一种优化的脐带血造血干细胞程控降温方法与流程

文档序号:22167901发布日期:2020-09-11 20:46阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种优化的脐带血造血干细胞程控降温方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

s1,采集后的脐带血在24小时内进行制备分离,去除红细胞和血浆,保留富含造血干细胞的有核细胞成分,为脐带血标本;

s2,将所述脐带血标本和冷冻保护剂均置于4℃下预冷至少10分钟,再使用微量注射泵将冷冻保护剂加入到s1得到的脐带血标本中,添加过程中脐带血标本置于0-4℃的低温环境下,添加时长控制在10-15分钟,边加边使用摇床混匀;

s3,将程控降温仪箱体提前预冷至3℃,将添加了冷冻保护剂的脐带血标本放入金属保护盒中,然后再放入程控降温仪,开始程控降温,程控降温的程序设置如下:

s31,箱体温度3℃,等待3分钟;

s32,箱体温度-1℃/分钟至样本温度-7℃或箱体温度-11℃;

s33,箱体温度-50℃/分钟至箱体温度-50℃;

s34,箱体温度15℃/分钟至箱体温度-25℃;

s35,箱体温度-25℃等待3分钟;

s36,箱体温度-1℃/分钟至样本温度-50℃或箱体温度-60℃;

s37,箱体温度-10℃/分钟至样本温度-90℃或箱体温度-120℃;

s38,结束;

s4,经上述程控降温后的脐带血标本放入液氮中进行长期储存。

2.根据权利要求1所述的优化的脐带血造血干细胞程控降温方法,其特征在于,所述冷冻保护剂为二甲基亚砜和右旋糖苷40的混合物,且冷冻保护剂的添加体积为脐带血标本体积的1/4。

3.根据权利要求2所述的优化的脐带血造血干细胞程控降温方法,其特征在于,所述冷冻保护剂中二甲基亚砜的体积浓度为50%,右旋糖苷40的质量浓度为5%。


技术总结
本发明提供了一种优化的脐带血造血干细胞程控降温方法,对采集后的脐带血进行制备分离并在严格控制下向其中加入冷冻保护剂,程控降温仪箱体提前预冷至3℃,降温程序:箱体3℃,3min;以1℃/min的速度降至标本温度‑7℃或箱体‑11℃;以50℃/min的速度降至箱体‑50℃;以15℃/min的速度升至箱体‑25℃,并保持‑25℃等待3min;以1℃/min的速度降至标本‑50℃或箱体‑60℃;以10℃/min的速度降至标本‑90℃或箱体‑120℃,转入液氮长期储存。本发明对冷冻保护剂的添加过程和程控降温起始温度进行有效控制,并对脐带血标本在由液态冷冻为固态时的散热和温度回升进行更为精准的主动干预和控制,避免了冷冻保护剂对细胞的损伤,能更好的保持脐带血造血干/祖细胞解冻后的增殖能力。

技术研发人员:魏晓飞;李红莉;张昱
受保护的技术使用者:北京佳宸弘生物技术有限公司
技术研发日:2020.06.11
技术公布日:2020.09.11
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