、斑点单囊壳、蓝莓干枯病菌、高粱柄锈菌及其任何组合。所述植物、所述种子或所述其农产品可以选自：扁桃、杏、苹果、朝鲜蓟、香蕉、大麦、甜菜、黑莓、蓝莓、西兰花、抱子甘蓝、卷心菜、大麻、辣椒、胡萝卜、芹菜、莙荙菜、樱桃、柑橘、玉米、葫芦、海枣、无花果、大蒜、葡萄、香草、香料、羽衣甘蓝、莴苣、油棕、橄榄、洋葱、豌豆、梨、桃、花生、木瓜、欧防风、美洲山核桃、柿子、李子、石榴、马铃薯、榅桲、小萝卜、覆盆子、玫瑰、水稻、黑刺李、高粱、大豆、菠菜、草莓、甘薯、烟草、番茄、芜菁、胡桃和小麦。

援引并入

本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同具体地和单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请的整体均通过引用而并入。

附图说明

在所附权利要求书中具体阐述了本发明的新颖特征。通过参考以下对利用本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在这些附图中：

图1图示了与对照相比，施用14种候选微生物后，大丽轮枝菌和尖孢镰刀菌在半固体琼脂上的存活％。

图2图示了表1中的16s与its序列之间的系统发生关系。

图3图示了利用对环境中菌种之间的相互作用的理解来鉴别候选物。葡萄汁有孢汉逊酵母(hanseniasporauvarum)被鉴别为与尖孢镰刀菌直接相互作用，造成真菌的生长抑制。证实了葡萄汁有孢汉逊酵母抑制尖孢镰刀菌生长的能力，并将葡萄汁有孢汉逊酵母发展为产品候选。此处示出了葡萄汁有孢汉逊酵母与尖孢镰刀菌之间经鉴别的一级相互作用；葡萄汁有孢汉逊酵母的鉴别的分离；以及葡萄汁有孢汉逊酵母引起尖孢镰刀菌抑制的证实。

图4图示了在不同的处理后，感染灰葡萄孢的覆盆子的表面积百分比：(+)感染灰葡萄孢的对照，(-)未感染的对照，以及感染灰葡萄孢但已施用产品候选物bc8(解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)；菌株28b)的培养物的上清液的样品。

图5a-图5c图示了在不同的处理方案后真菌在覆盆子上的生长。图5a图示了真菌在感染灰葡萄孢的对照上的生长。图5b图示了真菌在未感染对照上的生长。图5c图示了真菌在感染灰葡萄孢并且已施用产品候选物bc8(解淀粉芽孢杆菌；菌株28b)的培养物的上清液的覆盆子上的生长。

图6图示了bc8菌株与两种贝莱斯芽孢杆菌(b.velezensis)fzb42分离物的16srna序列的核苷酸比对。

图7图示了葡萄孢属在经处理和未处理的植物中的蓝莓灌木上的发生率。

图8图示了在经处理和未处理的植物中感染葡萄孢属的蓝莓的百分比。

图9图示了在经处理和未处理的植物中每个蓝莓灌木葡萄孢属花腐病的发生数量。

图10图示了在经处理和未处理的植物中感染葡萄孢属的蓝莓的百分比。

图11图示了在经处理和未处理的植物中每个蓝莓灌木的葡萄孢属花腐病的发生数量。

图12图示了在经处理和未处理的植物中感染葡萄孢属的蓝莓的百分比。

图13a图示了经处理和未处理的蓝莓灌木中掉落芽(shootstrike)的数量。图13b图示了经处理和未处理的蓝莓灌木中僵果的数量。

图14a图示了经处理和未处理的蓝莓灌木中掉落芽的数量。图14b图示了经处理和未处理的蓝莓灌木中僵果的数量。

图15图示了在经处理和未处理的玉米植株中由玉米锈病引起的病害损害百分比。

图16a图示了在经处理和未处理的玉米植株中由玉米锈病引起的病害损害百分比。图16b图示了在经处理和未处理的玉米植株中玉米锈病的病害严重程度指数。

图17a图示了在经处理和未处理的玉米植株中由玉米锈病引起的病害损害百分比。图17b图示了在经处理和未处理的玉米植株中玉米锈病的病害严重程度指数。

图18a图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害严重程度百分比。图18b图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害严重程度百分比。

图19a图示了在经处理和未处理的葡萄丛中葡萄孢属的病害严重程度百分比。图19b图示了在经处理和未处理的葡萄丛中葡萄孢属的病害指数百分比。

图20a图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中白粉病的病害严重程度百分比。图20b图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中白粉病的病害指数百分比。

图21a图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害严重程度百分比。图21b图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害指数百分比。

图22图示了在经处理和未处理的葡萄灌木中葡萄孢属的病害严重程度百分比。

图23a图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害严重程度百分比。图23b图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害指数百分比。

图24a图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害严重程度百分比。图24b图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中霜霉病的病害指数百分比。

图25a图示了在经处理和未处理的葡萄灌木中葡萄孢属的病害严重程度百分比。图25b图示了在经处理和未处理的葡萄灌木中葡萄孢属的病害指数百分比。

图26a图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中白粉病的病害严重程度百分比。图26b图示了在经处理和未处理的葡萄叶片中白粉病的病害指数百分比。

图27a图示了在经处理和未处理的覆盆子灌木中葡萄孢属的平均病害严重程度百分比。图27b图示了在经处理和未处理的覆盆子灌木中葡萄孢属的平均病害指数百分比。

图28a图示了在经处理和未处理的覆盆子叶片中白粉病的平均病害严重程度百分比。图28b图示了在经处理和未处理的覆盆子叶片中白粉病的平均病害指数百分比。

图29a图示了在经处理和未处理的覆盆子中白粉病的平均病害严重程度百分比。图29b图示了在经处理和未处理的覆盆子中白粉病的平均病害指数百分比。

图30a图示了在经处理和未处理的覆盆子灌木中葡萄孢属的平均病害严重程度百分比。图30b图示了在经处理和未处理的覆盆子灌木中葡萄孢属的平均病害指数百分比。

图31a图示了在经处理和未处理的覆盆子叶片中白粉病的病害严重程度百分比。图31b图示了在经处理和未处理的覆盆子叶片中白粉病的病害指数百分比。

图32a图示了在经处理和未处理的覆盆子中白粉病的病害严重程度百分比。图32b图示了在经处理和未处理的覆盆子中白粉病的病害指数百分比。

图33a图示了在经处理和未处理的覆盆子灌木中葡萄孢属的平均病害严重程度百分比。图33b图示了在经处理和未处理的覆盆子灌木中葡萄孢属的平均病害指数百分比。

图34a图示了在经处理和未处理的覆盆子叶片中白粉病的病害严重程度百分比。图34b图示了在经处理和未处理的覆盆子叶片中白粉病的病害指数百分比。

图35a图示了在经处理和未处理的覆盆子中白粉病的病害严重程度百分比。图35b图示了在经处理和未处理的覆盆子中白粉病的病害指数百分比。

图36图示了在经处理和未处理的植物中感染葡萄孢属和根霉菌属的腐烂草莓的数量。

图37图示了在经处理和未处理的植物中感染葡萄孢属和根霉菌属的腐烂草莓的数量。

图38图示了在经处理和未处理的植物中每米感染腐霉菌属(pythium)的大豆植株的作物株数。

图39图示了经处理或未处理的已感染灰葡萄孢的覆盆子。

图40图示了经处理或未处理的已感染灰葡萄孢的葡萄。

图41图示了经处理或未处理的已感染灰葡萄孢的苹果。

图42图示了经处理的已感染灰葡萄孢的苹果。

图43图示了在经处理或未处理的已感染灰葡萄孢的苹果中坏死的苹果百分比。

图44图示了经处理或未处理的已感染灰葡萄孢的桃。

具体实施方式

许多真菌病原体可以感染农业上重要的植物，导致当植物在田间或收获后食物腐烂和食物腐败。例如，在田间和杂货店的水果(诸如草莓和覆盆子)上经常可以发现由真菌病原体灰葡萄孢引起的灰霉病。涉及食品生产和消费的任何人都非常期望找到减少由真菌病原体造成的损失的方法，并且先前已经开发了基于化学和生物学的控制策略。然而，在粮食作物上使用基于化学和生物学的杀真菌剂虽然有效，但这从消费者的角度来看是不期望的之外，除此之外还可能提供意想不到的副作用(例如，毒性)。另外，目前可获得的市售生物防治组合物可能无法提供所需的病原体或植物特异性或功效。最后，记录和报告合成化学农药的施用可能存在非常大的、对农民和种植者而言繁重的负担。

本文所述的生物防治组合物可以具有针对农业上重要真菌的抗真菌活性，并且可以被配制用于在生产过程中的不同点使用。例如，这些生物防治组合物可以被配制用于在农产品的收获前(例如，将组合物引入灌溉线或者与肥料结合施用)以及收获后的加工、包装、运输、储存和商业展示期间(例如，用组合物喷涂收获的农产品或者向用于储存或运输农产品的包装材料施用组合物)使用。此外，当与商业生物防治组合物相比时，这些生物防治组合物可以显示出改善的功效。

如本文所用的，术语“病害严重程度指数”通常是指表示植物上可见的病害症状程度的评分。例如，给定的病害严重程度指数可以在叶片上具有指示病害的特定数量(或数量范围)的斑点。例如，与具有较低病害严重程度指数的植物相比，具有更多病害症状的植物具有较高的病害严重程度指数。不同种类的植物可能具有与之相关的不同的病害严重程度指数。

如本文所用的，术语“病害严重程度”或“平均病害严重程度”或“平均病害严重程度百分比”通常是指在植物或植物种群上可见的病害症状的程度。病害严重程度可以通过病害症状覆盖的植物百分比来计算。种群的平均病害严重程度百分比可以通过评估每株植物的病害严重程度并对每株植物的病害严重程度取平均值来计算。

如本文所用的，术语“病害指数”、“平均病害指数”或“平均病害指数百分比”通常是指植物种群的评分，其代表在植物种群中可见的病害症状的程度。病害指数可以计算为病害发生率乘以病害严重程度。可以基于单株植物的病害严重程度指数或评分、具有该病害严重程度指数的植物的数量、植物的总数、最大病害指数和病害发生百分比计算平均病害指数，以便生成表示平均病害严重程度的加权平均值。在非限制性的实例中，平均病害指数百分比的一般计算可以用[总和(给定评分的植物的数目乘以评分)]/[(植物的总数乘以最大评分)]乘以100得出。

用于预防或减少作物损失和食物腐败的组合物

本文公开了能够预防或减少真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长的生物防治组合物。术语“农产品”在本文中可以用于指植物的可食用部分，例如叶、茎、种子、根、花或果实。在本文中术语“植物”可以用于指植物的任何部分，例如叶、茎、种子、根或果实。预防或减少真菌病原体在植物、种子或其农作物上生长可以减少在从植物收获农产品之前、期间或之后的作物损失和食物腐败。

至少一种微生物可以是细菌或酵母。至少一种微生物可以包括来自选自以下属的微生物：芽孢杆菌属(bacillus)、伯克氏菌属(burkholderia)、cutaneotrichosporon、cyberlindnera、葡糖醋杆菌属、葡糖酸杆菌属(gluconobacter)、有孢汉逊酵母属(hanseniaspora)、paraburkholderia、假单胞菌属(pseudomonas)、有孢圆酵母属(torulaspora)及其任何组合。

至少一种微生物可以包括选自以下的微生物：解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、cutaneotrichosporonjirovecii、cutaneotrichosporonmoniliiforme、cutaneotrichosporonmucoides、拟威尔嗜杀酵母(cyberlindneramrakii)、cyberlindnerasaturnus、产液葡糖醋杆菌、蜡色葡糖杆菌(gluconobactercerinus)、葡萄汁有孢汉逊酵母、paraburkholderiaphytofirmans、荧光假单胞杆菌(pseudomonasfluorescens)、腓特烈斯贝假单胞菌(pseudomonasfrederiksbergensis)、亚麻假单胞菌(pseudomonaslini)、米氏假单胞菌(pseudomonasmigulae)、戴尔凯氏有孢圆酵母(torulasporadelbrueckii)及其任何组合。

至少一种微生物可以是来自芽孢杆菌属的微生物。至少一种微生物可以是来自伯克氏菌属的微生物。至少一种微生物可以是来自cutaneotrichosporon属的微生物。至少一种微生物可以是来自cyberlindnera属的微生物。至少一种微生物可以是来自葡糖醋杆菌属的微生物。至少一种微生物可以是来自葡糖酸杆菌属的微生物。至少一种微生物可以是来自有孢汉逊酵母属的微生物。至少一种微生物可以是来自paraburkholderia属的微生物。至少一种微生物可以是来自假单胞菌属的微生物。至少一种微生物可以是来自有孢圆酵母属的微生物。

至少一种微生物可以是解淀粉芽孢杆菌。至少一种微生物可以是枯草芽孢杆菌。至少一种微生物可以是贝莱斯芽孢杆菌。至少一种微生物可以是cutaneotrichosporonjivrovecii。至少一种微生物可以是解淀粉芽孢杆菌。至少一种微生物可以是cutaneotrichosporonmucoides。至少一种微生物可以是拟威尔嗜杀酵母。至少一种微生物可以是cyberlindnerasaturnus。至少一种微生物可以是产液葡糖醋杆菌。至少一种微生物可以是蜡色葡糖杆菌。至少一种微生物可以是葡萄汁有孢汉逊酵母。至少一种微生物可以是paraburkholderiaphytofirmans。至少一种微生物可以是paraburkholderiafluroescens。至少一种微生物可以是paraburkholderiafrederiksbergensis。至少一种微生物可以是亚麻假单胞菌。至少一种微生物可以是米氏假单胞菌。至少一种微生物可以是戴尔凯氏有孢圆酵母。

至少一种微生物可以包括与选自以下的微生物的rrna呈至少约70％、75％、80％、85％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物：解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、cutaneotrichosporonjirovecii、cutaneotrichosporonmoniliiforme、cutaneotrichosporonmucoides、拟威尔嗜杀酵母、cyberlindnerasaturnus、产液葡糖醋杆菌、蜡色葡糖杆菌、葡萄汁有孢汉逊酵母、paraburkholderiaphytofirmans、荧光假单胞杆菌、腓特烈斯贝假单胞菌、亚麻假单胞菌、米氏假单胞菌、戴尔凯氏有孢圆酵母及其任何组合。rrna可以是16srrna、23srrna、内转录间隔区(its)或其组合。至少一种微生物可以是来自一种或多种微生物菌种的微生物菌株的组合。

生物防治组合物可以包含：(i)至少一种微生物或至少一种微生物的次级代谢产物，以及(ii)载体，并且其中至少一种微生物具有与选自seqidno:1和seqidno:9的组的16srrna序列呈大于98％同一性的16srrna序列，或者其中至少一种微生物具有与选自seqidno:17和seqidno:20的组的its序列呈大于98％同一性的its序列，或者其中至少一种微生物具有与seqidno:18的its序列呈大于90％同一性的its序列。

微生物可以包含与选自以的序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的rna序列：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqid23、seqid24和seqid25。

生物防治组合物还可以包括第二微生物，其中第二微生物与至少一种微生物不相同。第二微生物可以包含与选自以下的序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的rna序列：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno23、seqidno:24和seqidno25。在一些情况下，第一微生物和第二微生物是相同的菌种。例如，第一微生物和第二微生物可以都是解淀粉芽孢杆菌。在进一步的非限制性实例中，如本文公开的生物防治组合物可以包括第一微生物和第二微生物，以及任选地多于两种微生物、相同菌种的每种不同菌株。在一些情况下，第一微生物和第二微生物不是相同的菌种。例如，第一微生物可以是蜡色葡糖杆菌并且第二微生物可以是葡萄汁有孢汉逊酵母。在一些情况下，第一微生物和第二微生物不是相同的属。在一些情况下，第一微生物和第二微生物不属于相同的科。在一些情况下，第一微生物和第二微生物不属于相同的目。在一些情况下，第一微生物和第二微生物不属于相同的纲。在一些情况下，第一微生物和第二微生物不属于相同的门。在一些情况下，第一微生物和第二微生物不属于相同的界。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自芽孢杆菌属种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。芽孢杆菌属种可以是解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或贝莱斯芽孢杆菌。rrna序列可以是16s序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:1或seqidno:23呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自葡糖醋杆菌属种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。葡糖醋杆菌属种可以是产液葡糖醋杆菌。rrna序列可以是16s序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:2、seqidno:4、seqidno:5、seqisno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14或seqidno:16呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自葡糖酸杆菌属种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。葡糖酸杆菌属种可以是蜡色葡糖杆菌。rrna序列可以是16s序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:24呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自伯克氏菌属种或paraburkholderia菌种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。paraburkholderia菌种可以是paraburkholderiaphytofirmans。rrna序列可以是16s序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:3、seqidno:7或seqidno:9呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自假单胞菌属种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。假单胞菌属种可以是荧光假单胞杆菌、亚麻假单胞菌、米氏假单胞菌或腓特烈斯贝假单胞菌。rrna序列可以是16s序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:6、seqidno:10、seqidno:15或seqidno:22呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:8呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自cyberlindnera菌种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。cyberlindnera菌种可以是cyberlindernasaturnus或cyberlinderamrakkii。rrna序列可以是its序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:17呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自有孢汉逊酵母属种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。有孢汉逊酵母属种可以是葡萄汁有孢汉逊酵母。rrna序列可以是its序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:18或seqid:25呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:18或seqid:25呈至少90％序列同一性的至少一种微生物。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:18或seqid:25呈至少95％序列同一性的至少一种微生物。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:18或seqid:25呈至少99％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自有孢圆酵母属种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。有孢圆酵母属种可以是戴尔凯氏有孢圆酵母。rrna序列可以是its序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:19呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

在一个实施方案中，至少一种微生物包括与来自cutaneotrichosporon菌种的rrna序列呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。cutaneotrichosporon菌种可以是cutaneotrichosporonmoniliiforme、cutaneotrichosporonjirovecii或cutaneotrichosporonmucoides。rrna序列可以是its序列。在一个实施方案中，至少一种微生物包括与seqidno:20或seqidno:21呈至少约85％、87％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的至少一种微生物。

生物防治组合物可以包含包括多种微生物的微生物聚生体。多种微生物可以是至少两种微生物、至少三种微生物、至少四种微生物、至少五种微生物、至少六种微生物、至少七种微生物、至少八种微生物、至少九种微生物或至少十种微生物。多种微生物中的每种微生物可以是不同的微生物。生物防治组合物可以包含来自包括多种微生物的微生物聚生体的次级代谢产物，其中多种微生物是至少两种微生物、至少三种微生物、至少四种微生物、至少五种微生物、至少六种微生物、至少七种微生物、至少八种微生物、至少九种微生物或至少十种微生物。

至少两种微生物可以包括选自以下的至少两种微生物：具有选自seqidseqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24的16srrna序列的微生物以及具有选自seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21和seqidno25的its序列的微生物。至少两种微生物可以包括具有选自seqidno:1或seqidno:9的16srrna序列的第一微生物，或者其中第一微生物具有与选自seqidno:17和seqidno:20的组的its序列呈大于98％同一性的its序列，或者其中第一微生物具有与seqidno:18的its序列呈大于90％同一性的its序列。至少两种微生物可以包括具有与seqidno:18呈大于90％同一性的its序列的第一微生物，并且第二微生物可以是葡糖醋杆菌属种。葡糖醋杆菌属种可以是产液葡糖醋杆菌。葡糖醋杆菌属种可以是具有选自seqidno:2、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14和seqidno:16的16srrna序列的葡糖醋杆菌属种。至少两种微生物可以包括葡糖酸杆菌属种的第一微生物和有孢汉逊酵母属种的第二微生物。至少两种微生物可以包括第一微生物蜡色葡糖杆菌和第二微生物葡萄汁有孢汉逊酵母。

至少两种微生物可以包括具有与seqidno:24呈大于90％同一性的16s序列的第一微生物和具有与seqidno:25呈大于90％同一性的its序列的第二微生物。至少两种微生物可以包括具有与seqidno:24呈大于95％同一性的16s序列的第一微生物和具有与seqidno:25呈大于95％同一性的its序列的第二微生物。至少两种微生物可以包括具有与seqidno:24呈大于98％同一性的16s序列的第一微生物和具有与seqidno:25呈大于98％同一性的its序列的第二微生物。

至少三种微生物可以包括具有与seqid:23呈大于99％同一性的16srrna序列的第一微生物、具有与seqid:23呈大于99％同一性的16srrna序列的第二微生物、具有与seqid:23呈大于99％同一性的16srrna序列的第三微生物，其中第一微生物、第二微生物和第三微生物包含不相同的基因组。在一些情况下，基因组的区别可以在于单核苷酸多态性(snp)。在一些情况下，基因组的区别可能在于多于一个snp。在一些情况下，基因组的区别可能在于每个基因组中基因的数量。在一些情况下，基因组的区别可能在于重排(诸如插入、缺失、重排序、重构)或者基因组区域或基因的溶原性或无活性噬菌体、序列插入、重复基因组序列或其他不同的含量。在一些情况下，细胞dna含量的区别可能在于包含一种或多种质粒，菌株与菌株之间的质粒可能不同。在一些情况下，基因组可以编码基因的不同同种型。例如，如基因表达的蛋白可能含有点突变、缺失、插入，其可能影响蛋白的功能。例如，由基因表达的蛋白可能含有点突变、缺失、插入，其可能不影响蛋白的功能，或者其可能基本上不影响蛋白的功能。

至少三种微生物可以包括选自以下至少三种微生物：具有选自seqidseqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:22、seqidno:23和seqidno:24的16srrna序列的微生物以及具有选自seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21和seqidno:25的its序列的微生物。至少三种微生物可以包括具有选自seqidno:1、seqidno:9或seqid23的16srrna序列或者选自seqidno:17、seqidno:18或seqidno:20的its序列的至少一种微生物。

至少四种微生物可以包括选自以下的至少四种微生物：具有选自seqidseqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:22、seqidno:23和seqidno:24的16srrna序列的微生物以及具有选自seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21和seqidno:25的its序列的微生物。至少四种微生物可以包括具有选自seqidno:1、seqidno:9或seqidno:23的16srrna序列或者选自seqidno:17、seqidno:18或seqidno:20的its序列的至少一种微生物。

至少五种微生物可以包括选自以下的至少五种微生物：具有选自seqidseqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:22、seqidno:23和seqidno:24的16srrna序列的微生物以及具有选自seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21和seqidno:25的its序列的微生物。至少五种微生物可以包括具有选自seqidno:1、seqidno:9或seqid23的16srrna序列或者选自seqidno:17、seqidno:18或seqidno:20的its序列的至少一种微生物。

表1说明了微生物菌株标识、推定的微生物属或种以及本文所述的相应seqidno。至少一种微生物可以是表1中的微生物。图2表明了这些菌株中的一些菌株的系统发生关系。表2说明了对应于这些seqidno的序列。

表1.具有抗真菌活性的微生物菌株

表2.序列

至少一种微生物可以在培养物中生长。至少一种微生物可以从培养物中分离和纯化。从培养物中纯化的至少一种微生物可以包括至少一种微生物的营养细胞或孢子。培养物可以是固体或半固体培养基。培养物可以是液体培养基。培养物可以是生物反应器。可以使用任何合适的生物反应器。生物反应器的实例包括但不限于烧瓶、连续搅拌釜式生物反应器(cstr)、无泡生物反应器、气升式反应器和膜生物反应器。在一些情况下，培养物的上清液包含至少一种微生物的次级代谢产物。至少一种微生物的次级代谢产物可以从上清液中分离和纯化。在一些情况下，可以施用上清液作为如本文其他地方所述的生物防治组合物。

生物防治组合物可以包含至少一种微生物的一种或多种次级代谢产物。一种或多种次级代谢产物可以具有其自身的抗真菌特性。一种或多种次级代谢产物可以与生物防治组合物中的其他微生物一起具有抗真菌特性。一种或多种次级代谢产物可以从至少一种微生物的培养物的上清液中分离出来。一种或多种次级代谢产物可以包括脂肽、二肽、氨基多元醇、蛋白质、嗜铁素、吩嗪化合物、聚酮或其组合。

脂肽可以是线性脂肽或环脂肽(clp)。脂肽的实例包括但不限于表面活性素、丰原素、伊枯草菌素、massetolide、amphisin、节活性素、tolassin、syringopeptide、丁香霉素、恶臭溶菌素、杆菌霉素、bacillopeptin、杆菌肽、多粘菌素、达托霉素、抗霉枯草菌素、库尔斯塔克素、张力蛋白、制磷脂菌素、黏液菌素和棘白菌素。棘白菌素可以是棘白菌素b(ecb)。在一些实施方案中，次级代谢产物是表面活性素、丰原素、伊枯草菌素或其组合。

二肽可以是杆菌溶素或chlorotetain。聚酮可以是defficidin、大环内酰亚胺(macrolactin)、bacillaene、butyrolactola、soraphena、hippolachnina或forazolinea。次级代谢产物可以是氨基多元醇。氨基多元醇可以是zwittermicina。次级代谢产物可以是蛋白质。蛋白质可以是抗菌蛋白质(bacisubin)、枯草菌素或fungicin。

嗜铁素可以是绿脓菌荧光素、thioquinolobactin或绿脓菌螯铁蛋白。吩嗪化合物可以是吩嗪-1-羧酸、1-羟基吩嗪或吩嗪-1-甲酰胺。次级代谢产物可以是几丁质酶、纤维素酶、淀粉酶或葡聚糖酶。次级代谢产物可以是挥发性抗真菌化合物。

生物防治组合物可以被配制为液体制剂或干燥制剂。液体制剂可以是可流动的或水性的悬浮液。液体制剂可以包含悬浮在水、油或其组合(乳液)中的至少一种微生物或其次级代谢产物。干燥制剂可以是可湿性粉末、干片、粉尘或颗粒。可以将可湿性粉末作为悬浮液施用至植物、种子、花或其农产品。可以将粉尘干涂至植物、种子或其农产品，诸如干涂至种子或叶子。可以干涂颗粒，或者可以将颗粒与水混合以形成悬浊液。至少一种微生物或其次级代谢产物可以被配制为微胶囊，其中至少一种微生物或其次级代谢产物具有惰性保护层。惰性保护层可以包括任何合适的聚合物。

生物防治组合物还可以包括附加的化合物。附加的化合物可以是载体、表面活性剂、润湿剂、渗透剂、乳化剂、铺展剂、粘着剂、稳定剂、营养剂、粘合剂、干燥剂、增稠剂、分散剂、uv保护剂或其组合。载体可以是液体载体、矿物载体或有机载体。液体载体的实例包括但不限于植物油和水。矿物载体的实例包括但不限于高岭土或硅藻土。有机载体的实例包括但不限于谷物粉。表面活性剂可以是阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂或非离子表面活性剂。表面活性剂可以是吐温20或吐温80。润湿剂可以包括聚氧乙烯酯、乙氧基硫酸盐，或其衍生物。在一些情况下，将润湿剂与非离子表面活性剂混合。渗透剂可以包括碳氢化合物。铺展剂可以包括脂肪酸、胶乳、脂肪醇、作物油(例如，棉籽油)或无机油。粘着剂可以包括乳化聚乙烯、聚合树脂、脂肪酸、石油馏分或预糊化玉米粉。油可以是椰子油、棕榈油、蓖麻油或羊毛脂。稳定剂可以是乳糖或苯甲酸钠。营养剂可以是糖蜜或蛋白胨。粘合剂可以是阿拉伯树胶或羧甲基纤维素。干燥剂可以是硅胶或无水盐。增稠剂可以包括聚丙烯酰胺、聚乙烯聚合物、多糖、黄原胶或植物油。分散剂可以是微晶纤维素。uv保护剂可以是氧苯酮、荧光增白剂blankophorbbh或木质素。

生物防治组合物还可以包括吡啶二羧酸。

至少一种微生物可以包括有效量的从液体培养物中分离和纯化的经分离和纯化的微生物。来自液体培养物的至少一种微生物可以经风干、冷冻干燥、喷雾干燥或流化床干燥以产生干燥制剂。干燥制剂可以在液体中重构以产生液体制剂。

生物防治组合物可以被配制使得至少一种微生物在被施用/或递送至目标生境(例如土壤、植物、种子和/或农产品)后可以被复制。

生物防治组合物可以具有至少一周、一个月、六个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年或至少五年的贮存期限。贮存期限可以指示生物防治组合物保持其抗真菌特性的至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％的时间长度。生物防治组合物可以在室温下、在4℃或4℃以下、在0℃或0℃以下或者在-20℃或-20℃以下储存。

生物防治组合物可以包含孢子。含有孢子的组合物可以通过本文所述的方法施用。含有孢子的组合物可以延长生物防治组合物的贮存期限。含有孢子的组合物可以在目标生境的低ph或低温下存活。例如，含孢子的组合物可以在较冷的温度(例如，低于10℃)下施用至土壤，并且可以对于在较高温度(例如，20℃)下种植的种子具有抗真菌特性。孢子可以变成营养细胞，使它们具有营养细胞的任何优点。

生物防治组合物可以包含营养细胞。含有营养细胞的组合物可以通过本文所述的方法施用。营养细胞可以增殖并提高组合物的功效。例如，生物防治组合物中的营养细胞可以在施用后增殖，从而增加暴露于生物防治组合物的植物的表面积。在另一实例中，生物防治组合物中的营养细胞可以在施用后增殖，从而增加生物防治组合物存活的时间量，并因此延长生物防治组合物具有功效的时间。营养细胞可以增殖并与真菌病原体竞争营养。营养细胞可以主动地产生一种或多种具有抗真菌特性的次级代谢产物。营养细胞可以变成孢子，使它们具有孢子的任何优点。

生物防治组合物可以具有抗真菌活性，诸如预防真菌病原体的生长或者减少真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长。生物防治组合物可以预防真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长至少1天、至少2天、至少3天、至少4天或至少5天。生物防治组合物可以预防真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天或至少10天。生物防治组合物可以预防真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长超过10天。

相对于真菌病原体在未暴露于生物防治组合物的植物、种子、花或其农产品的对照上的生长，生物防治组合物可以减少真菌病原体在植物、种子或其农产品上的生长。对照可以是未向其施用抗真菌剂的植物、种子或其农产品，或者可以是已经向其施用市售抗真菌剂的植物、种子、花或其农产品。市售抗真菌剂的实例包括但不限于枯草芽孢杆菌菌株qst713、枯草芽孢杆菌菌株gb02、枯草芽孢杆菌菌株mbi600、短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)菌株gb34(yieldshield)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)菌株sb3086。生物防治组合物可以减少真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长至少1天、至少2天、至少3天、至少4天或至少5天。生物防治组合物可以减少真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天或至少10天。生物防治组合物可以减少真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长超过10天。相对于真菌病原体在对照上的生长，生物防治组合物可以减少真菌病原体的生长至少25％。相对于真菌病原体在对照上的生长，生物防治组合物可以减少真菌病原体的生长至少60％。相对于真菌病原体在对照上的生长，生物防治组合物可以减少真菌病原体的生长至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。

真菌病原体可以是属于以下属的真菌病原体：白锈属(albugo)、链格孢属、丝囊霉属(aphanomyces)、蜜环菌属(armillaria)、曲霉菌属(aspergillus)、葡萄孢属、球二孢属(botrydiplodia)、葡萄孢盘菌属(botrytinia)、盘霜霉属(bremia)、尾孢属(cercospora)、小尾孢属(cercosporella)、枝孢属(cladosporium)、炭疽菌属(colletotrichum)、暗双孢属(cordana)、棒孢属(corynespora)、柱孢属(cylindrocarpon)、daktulosphaira、亚隔孢壳属(didymella)、痂囊腔菌属(elsinoe)、白粉菌属(erysiphe)、弯孢壳属(eutypa)、镰刀菌属(fusarium)、灵芝属(ganoderma)、球座菌属(guignardia)、裸双胞锈菌属(gymnoconia)、长蠕孢属(helminthosporium)、小球腔菌属(leptosphaeria)、内丝白粉菌属(leveillula)、壳球孢属(macrophomina)、叉丝壳属(microsphaera)、链核盘菌属(monolinia)、球腔菌属(mycosphaerella)、拟粉孢霉属(oidopsis)、钉孢属(passalora)、霜霉属(peronospora)、拟茎点霉属(phomopsis)、疫霉属(phytophthora)、霜霉属(peronospora)、茎点霉属(phoma)、根肿菌属(plasmodiophora)、轴霜霉属(plasmopara)、叉丝单囊壳属(podosphaera)、蛇孢霉属(polyscytalum)、假尾孢属(pseudocercospora)、柄锈菌属(puccinia)、膨痂锈菌属(pucciniastrum)、腐霉菌属、青枯菌属(ralstonia)、柱隔孢属(ramularia)、丝核菌属(rhizoctonia)、根霉菌属、壳针孢属(septoria)、核盘菌属(sclerotinia)、小核菌属(sclerotium)、单囊壳属(sphaerotheca)、痂圆孢属(sphaceloma)、粉痂菌属(spongospora)、匍柄霉属(stemphylium)、瓶菌属(synchytrium)、根串珠霉属(thielaviopsis)、钩丝壳属(uncinula)、单孢锈菌属(uromyces)或轮枝菌属(verticillium)。真菌病原体可以是白锈菌、西方白锈、烟草赤星病菌、瓜链格孢、胡萝卜链格孢、茄链格孢、细链格孢、细极链格孢、番茄链格孢、根腐丝囊霉、萝卜丝囊霉、蜜环菌、botrydiatheobromae、灰葡萄孢、富克葡萄孢盘菌、莴苣盘霜霉、甜菜生尾孢、黑莓小尾孢、多主枝孢、尖孢炭疽菌、胶孢炭疽菌、菜豆炭疽菌、香蕉炭疽菌、白蜡树炭疽菌、香蕉暗双孢、多主棒孢、葡萄根瘤蚜、泻根亚隔孢壳、痂囊腔菌、芒果痂囊腔菌、覆盆子痂囊腔菌、菊科白粉菌、葡萄白粉菌、葡萄藤猝倒病菌、禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、茄镰刀菌、狭长孢灵芝、葡萄球座菌、悬钩子裸双孢锈菌、茄长蠕孢、盾壳霉小球腔菌、油菜小球腔菌、鞑靼内丝白粉菌、菜豆壳球孢、桤叉丝壳、果产链核盘菌、蓝莓干枯病菌、角球腔菌、芸苔球腔菌、草莓球腔菌、斐济球腔菌、鞑靼拟粉孢、黄钉孢、霜霉菌、粉霜霉、短小茎点霉、昏暗拟茎点霉、牛痘拟茎点霉、葡萄拟茎点霉、辣椒疫霉、红腐疫霉、致病疫霉、寄生疫霉、葡萄生轴霜霉、甘蓝根肿菌、斑点单囊壳、马铃薯皮斑病菌、葡萄假尾孢、葱柄锈菌、高粱柄锈菌、牛痘膨痂锈菌、德巴利腐霉、腐霉沟、终极腐霉、茄科青枯菌、厚环柱隔孢、茄丝核菌、少根根霉、匍枝根霉、小核盘菌、核盘菌、白腐小核菌、齐整小核菌、小核盘菌、核盘菌、芹菜生壳针孢、莴苣壳针孢、番茄壳针孢、欧芹壳针孢、鳄梨痂圆孢、斑点单囊壳、马铃薯粉痂菌、囊状匍柄霉、内生瓶菌、根串珠霉、葡萄钩丝壳、疣顶单孢锈菌、蓼单孢锈菌、黑白轮枝菌、大丽轮枝菌、可可轮枝菌或其组合。真菌病原体可以是灰葡萄孢。真菌病原体可以是白蜡树炭疽菌。真菌病原体可以是葡萄白粉菌。真菌病原体可以是粉霜霉。真菌病原体可以是斑点单囊壳。真菌病原体可以是蓝莓干枯病菌。真菌病原体可以是高粱柄锈菌。真菌病原体可以是引起白粉病的真菌病原体。真菌病原体可以是引起霜霉病的真菌病原体。真菌病原体可以是引起僵果的真菌病原体。真菌病原体可以是引起玉米锈病的真菌病原体。

植物、花、种子或其农产品可以是扁桃、杏、苹果、朝鲜蓟、香蕉、大麦、甜菜、黑莓、蓝莓、西兰花、抱子甘蓝、卷心菜、大麻、辣椒、胡萝卜、芹菜、莙荙菜、樱桃、柑橘、玉米、葫芦、海枣、无花果、大蒜、葡萄、香草、香料、羽衣甘蓝、莴苣、油棕、橄榄、洋葱、豌豆、梨、桃、花生、木瓜、欧防风、美洲山核桃、柿子、李子、石榴、马铃薯、榅桲、小萝卜、覆盆子、玫瑰、水稻、黑刺李、高粱、大豆、菠菜、草莓、甘薯、烟草、番茄、芜菁、核桃或小麦的植物、花、种子或其农产品。植物、种子、花或其农产品可以是来自蔷薇科的植物或其农产品。来自蔷薇科的植物、花、种子或其农产品可以来自悬钩子属(诸如覆盆子或黑莓)、草莓属(诸如草莓)、梨属(诸如梨)、榅桲属(诸如榅桲)、李属(诸如扁桃、桃、李子、杏、樱桃或黑刺李)、蔷薇属(诸如玫瑰)或苹果属(诸如苹果)。植物、种子、花或其农产品可以是来自杜鹃花科的植物或其农产品。来自杜鹃花科的植物、种子、花或其农产品可以来自越橘属，诸如蓝莓。植物、种子、花或其农产品可以是来自杜鹃花科的植物或其农产品。来自杜鹃花科的植物、种子、花或其农产品可以来自越橘属，诸如蓝莓。植物、种子、花或其农产品可以是来自葡萄科的植物或其农产品。来自葡萄科的植物、种子、花或其农产品可以来自葡萄属，诸如葡萄。

生物防治组合物的鉴别和分离方法

鉴别和/或选择生物防治组合物的方法可以包括分离培养至少一种微生物或者与多种其他微生物和/或真菌病原体一起培养至少一种微生物。例如，至少一种微生物可以与真菌病原体一起培养，以鉴别至少一种微生物抑制真菌病原体生长的功效。至少一种微生物抑制真菌病原体生长的功效可以通过观察真菌病原体的生长参数来确定。例如，在半固体或固体生长培养基上靠近至少一种微生物处缺乏活真菌病原体可以用于确定高抑制功效。含有至少一种微生物和真菌病原体的液体培养基的光密度可以用于鉴别至少一种微生物的功效。

至少一种微生物可以通过多种方法鉴别。可以对至少一种微生物进行测序反应。测序反应可以鉴别以下序列：16srrna、12srrna、18srrna、28srrna、13srrna和23srrna、内转录间隔区(its)、its1、its2、细胞色素氧化酶i(coi)、细胞色素b或其任何组合。测序反应可以鉴别16srrna序列、its序列或其组合。测序反应可以用于鉴别至少一种微生物的菌种或菌株。

至少一种微生物可能会受到其他微生物的影响。当一起培养时，微生物可能协同表现，使得与单独培养时相比，当一起培养时，抗真菌特性得到改善。例如，当与另一种微生物一起培养时，至少一种微生物可能具有增加的生存能力。当与另一种微生物一起培养时，至少一种微生物可能具有增加的增殖。至少一种微生物可以利用另一种微生物产生的化学物质或代谢产物。至少一种微生物可以直接与另一种微生物相互作用。例如，至少一种微生物与另一种微生物可以形成生物膜或多细胞结构。当与另一种微生物一起培养时，至少一种微生物可以产生和/或分泌增加量的次级代谢产物。例如，至少一种微生物可以产生中间代谢产物，其又被另一种微生物加工，产生次级代谢产物。本文其他地方公开的方法可用于鉴定可受益于与另一种微生物一起培养的微生物，以及鉴定包含第一微生物和第二微生物的生物防治组合物，其中第二微生物与第一微生物不相同。

在一些情况下，至少一种微生物可以受环境条件影响。至少一种微生物可以在特定的ph下生长或产生次级代谢产物。例如，至少一种微生物生长的ph可以是3.0、4.0、5.0、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、9.0、10.0或更高的ph。例如，至少一种微生物生长的ph可以是3.0、4.0、5.0、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、9.0、10.0或更低的ph。至少一种微生物可以在盐的存在下生长或产生次级代谢产物。盐可以是缓冲盐。至少一种微生物可以在糖或碳水化合物的存在下生长或产生次级代谢产物。糖或碳水化合物可以是葡萄糖或甘油。

可以使用多种培养基或底物培养生物防治组合物。可以是琼脂培养皿上培养至少一种微生物。可以在半固体琼脂培养皿上培养至少一种微生物。可以在液体培养基中培养至少一种微生物。

微生物聚生体的选择

可以使用用于鉴定或选择包含微生物聚生体的生物防治组合物的方法。例如，可以使用如美国专利公开号20180127796中公开的方法用于鉴定和选择微生物聚生体。在一些情况下，多种微生物可以一起生长。在一些情况下，所述方法可以包括稀释样品以形成多个稀释物，其中多个稀释物中的稀释物包括多种微生物的子集。稀释物可以生成多个亚组，其中使多种微生物的不同微生物相互作用。可以对多种微生物的子集进行培养，使得微生物可以增殖。可以对子集进行测序反应，使得可以获得微生物的序列。从测序反应中，可以获得菌种、菌株或其他分类学信息。鉴定特定微生物的序列在本文其他地方讨论。子集可以经受不同的培养时间，使得可以在不同的时间进行测序反应，以监测特定菌种、菌株或其他分类学类别的存在和/或相对丰度。通过观测特定菌种、菌株或其它分类学类别的存在和/或相对丰度的变化，可以确定多种微生物之间的相互作用。例如，与不和第二微生物一起培养时的相对丰度相比，第一微生物与第二微生物一起培养时可能具有更高的相对丰度。在该实例中，第一微生物可能与第二微生物相互作用使得第一微生物的总体生存能力提高。可以各自对多个稀释物进行测序反应，使得可以鉴定每个稀释物的微生物，并且可允许多重、高通量方法。

可以稀释多种微生物，使得多种微生物的子集一起生长。在一些情况下，可以进行系列稀释多种微生物以形成样品的多个系列稀释物。样品的多个系列稀释物中的微生物可能是由于分散或偶然性造成的。在不同的实施方案中，多个系列稀释物可以是不同的。在一些实施方案中，样品的多个系列稀释物可以包括或者是约1:10、1:100、1:1000、1:10000、1:100000、1:1000000、1:10000000、1:100000000、1:1000000000或者这些值中的任何两个之间的数值或范围的样品稀释物。在一些实施方案中，样品的多个系列稀释物可以包括至少或至多1:10、1:100、1:1000、1:10000、1:100000、1:1000000、1:10000000、1:100000000或1:1000000000的样品稀释物。例如，可以使用例如缓冲液将样品稀释10倍形成1:10样品稀释物。可以将1:10样品稀释物稀释10倍形成1:100样品稀释物。多个系列稀释物可以包括1:10样品稀释物、1:100样品稀释物以及类似地制备的其他样品稀释物。作为另一实例，可以使用例如缓冲液将样品稀释10倍形成1:10样品稀释物。可以将样品稀释100倍形成1:100样品稀释物。多个系列稀释物可以包括1:10样品稀释物、1:100样品稀释物以及类似地制备的其他样品稀释物。

在一些实施方案中，在第一培养条件下培养多个样品稀释物包括在第一培养条件下以多个持续时间培养多个样品稀释物，持续时间可以在小至一分钟、多至一年的范围内变化。

可以对多种微生物进行测序反应，并且可以鉴定特定的微生物。在培养亚组持续一段时间后，亚组中每种微生物的总百分比表示可以从培养开始时的百分比改变。例如，在培养的不同时期之后，在其他微生物中保持存活的微生物可以表明培养物的微生物之间的共生关系或相互作用，并且这些微生物可以形成微生物聚生体。可以通过与本文其他地方所述的用于鉴定至少一种微生物的功效的方法类似的方式测试微生物聚生体抑制真菌病原体生长的功效。

特定微生物的分离也可用于本文其他地方所述的方法或组合物。例如，可以对多种微生物进行系列稀释，使得可以分离出特定微生物的菌落。可以各自在液体、半固体或固体培养基中培养系列稀释物。在诸如琼脂平板的半固体或固体培养基上，多种微生物可以形成菌落。菌落能够很好地分散，因此菌落可以包含单个菌株或微生物菌种。也可以使用诸如离心法的物理分离方法来进行特定微生物的分离。例如，可以在液体培养基中培养多种微生物并离心，从而将微生物从培养物中分离。也可以使用特定的生长条件分离特定的微生物。例如，当在厌氧条件下培养时，特定的微生物与另一种微生物相比可能具有更高的生存能力。当在富含特定营养物的培养基中培养时，特定的微生物与另一种微生物相比可能具有高的生存能力。

用于预防或减少食物腐烂和食物腐败的方法在收获前使用生物防治组合物处理植物、种子、花或其农产品

预防或减少真菌病原体在植物、种子或其农产品上生长的方法可以包括在收获前向植物、种子、花或农产品施用包含本文所述的至少一种微生物或其一种或多种次级代谢产物以及载体的生物防治组合物。收获农产品可以指从植物的剩余部分除去植物的可食用部分，或者可以指除去整个植物，随后除去可食用部分。

在收获前施用生物防治组合物可以包括使用生物防治组合物撒粉、注入、喷涂或刷涂植物、种子或其农产品。施用生物防治组合物可以包括将生物防治组合物添加至滴线、灌溉系统、化学灌溉系统、喷雾剂或浸剂。在一些情况下，将生物防治组合物施用至植物的根、植物的种子、植物的叶子、植物周围的土壤或者植物的可食用部分(其在本文中也称为植物的农产品)。

所述方法还可以包括向植物施用肥料、除草剂、农药、其他生物防治剂或其组合。在一些情况下，肥料、除草剂、农药或其他生物防治物在生物防治组合物之前、在生物防治组合物之后或者与生物防治组合物同时施用。

预防或减少真菌病原体生长的方法可以包括向种子施用包含如本文所述的至少一种微生物或其次级代谢产物以及载体的生物防治组合物。可以在种植前、种植期间或种植后发芽前向植物的种子施用生物防治组合物。例如，可以在种植前将生物组合物施用至种子的表面。在一些实施方案中，在种植前进行的种子处理可以包括向生物防治组合物添加着色剂或染料、载体、粘合剂、粘着剂、消泡剂、润滑剂、营养剂或其组合。

预防或减少真菌病原体生长的方法可以包括向土壤施用包含本文所述的至少一种微生物或其次级代谢产物以及载体的生物防治组合物。可以在将种子播种到土壤之前、之后或期间，或者在将植物转移到新的地点之前，将生物防治组合物施用至土壤。在一个实例中，在种植之前向土壤添加土壤改良剂，其中土壤改良剂使得植物的生长得到改善，并且其中土壤改良剂包含生物防治组合物。在一些情况下，土壤改良剂还包含肥料。

预防或减少真菌病原体生长的方法可以包括向土壤施用包含本文所述的至少一种微生物或其次级代谢产物以及载体的生物防治组合物。可以将生物防治组合物直接施用至根。直接向植物的根施用的实例可以包括将根浸入包含生物防治组合物的溶液中。可以将生物防治组合物间接施用至根。间接向植物的根施用的实例可以包括将生物防治组合物喷涂在植物基部附近，其中生物防治组合物渗透土壤到达根部。

在收获后使用生物防治组合物处理其农产品

预防或减少真菌病原体在农产品上生长的方法可以包括在收获农产品之前或之后向农产品施用包含本文所述的至少一种微生物或其次级代谢产物以及载体的生物防治组合物。

在收获之前或之后施用生物防治组合物可以包括使用生物防治组合物撒粉、浸渍、滚动、注入、擦抹、喷涂或刷涂植物的农产品。可以在收获前立即或收获后立即或者在收获的1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周内将生物防治组合物施用至农产品。在一些情况下，通过进行收获的实体、在收获之前或收获后立即处理农产品的过程中、通过包装农产品的实体、通过运输农产品的实体或者通过商业展示待售农产品的实体或消费者来施用生物防治组合物。

在收获后施用生物防治组合物还可以包括将生物防治组合物结合到收获后处理农产品的过程中。可以在收获后立即处理农产品，例如在一次或多次清洗中。一次或多次清洗可包括使用其中已加入漂白剂(氯)和/或碳酸氢钠的水或者臭氧化水。还可以使用油、树脂或者结构基质或化学基质处理农产品。可以将生物防治组合物与油、树脂或者结构基质或化学基质混合用于施用。可以在干燥农产品之间或之后处理农产品。例如，可将生物防治组合物添加到用于涂覆产品的蜡、阿拉伯树胶或其他涂料中。可以在该过程的任何时候添加生物防治组合物，包括在清洗的一步中，作为新清洗的一部分，或者与蜡、阿拉伯树胶或农产品的其他涂料混合。

使用生物防治组合物处理包装材料

预防或减少真菌病原体在农产品上生长的方法可以包括向用于运输或储存农产品的包装材料施用包含本文所述的至少一种微生物或其次级代谢产物以及载体的生物防治组合物。

包装材料可以包括：聚对苯二甲酸乙二醇酯(pet)、模塑纤维、定向聚苯乙烯(ops)、聚苯乙烯(ps)泡沫、聚丙烯(pp)或其组合。包装材料可以包括纸板、实心板、聚苯乙烯泡沫或模制纸浆。包装材料可以包括基底，诸如纤维素。包装材料可以是水平流(hffs)包装、垂直流(vffs)包装、热成型包装、密封托盘或拉伸膜。热成型包装可以是蛤壳包装。包装材料可以是薄木片制扁篮、托盘、篮子或蛤壳。

用生物防治组合物处理的包装材料可以是插入物。插入物可以是垫、片材或毯子。插入物可以放置在薄木片制扁篮、托盘、篮子或蛤壳之中或之上。插入物可以包含纤维素或纤维素衍生物。插入物可以包含至少一层微孔聚合物(诸如聚乙烯或聚丙烯)和至少一层超吸收性聚合物。在一些情况下，插入物可以包括外层和内层。内层可以是吸水层。内层可以包括羧甲基纤维素、纤维素醚、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、葡萄糖、明胶、果胶或其组合。外层可以是透水层。

向包装材料施用生物防治组合物可以包括用生物防治组合物清洗、喷涂或浸渍包装材料。

本文所用的术语仅出于描述特定情况的目的，并不旨在进行限制。除了本领域技术人员理解这些术语之外，讨论以下术语以说明如在本说明书中使用的术语的含义。如本文和所附权利要求书中所用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数对象。还应注意，权利要求书可以被修改成排除任何可选元素。因此，该陈述旨在用作使用与权利要求元素的叙述有关的诸如“单独地”、“仅”的排他性术语或使用“否定”限制的先行基础。

本文以在数值之前加上“约”提供某些范围。术语“约”在本文中用于为其之后的确切数字以及与该术语之后的数字接近或近似的数字提供文字支持。在确定数字是否接近或近似于具体列举的数字时，接近或近似的未列举的数字可以是上下文中提供的与具体列举的数字的大致相等的数字。在提供数值范围的情况下，应当理解，除非上下文另外明确指出，否则在该范围的上限和下限之间的每个中间值至下限单位的十分之一，以及在所述范围内的任何其他陈述值或中间值，都涵盖在本文所述的方法和组合物内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在较小的范围内，并且也涵盖在本文所述的方法和组合物内，受所述范围中的任何具体排除的限值限制。当所述范围包括一个或两个限值时，排除那些包括的限值中的一个或两个的范围也包括在本文所述的方法和组合物中。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本文所述的方法和组合物所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文所述的那些类似或等同的任何方法和材料也可用于实践或测试本文所述的方法和组合物，但现在描述代表性的示例性方法和材料。

实施例

实施例1：筛选抗真菌活性的微生物

筛选微生物预防真菌病害大丽轮枝菌和尖孢镰刀菌生长的能力。在一级筛选中十四个候选微生物被鉴定为具有活性，该筛选将在真菌菌苔上形成透明区域(例如，参见图3，关于鉴定葡萄汁有孢汉逊酵母抑制尖孢镰刀菌)。然后在二级试验中筛选这十四种候选微生物，该试验旨在通过使用半固体琼脂来模拟结构化土壤环境。在该试验中，将未处理的真菌的生长设定为100％，并测定相对于未处理真菌的生长的减少。将含有枯草芽孢杆菌qst713菌株活性成分的市售产品serenade用作对照，其使得尖孢镰刀菌的生长减少～25％，并使得大丽轮枝菌的生长减少>99％。在这些候选物中，有10种候选物减少尖孢镰刀菌生长的幅度超过有11种候选物减少大丽轮枝菌生长的幅度处于与serenade难以区分的水平(图1)。

测试的候选菌株以及最接近的已鉴定微生物的菌种或属见于表3。

表3.与相比测试抗真菌活性的候选微生物菌株

实施例2：解淀粉芽孢杆菌(菌株28b；bc8)上清液对覆盆子的抗真菌活性

测定了解淀粉芽孢杆菌的分离菌株(菌株28b；bc8)的培养物的上清液针对覆盆子上的灰葡萄孢的抗真菌活性。120小时后，施用解淀粉芽孢杆菌菌株上清液的覆盆子显示与阴性对照覆盆子(未感染灰葡萄孢)相近的真菌生长，真菌生长覆盖小于覆盆子表面积的5％。相比之下，120小时后，阳性对照覆盆子(已经感染灰葡萄孢)显示约90％的表面积被真菌生长覆盖(图4；图5a-图5c)。

实施例3：bc8对抗蓝莓作物上由灰葡萄孢和白蜡树炭疽菌引发的枯萎病的功效评估。

评估了bc8对抗蓝莓作物中由灰葡萄孢和白蜡树炭疽菌引发的花腐病的功效。用bc8或对照处理物处理蓝莓灌木。作为对照处理，灌木不予处理或者用lifegard(certis；活性成分：蕈状芽胞杆菌(bacillusmycoides))、stargus(marrone；活性成分：解淀粉芽孢杆菌菌株f727)和nufilm(fertrell、萜烯聚合物和乳化剂的混合物)的组合，或者bravoweatherstik(syngenta；活性成分：百菌清(四氯间苯二甲腈)54％)、captevate(arysta；活性成分：环酰菌胺、克菌丹)和pristine(basf；活性成分：吡唑醚菌酯、啶酰菌胺(bosclid))的连续施用进行处理。所有处理环节也接受标准商业生育力和杀虫剂项目。将处理产品以0.9l/处理物或根据标签说明书混合于75加仑水量中并使用喷雾装置以规则的间隔施用于植物。在不同的生长阶段处理灌木，包括绿尖初期(egt)、绿尖晚期(lgt)、粉红花蕾期(pb)、开花期(blm)、花瓣脱落期(pf)、绿色果实期(grf)、10％蓝色果实期(blf)。根据种植者标准规范种植和维护灌木。

通过计数每株蓝莓灌木的花腐病数量来评估灰葡萄孢感染。每个处理以随机样地设计模式重复进行四次。

结果如图7所示，表示为每株灌木上灰葡萄孢引发的花腐病的发生率。与未处理的对照相比，bc8有效降低约55％的花腐病发生率。