安全剂改善ACC酶耐受性高粱作物对除草剂的耐受性的用途的制作方法

安全剂改善acc酶耐受性高粱作物对除草剂的耐受性的用途
1.本技术要求于2020年6月22日提交的美国临时申请号63/042,019的利益，其全部内容特此通过引用并入本文。
2.贯穿本技术，引用了不同的出版物。这些文件的披露内容特此通过引用以其整体并入本技术中，以便更全面地描述本发明所属领域的状态。
技术领域
3.本发明提供了用于控制acc酶耐受性高粱作物附近的不希望的植被的方法。


背景技术：

4.控制不希望的植被在实现高作物效率中是极其重要的。然而，在许多情况中，有效根治一系列杂草的除草剂也会损害作物。为保护作物免受除草剂的负面影响和增加作物对除草剂的耐受性，经常使用安全剂。
5.安全剂通常通过诱导编码参与除草剂解毒的酶的基因的表达而起作用，这导致除草剂更快降解，使其不会达到有害浓度。各种化学品被认为是不同除草剂和作物的安全剂。安全剂的实例是双苯噁唑酸、解草酯、ad-67、解草嗪和解草啶及其酯。然而，安全剂也可能会降低杂草对除草剂的敏感性。因此，在有效控制不希望的杂草的同时保护希望的作物免受除草剂的有害影响之间找到正确平衡是一项具有挑战性的任务。
6.芳氧基苯氧基丙酸酯(fop)是一类通过抑制乙酰辅酶a羧化酶(acc酶)发挥作用的除草剂，其导致脂肪酸生物合成的抑制。fop(即抑制acc酶的除草剂)的实例包括炔草酯、氰氟草酯、禾草灵、氟禾草灵、吡氟氯禾灵、喔草酯((r)-2-[[(1-甲基亚乙基)氨基]氧基]乙基2-[4-[(6-氯-2-喹喔啉基)氧基]苯氧基]丙酸酯，由p.f.bocion等人首次报道(proc.1987br.crop prot.conf.-weeds[1987年布莱顿作物保护会议录-杂草],1,55))和喹禾灵((2-异亚丙基氨基-氧基乙基(r)-2-[4-(6-氯喹喔啉-2-基氧基)苯氧基]丙酸酯，由g.sakata等人首次报道(proc.10th int.congr.plant prot.[第十届国际植物保护会议录]1983,1,315))。
[0007]
禾本科杂草的苗后控制选择有限，高粱属物种杂草(约翰逊草(johnsongrass)和落叶实心草(shattercane))很常见，并且基本耐受所有籽实高粱除草剂。高粱杂草与高粱作物竞争养分、水和空间。目前高粱的杂草控制方法既昂贵又耗时，而且通常不能导致禾本科杂草的完全根除。苗前除草剂提供了对草的临时控制，但是经常有晚季逃逸。并且，再次地，既不能控制落叶实心草也不能控制约翰逊草。不完全控制是有问题的，因为即使少量的残留杂草也能产生足够的种子来恢复原始土壤种子库的种群水平。
[0008]
需要有效和高选择性地控制高粱杂草而不会损害期望的商用高粱。因此，需要找到一种有效控制高粱杂草而不会显著损害高粱作物的除草剂混合物。


技术实现要素：

[0009]
本发明提供了一种控制acc酶耐受性高粱作物附近的不希望的植被的方法，该方
法包括将a)有效量的抑制acc酶的除草剂；和b)有效量的双苯噁唑酸、其酯或盐(也称为“安全剂”或“除草剂安全剂”)施用于该不希望的植被的场所，以有效控制该不希望的植被。
[0010]
本发明还提供了一种降低抑制acc酶的除草剂对acc酶耐受性高粱作物的植物毒害作用的方法，其中该方法包括将有效量的双苯噁唑酸、其酯或盐施用于该acc酶耐受性高粱作物，从而与该抑制acc酶的除草剂对未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物的植物毒害作用相比，有效减少对该acc酶耐受性高粱作物的植物毒害作用。
[0011]
本发明还提供了一种增加acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂的耐受性的方法，该方法包括将有效量的双苯噁唑酸、其酯或盐施用于acc酶耐受性高粱作物，从而与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物的耐受性相比，增加acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂的耐受性。
[0012]
本发明还提供了一种用于减少抑制acc酶的除草剂在acc酶耐受性高粱作物中的除草剂作用的方法，该方法包括将双苯噁唑酸、其酯或盐施用于该acc酶耐受性高粱作物的植物和/或种子，从而与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物中的除草剂作用相比，减少该acc酶耐受性高粱作物中的除草剂作用。
[0013]
本发明还提供了一种用于增加acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂的耐受性的方法，其中将该acc酶耐受性高粱作物用双苯噁唑酸、其酯或盐处理。
[0014]
本发明还提供了一种对抑制acc酶的除草剂的耐受性增加的acc酶耐受性高粱作物，其中该高粱作物是用双苯噁唑酸、其酯或盐处理的。
[0015]
本发明还提供了一种对抑制acc酶的除草剂的耐受性增加的acc酶耐受性高粱作物，其可通过用双苯噁唑酸、其酯或盐处理高粱作物来获得。
[0016]
本发明还提供了一种控制acc酶耐受性高粱作物附近的不希望的植被的方法，该方法包括(i)将双苯噁唑酸、其酯或盐施用于acc酶耐受性高粱作物的种子，和(ii)将有效量的抑制acc酶的除草剂施用于不希望的植被的场所，以便有效控制该不希望的植被。
附图说明
[0017]
图1示出了在施用喹禾灵乙酯之后双苯噁唑酸对acc酶耐受性高粱的安全作用。
具体实施方式
[0018]
定义
[0019]
在详细阐述本主题之前，提供本文使用的某些术语的定义可能是有帮助的。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本主题所涉及的领域技术人员通常所理解的相同的含义。
[0020]
如本文使用的，短语“农业上可接受的载剂”表示本领域已知并且接受用于农业或园艺用途的配制品的形成的载剂。
[0021]
如本文使用的，术语“作物”包括提及完整植物、植物器官(例如，叶、茎、细枝、根、干、枝叶、芽、果实等)、植物细胞或植物种子。该术语涵盖植物作物如果实等。该术语还涵盖植物繁殖材料，其可以包括种子和孢子；以及植物结构如鳞茎、球茎、块茎、地下茎(rhizome)、根茎(roots stem)、基部嫩芽(basal shoot)、匍匐枝(stolon)和芽。
[0022]
如本文使用的，术语“acc酶耐受性高粱作物”是指对特定acc酶除草剂具有耐受性
或部分耐受性的高粱作物突变品系。acc酶耐受性高粱作物包括遗传修饰的和非遗传修饰的高粱作物。非遗传修饰的acc酶耐受性高粱作物可以通过技术(如选择)获得。
[0023]
acc酶耐受性高粱作物是指对一种或多种抑制乙酰辅酶a羧化酶的除草剂具有抗性的任何高粱种类。适合于本发明方法的高粱种类的非限制性列表在以染色质公司(chromatin,inc.)名义的wo2018/222715的第5至8页和第23至26页中披露。优选地，用于本发明方法中的acc酶耐受性高粱植物是其中编码acc蛋白质ct结构域的核苷酸序列包含wo 2018/222715中披露的以下序列之一的植物：本文中由seq id no:1(wo 2018/222715的seq id no:2)表示的核苷酸序列；本文中由seq id no:2(wo 2018/222715的seq id no:3)表示的核苷酸序列；本文中由seq id no:3(wo 2018/222715的seq id no:4)表示的核苷酸序列；本文中由seq id no:4(wo2018/222715的seq id no:5)表示的核苷酸序列；seq id no:1的核苷酸序列、seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4的核苷酸序列；seq id no:2的核苷酸序列及以下中的一种：seq id no:3或seq id no:4的核苷酸序列；seq id no:3和seq id no:4的核苷酸序列；seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3的核苷酸序列；seq id no:1、seq id no:2和seq id no:4的核苷酸序列；seq id no:1、seq id no:3和seq id no:4的核苷酸序列；或seq id no:2、seq id no:3和seq id no:4的核苷酸序列。重新编号的序列如wo2018/222715所披露。
[0024]
在本发明的另一实施例中，适合于本发明方法的acc酶耐受性高粱作物、其突变体、种子或子代是包含一个或多个高粱acc基因突变的物种，其中该acc基因编码具有包含wo 2018/222715中披露的一个或多个以下突变的ct结构域的高粱乙酰辅酶a蛋白：与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到半胱氨酸的氨基酸取代(w1999c；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:6表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w1999s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:7表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2004处的丙氨酸到缬氨酸的氨基酸取代(a2004v；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:8表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2027处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w2027s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:9表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到半胱氨酸的氨基酸取代(w1999c；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:6表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w1999s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:7表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到半胱氨酸的氨基酸取代(w1999c；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:6表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2004处的丙氨酸到缬氨酸的氨基酸取代(a2004v；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:8表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到半胱氨酸的
氨基酸取代(w1999c；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:表6示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2027处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w2027s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:9表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w1999s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:7表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2004处的丙氨酸到缬氨酸的氨基酸取代(a2004v；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:8表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w1999s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:7表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2027处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w2027s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:9表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2004处的丙氨酸到缬氨酸的氨基酸取代(a2004v；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:8表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2027处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w2027s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:9表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到半胱氨酸的氨基酸取代(w1999c；导致ct结构域多肽具有在本文中由seq id no:6表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w1999s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:7表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2004处的丙氨酸到缬氨酸的氨基酸取代(a2004v；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:8表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到半胱氨酸的氨基酸取代(w1999c；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:6表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w1999s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:7表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2027处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w2027s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:9表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置1999处的色氨酸到半胱氨酸的氨基酸取代(w1999c；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:6表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2004处的丙氨酸到缬氨酸的氨基酸取代(a2004v；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:8表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2027处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w2027s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:9表示的序列)，或者与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对
在氨基酸位置1999处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w1999s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:7表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2004处的丙氨酸到缬氨酸的氨基酸取代(a2004v；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:8表示的序列)和与本文中由seq id no:5表示的高粱野生型ct结构域多肽序列的氨基酸序列比对在氨基酸位置2027处的色氨酸到丝氨酸的氨基酸取代(w2027s；导致ct结构域多肽具有本文中由seq id no:9表示的序列)。seq id no:1至4表示的核苷酸序列和seq id no:5至9表示的氨基酸序列如wo 2018/222715中的seq id no:2至5和seq id no:6至10中所披露并且在以下表1中详述。
[0025]
[0026]
[0027]
[0028]
[0029]
[0030]
collection，atcc)。
[0035]
如本文使用的，术语“场所”不仅包括不希望的植被可能已经生长的区域，而且包括不希望的植被还在出苗的区域和耕作中的区域。
[0036]
如本文使用的，术语“苗后”是指将除草剂混合物或组合物施用于已经从土壤中出苗的不希望的植被。术语“苗前”是指在不希望的植被从土壤中出苗之前将除草剂混合物或组合物施用于栖息地、不希望的植被或土壤。
[0037]
如本文使用的，术语“控制不希望的植被”是指干扰不希望的植被的正常生长和发育。控制活动的实例包括但不限于抑制不希望的植被的根生长、抑制不希望的植被的芽生长、抑制不希望的植被的芽出苗、抑制不希望的植被的种子产生或减少不希望的植被的生物量。
[0038]
如本文使用的，术语“有效”当用于描述用于控制不希望的植被的方法时，表示该方法对不希望的植被提供了良好的控制水平而不会显著干扰作物的正常生长和发育。
[0039]
如本文所用，术语“有效量”是指当被吸附、与其接触或感测时足以实现良好控制水平的混合物的量。
[0040]
如本文使用的，术语“表面活性剂”是指赋予乳化性、稳定性、铺展性、润湿性、分散性或其他表面改性特性的任何农业上可接受的材料。
[0041]
如本文使用的，术语“混合物”或“组合”是指但不限于呈任何物理形式的组合，例如共混物、溶液、合金等。
[0042]
如本文使用的，术语“一个(a)”或“一种(an)”如本文所使用包括单数和复数，除非另外特别说明。因此，术语“一个(a)”、“一种(an)”或“至少一个(at least one)”在本技术中可互换使用。
[0043]
如本文使用的，术语“约”，当与数值结合使用时，包括指示值的
±
10％。另外，本文中涉及相同组分或性质的所有范围的端点包括端点，是可独立组合的，并包括所有中间点和范围。应该理解，在提供参数范围的情况下，本发明还提供了该范围内的所有整数及其十等分的数。例如，“0.1-99wt.％”包括0.1wt.％、0.2wt.％、0.3wt.％等直到99wt.％。
[0044]
如本文使用的，术语“低光强度”，当与高粱作物的生长条件结合使用时表示光强度小于300μm/m2/秒。优选地，光强度小于150μm/m2/秒。
[0045]
如本文使用的，术语“高光强度”，当于高粱作物的生长条件结合使用时表示光强度大于700μm/m2/秒。优选地，光强度在800μm/m2/秒至1000μm/m2/秒之间。
[0046]
本发明涉及使用一种或多种安全剂增强acc酶耐受性高粱作物对acc酶除草剂的耐受性，以使得与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物中的除草剂作用相比，acc酶除草剂的施用对acc酶耐受性高粱作物产生较少的植物毒性。优选地，本发明涉及使用一种或多种安全剂以增强acc酶耐受性高粱作物对acc酶除草剂的耐受性，以使得acc酶除草剂的施用将不会显著损害acc酶耐受性高粱作物。
[0047]
本发明的方法可以通过将除草剂混合物施用于acc酶耐受性高粱作物的附近来实施，其中该除草剂混合物包含：a)抑制乙酰辅酶a羧化酶(acc酶)的除草剂；和b)双苯噁唑酸、其酯或盐。
[0048]
抑制acc酶的除草剂可以包括但不限喔草酯、喹禾灵、精喹禾灵、奎禾糠酯、奎禾甲酯和氟禾草灵及其酯衍生物。在一些实施例中，抑制acc酶的除草剂是喔草酯。在一些实施
例中，抑制acc酶的除草剂是喹禾灵。
[0049]
在一些实施例中，acc酶除草剂与除草剂混合物中的双苯噁唑酸、其酯或盐的重量比为1:4至10:1。在一些实施例中，acc酶除草剂与除草剂混合物中的双苯噁唑酸、其酯或盐的重量比为1:4或1:3或1:2或1:1或2:1或3:1或4:1或5:1或6:1或7:1或8:1或9:1或10:1。
[0050]
在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约0.1％至约99％的acc酶除草剂。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约0.1％至约25％的acc酶除草剂。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约25％至约50％的acc酶除草剂。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约50％至约75％的acc酶除草剂。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约75％至约99％的acc酶除草剂。
[0051]
在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约0.1％至约90％的双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约0.1％至约25％的安全剂双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约25％至约50％的双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约50％至约75％的双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，除草剂混合物包含按重量计约75％至约90％的双苯噁唑酸、其酯或盐。
[0052]
在一些实施例中，acc酶耐受性高粱作物具有至少一个赋予对抑制acc酶的除草剂的耐受性或部分耐受性的基因突变。
[0053]
在一些实施例中，acc酶耐受性高粱作物对acc酶具有耐受性，并且双苯噁唑酸、其酯或盐有效增加acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂的耐受性。
[0054]
在一些实施例中，acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂具有耐受性，并且双苯噁唑酸、其酯或盐有效增加acc酶耐受性高粱作物对除草剂混合物中的抑制acc酶的除草剂的耐受性。
[0055]
在一些实施例中，双苯噁唑酸、其酯或盐与acc酶耐受性高粱作物中的突变的组合有效增加acc酶除草剂的ed50。
[0056]
在一些实施例中，双苯噁唑酸、其酯或盐，当施用于acc酶耐受性高粱作物时，有效增加acc酶除草剂的ed50。
[0057]
在一些实施例中，acc酶耐受性高粱作物含有1个、2个或3个或更多个赋予对抑制acc酶的除草剂的耐受性的基因。
[0058]
在一些实施例中，不希望的植被是单子叶植物。根据本发明的施用有效作用的杂草物种的实例是单子叶杂草物种，包括但不限于：燕麦属物种(avena spp.)、看麦娘属物种(alopecurus spp.)、阿披拉草属物种(apera spp.)、臂形草属物种(brachiaria spp.)、雀麦属物种(bromus spp.)、蒺藜草属物种、马唐属物种(digitaria spp.)、黑麦草属物种(lolium spp.)、稗属物种(echinochloa spp.)、黍属物种(panicum spp.)、虉草属物种(phalaris spp.)、早熟禾属物种(poa spp.)、狗尾草属物种(setaria spp.)以及多年生植物中的冰草属物种(agropyron)、狗牙根属物种(cynodon)、白茅属物种(imperata)和高粱属物种。
[0059]
在一些实施例中，环境条件影响acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂的耐受性程度。在一些实施例中，当acc酶耐受性高粱作物在低光强度条件下生长时，与在高光强度条件下生长相比，acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂的耐受性程度降低。
[0060]
在一些实施例中，双苯噁唑酸、其酯或盐有效降低acc酶除草剂对在低光强度下生长的acc酶耐受性高粱作物的植物毒害作用。在一些实施例中，双苯噁唑酸、其酯或盐有效降低acc酶除草剂对在高光强度条件下生长的acc酶耐受性高粱作物的植物毒害作用。
[0061]
在一些实施例中，双苯噁唑酸、其酯或盐有效增加在低光强度条件下生长的acc酶耐受性高粱作物的耐受性。在一些实施例中，双苯噁唑酸、其酯或盐有效增加在高光强度条件下生长的acc酶耐受性高粱作物的耐受性。
[0062]
在一些实施例中，环境条件可以包括但不限于光强度和温度。
[0063]
作物的除草剂耐受程度受其生长和代谢速率影响。
[0064]
例如，在如云或雾等的低光强度条件下和/或在如低于65
°
f等的低温时，作物生长和代谢速率降低，因此作物的除草剂耐受性降低。
[0065]
在一些实施例中，与除草剂对未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物的植物毒害作用相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶除草剂对acc酶耐受性高粱作物的植物毒害作用减少至少10％。在一些实施例中，与除草剂对未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物的植物毒害作用相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶除草剂对acc酶耐受性高粱作物的植物毒害作用减少至少15％。在一些实施例中，与除草剂对未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物的植物毒害作用相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶除草剂对acc酶耐受性高粱作物的植物毒害作用减少至少20％。
[0066]
在一些实施例中，与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物的耐受性相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶耐受性高粱作物对acc酶除草剂的耐受性增加至少10％。在一些实施例中，与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物的耐受性相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶耐受性高粱作物对acc酶除草剂的耐受性增加至少15％、或增加至少25％、或增加至少40％、或增加至少70％。
[0067]
在一些实施例中，与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物中的除草剂作用相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶耐受性高粱作物中的acc酶除草剂作用降低至少10％。在一些实施例中，与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物中的除草剂作用相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶耐受性高粱作物中的acc酶除草剂作用降低至少15％。在一些实施例中，与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物中的除草剂作用相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶耐受性高粱作物中的acc酶除草剂作用降低至少20％。在一些实施例中，与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物中的除草剂作用相比，双苯噁唑酸、其酯或盐有效地使acc酶耐受性高粱作物中的acc酶除草剂作用降低至少70％。
[0068]
本发明的方法可以通过使用包含a)有效量的抑制acc酶的除草剂；和b)双苯噁唑酸、其酯和盐；以及c)至少一种农业上可接受的载剂的除草剂组合物来实施。
[0069]
在一些实施例中，组合物中的acc酶除草剂及双苯噁唑酸、其酯或盐的量为基于组合物的总重量的0.1-99wt.％。在一些实施例中，组合物中的acc酶除草剂及双苯噁唑酸、其酯或盐的量为基于组合物的总重量的0.1-25wt.％。在一些实施例中，组合物中的acc酶除草剂及双苯噁唑酸、其酯或盐的量为基于组合物的总重量的25-50wt.％。在一些实施例中，组合物中的acc酶除草剂及双苯噁唑酸、其酯或盐的量为基于组合物的总重量的50-75wt.％。在一些实施例中，组合物中的acc酶除草剂及双苯噁唑酸、其酯或盐的量为基于组
合物的总重量的75-99wt.％。
[0070]
在一些实施例中，农业上可接受的载剂选自表面活性剂、固体载剂、液体载剂及其组合。
[0071]
合适的表面活性剂的实例包括但不限于非离子型、阴离子型、阳离子型和两性型，如烷氧基化脂肪醇、乙氧基化聚山梨醇酯(例如tween20)、乙氧基化蓖麻油、木素磺酸盐、脂肪酸磺酸酯(例如月桂基磺酸酯)、磷酸酯(如醇烷氧基化物的磷酸酯)、烷基酚烷氧基化物的磷酸酯和苯乙烯基酚乙氧基化物的磷酸酯、磺酸化萘和萘衍生物与甲醛的缩合物、萘或萘磺酸与酚和甲醛的缩合物、烷基芳基磺酸酯、乙氧基化烷基酚和芳基酚、聚乙烯醇、山梨醇酯、碱金属、木质磺酸盐的钠盐、三苯乙烯基酚乙氧基化物磷酸酯、脂族醇乙氧基化物、烷基酚乙氧基化物、环氧乙烷/环氧丙烷嵌段共聚物、接枝共聚物和聚乙烯醇-乙酸乙烯酯共聚物。需要时可使用本领域已知的其他表面活性剂。
[0072]
可用于本发明组合物中的适合液体载体的实例包括但不限于水；芳香族烃，如烷基苯和烷基萘等；醇，如甲醇、环己醇和癸醇；乙二醇；丙二醇；二丙二醇；n,n-二甲基甲酰胺；二甲亚砜；二甲基乙酰胺；n-烷基吡咯烷酮，如n-甲基-2-吡咯烷酮；链烷烃；各种油，如橄榄油、蓖麻油、亚麻籽油、桐油、芝麻油、玉米油、花生油、棉籽油、大豆油、油菜籽油或椰子油；脂肪酸酯；酮，如环己酮、2-庚酮、异佛尔酮和4-羟基-4-甲基-2-戊酮；等等。
[0073]
适用于本发明组合物中的适合固体载剂的实例包括但不限于矿物如硅胶、硅酸盐、滑石、高岭土、云母、白土、石灰石、膨润土、石灰、白垩、红玄武土、芒硝、黄土、粘土、白云石、沸石、硅藻土、碳酸钙、硫酸钙、硫酸镁、氧化镁、碳酸钠和碳酸氢钠以及硫酸钠；土地合成物质；肥料，如硫酸铵、磷酸铵、硝酸铵、脲和植物来源产物，如谷类粉、树皮粉、木粉和坚果壳粉；纤维素粉末；以及其他固体载剂。
[0074]
在一些实施例中，除草剂组合物进一步包含至少一种选自由以下组成的额外组分：润湿剂、消泡剂、粘合剂、中和剂、增稠剂、粘合剂、螯合剂、肥料和抗冻剂。
[0075]
在本发明方法中使用的除草剂组合物可以在使用时制备或者在使用时稀释。本组合物也可以为即用型组合物。
[0076]
在本发明方法中使用的除草剂组合物可以以任何常规形式使用或制备，例如，以双包装形式，或者例如作为可湿性粉剂(wp)、乳液浓缩物(ec)、微乳液浓缩物(mec)、水溶性粉末(sp)、水溶性浓缩物(sl)、悬浮乳液(se)、分散性油悬剂(od)、浓缩乳液(bw)如水包油乳液或油包水乳液、可喷雾溶液或乳液、胶囊悬浮液(cs)、悬浮液浓缩物(sc)、悬浮液浓缩物粉剂(dp)、油混溶性溶液(ol)、呈微颗粒、喷雾颗粒、包衣颗粒和吸收颗粒形式的颗粒剂(gr)、用于土壤施肥或撒播的颗粒、水溶性颗粒(sg)、水分散性颗粒(wdg)、ulv配制品、微胶囊或蜡。这些单独的配制品类型是本领域已知的。
[0077]
用于本发明方法中的组合物也可以配制为种子处理组合物。对于种子处理，组合物可以以下述各种形式配制：用于干种子处理的粉末(ds)、用于干种子处理的凝胶(gf)、用于浆液种子处理的水可分散性粉末(ws)、用于种子处理水溶性粉末(ss)、用于种子处理的溶液(ls)、用于种子处理的乳液(es)、悬浮液浓缩物(sc)、用于种子处理的可流动浓缩物(fs)、胶囊悬浮液(cs)、包衣有杀有害生物剂的种子(ps)。
[0078]
优选地，用于种子处理的组合物以下述各种形式配制：用于种子处理的乳液(es)、悬浮液浓缩物(sc)、用于种子处理的可流动浓缩物(fs)和胶囊悬浮液(cs)。此类组合物可
以使用农业上可接受的载剂、表面活性剂或配制技术中通常使用的其他方便施用佐剂以及本领域已知的配制技术来配制。
[0079]
水性使用形式可以通过添加水而从乳液浓缩物、悬浮液、糊剂、可湿润粉末或水可分散性颗粒中制备。为制备乳液、糊剂或油分散体，组合物本身或溶解于油或溶剂中的组分可以通过润湿剂、增稠剂、分散剂或乳化剂在水中均质化。替代性地，还可以制备包含活性成分、润湿剂、增稠剂、分散剂或乳化剂并在需要时包含溶剂或油的浓缩物，这些浓缩物适用于用水稀释。
[0080]
可以通过将安全剂和稀释剂配制成合适的拌种组合物形式(如上面讨论的)来将拌种组合物施用于种子。拌种组合物可以含有呈例如包囊形式的单一活性成分或活性成分的组合。在一些实施例中，基于组合物的总重量，用于种子处理施用的桶混组合物可以包含1-85wt.％的除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐，组合物的其余部分包含固体或液体助剂(包括，例如，溶剂、表面活性剂等)。基于组合物的总重量，用于种子处理施用的典型的预混组合物可以包含0.5-99.9wt.％的除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐，组合物的其余部分包含固体或液体助剂(包括，例如，溶剂、表面活性剂等)。
[0081]
在一些实施例中，以1g/ha至600g/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以1g/ha至500g/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以1g/ha至300g/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以80g/ha至300g/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以125g/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以350g/ha至500g/ha的比率施用除草剂混合物。
[0082]
在一些实施例中，以0.1升/ha至300升/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以100升/ha至300升/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以约200升/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以0.1升/ha至10升/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以0.2升/ha至5升/ha的比率施用除草剂混合物。在一些实施例中，以1.25l/ha的比率施用除草剂混合物。
[0083]
在一些实施例中，除草剂混合物可以作为种植前的种子处理施用于高粱作物的种子。在一些实施例中，将除草剂混合物以0.1g/100kg种子至1000g/100kg种子的比率施用于种子。在一些实施例中，将除草剂混合物以1g/100kg种子至750g/100kg种子的比率施用于种子。在进一步的实施例中，将除草剂混合物以30g/100kg种子至300g/100kg种子的比率施用于种子。
[0084]
在一些实施例中，该方法包括将两种或更多种安全剂施用于acc酶耐受性高粱作物或其种子。在一些实施例中，该方法包括用两种或更多种安全剂的混合物处理acc酶耐受性高粱作物或其种子。
[0085]
在一些实施例中，将acc酶除草剂和/或安全剂施用于acc酶耐受性高粱作物、acc酶耐受性高粱作物的场所和/或acc酶耐受性高粱作物的繁殖材料。
[0086]
在一些实施例中，将acc酶除草剂和/或双苯噁唑酸、其酯或盐在苗前施用于不希望的植被的场所。在一些实施例中，将acc酶除草剂和/或双苯噁唑酸、其酯或盐在苗后施用于不希望的植被的场所。
[0087]
该组合的施用比率可根据所希望的作用而改变。
[0088]
在一些实施例中，如果在没有双苯噁唑酸、其酯或盐的情况下施用acc酶除草剂，
则以将会抑制acc酶耐受性高粱作物生长的比率施用acc酶除草剂。
[0089]
在一些实施例中，以约1g/ha至约250g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约1g/ha至约200g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约1g/ha至约150g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约1g/ha至约75g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约1g/ha至约20g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约1g/ha至约10g/ha的比率施用acc酶除草剂。
[0090]
在一些实施例中，以2g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以6g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以18g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以54g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以162g/ha的比率施用acc酶除草剂。
[0091]
在一些实施例中，以2.2g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以6.6g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以19.7g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以54.9g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以177.3g/ha的比率施用acc酶除草剂。
[0092]
在一些实施例中，以约25g/ha至约250g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约25g/ha至约50g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约50g/ha至约250g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约50g/ha至约100g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约100g/ha至约200g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约200g/ha至约250g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约30g/ha至约70g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约5g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约10g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约15g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约20g/ha的比率施用除草剂。在一些实施例中，以约30g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约40g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约50g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约60g/ha的比率施用acc酶除草剂。在一些实施例中，以约70g/ha的比率施用acc酶除草剂。
[0093]
在一些实施例中，以约1g/ha至约150g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约1g/ha至约100g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约5g/ha至约50g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约1g/ha至约12.5g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约12.5g/ha至约25g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约25g/ha至约50g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约50g/ha至约100g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约100g/ha至约150g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约12.5g/ha至约100g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约12.5g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约25g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以约50g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以100g/ha的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。
[0094]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐施用于acc酶耐受性高粱作物的种子。在一些实施例中，以0.1g至5g安全剂/kg种子的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以0.5g至2g安全剂/kg种子的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以
0.5g至1g安全剂/kg种子的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以1g至2g安全剂/kg种子的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以0.5g安全剂/kg种子的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以1g安全剂/kg种子的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。在一些实施例中，以2g安全剂/kg种子的比率施用双苯噁唑酸、其酯或盐。
[0095]
在一些实施例中，将acc酶除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐同时、单独或依次施用。在一些实施例中，将acc酶除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐在桶混制剂中同时施用。
[0096]
在一些实施例中，桶混制剂中双苯噁唑酸、其酯或盐与acc酶除草剂的重量比为约1:1至约1:5。
[0097]
在一些实施例中，将acc酶除草剂在生长季期间施用一到三次。
[0098]
在一些实施例中，将acc酶除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐作为单独的配制品制备，并且按原样施用单独配制品或者将其稀释至预定浓度。在其他实施例中，将acc酶除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐作为单独配制品制备，并且将这些配制品在稀释至预定浓度时混合。在其他实施例中，将acc酶除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐作为单独配制品制备，并且将这些配制品在稀释至预定浓度之前或之后混合为桶混制剂。在其他实施例中，将acc酶除草剂和双苯噁唑酸、其酯或盐一起配制，并且该配制品原样施用，或者该配制品稀释至预定浓度。
[0099]
在一些实施例中，将acc酶除草剂和/或双苯噁唑酸、其酯或盐经由叶面施用、基部施用、土壤施用、土壤掺入、土壤注入或种子处理来施用。
[0100]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐在acc酶除草剂施用之前7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天施用。
[0101]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐在acc酶除草剂施用之后1天、2天、3天或4天施用。
[0102]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐与acc酶除草剂的施用并行施用。
[0103]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐和acc酶除草剂在同一日施用。
[0104]
在某些实施例中，acc酶除草剂在acc酶耐受性高粱作物中的代谢速率大于3天、5天、10天、20天、30天或50天。
[0105]
本发明还提供了一种用于减少抑制acc酶的除草剂在acc酶耐受性高粱作物中的除草剂作用的方法，该方法包括将双苯噁唑酸、其酯或盐施用于该acc酶耐受性高粱作物的植物和/或种子，从而与未施用双苯噁唑酸、其酯或盐的相同高粱作物中的除草剂作用相比，减少该acc酶耐受性高粱作物中的除草剂作用。
[0106]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐在acc酶除草剂施用之前7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天施用于acc酶耐受性高粱作物。
[0107]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐在acc酶除草剂施用之后1天、2天、3天或4天施用于acc酶耐受性高粱作物。
[0108]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐与acc酶除草剂的施用并行施用于acc酶耐受性高粱作物。
[0109]
在一些实施例中，将双苯噁唑酸、其酯或盐和acc酶除草剂在同一日施用于acc酶耐受性高粱作物。
[0110]
本发明还提供了一种用于增加acc酶耐受性高粱作物对抑制acc酶的除草剂的耐
受性的方法，其中将acc酶耐受性高粱作物用双苯噁唑酸、其酯或盐处理。
[0111]
优选地，在本发明方法中使用的除草剂组合物包含(i)喹禾灵与双苯噁唑酸、其酯或盐的混合物，和(ii)至少一种农业上可接受的载剂。
[0112]
本文所披露的每个实施例被设想为适用于每个其他所披露的实施例。因此，本文描述的各种要素的所有组合均在发明范围内。此外，混合物实施例中阐述的元素可用于本文描述的组合物、方法、用途、试剂盒和高粱作物实施例中，并且反之亦然。
[0113]
下面提供了实例以有利于更全面地理解本主题。以下实例说明了作出和实施本主题的示例性模式。然而，本主题的范围不限于这些实例中披露的特定实施例，它们仅用于说明目的。基于对说明书和实例的考虑，其他实施例对于本领域技术人员将是显而易见的。包括实例在内的说明书旨在仅被视为示例性的，而不限制本主题的范围和精神。
[0114]
本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请都在本文中通过引用以其全文并入本说明书中，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请特定且单独地指明为通过引用并入本文。
[0115]
以下实例说明本发明主题在其一些实施例中的实践，不应被解释为限制本发明主题的范围。基于对说明书和实例的考虑，其他实施例对于本领域技术人员将是显而易见的。包括实例在内的说明书旨在仅被视为示例性的，而不限制本主题的范围和精神。
[0116]
实验细节
[0117]
实例1：喹禾灵和安全剂对acc酶耐受性高粱的影响
[0118]
耐受性高粱
[0119]
专有的acc酶耐受性高粱品种btx430-chr-acc1(atcc保藏pta-125106，突变w1999c)的种子由s&w公司供应。btx430-chr-acc1高粱栽培品种含有在acc酶基因中赋予acc酶耐受性的单个突变：与seq id no:6的氨基酸序列(如wo2018/222715中所披露的，即本文中以seq id no:5表示的序列)比对在氨基酸位置1999处具有色氨酸到半胱氨酸的氨基酸取代(w1999c；wo 2018/222715中所披露的seq id no:7，即本文中由seq id no:6表示的序列)。该突变提供对喹禾灵的耐受性。
[0120]
生长条件、材料和方法
[0121]
将acc酶耐受性高粱种子(s&w公司，品系id：t19-90001)种植在约8cm方形花盆中的商业温室土壤混合物中。
[0122]
植物在温室中开始生长，当温度有利于高粱生长时，将其置于室外环境空气温度下。
[0123]
根据需要提供土壤肥力和水分。
[0124]
植物生长到10至13、15-18、20至25和30至35cm高度进行处理。
[0125]
除草剂和安全剂施用
[0126]
通常，将植物如下所示用配制的精喹禾灵或adm.7000.h.2.a(喹禾灵+双苯噁唑酸，由安道麦公司(adama)制造)通过移动式喷嘴喷雾系统以235l/ha的喷洒体积来处理。将安全剂在adm.7000.h.2.a配制品中预先混合。根据喹禾灵的标准推荐施用，将除草剂与1％v/v作物油浓缩物一起施用。
[0127]
评估对acc酶除草剂的植物损害及耐受性水平的方法
[0128]
对高粱植物进行“标准杂草科学百分比分级”，其中0＝除草剂无作用，100％＝植
物完全死亡。损伤代表变色、发育迟缓和畸形。在除草剂施用约14天后进行评级。在每种情况下的喹禾灵和双苯噁唑酸的量在下表2中指明。
[0129][0130]
表2：在温室实验中使用的x-评级
[0131]
结果在图1中示出，将作物反应(即，展示出植物毒性的高粱作物的百分比)针对x-评级制图。图1清楚示出了当使用双苯噁唑酸时作物反应的显著降低。
[0132]
进行进一步的田间实验以确认以上结果并且测试喹禾灵与双苯噁唑酸的混合物是否保持对不同杂草的极好控制。
[0133]
使用不同量的喹禾灵和双苯噁唑酸检查了对受落叶实心草(两色蜀黍(sorghum bicolor))侵染的高粱植物的影响。表3示出了7天后的结果。
[0134][0135]
表3
[0136]
使用不同量的喹禾灵和双苯噁唑酸检查了对受狗尾草(setaria viridis)和黍稷(panicum miliace)侵染的高粱植物的影响。表4示出了33天后的结果。
[0137][0138]
表4
[0139]
在第二项实验中，使用不同量的喹禾灵和双苯噁唑酸检查了对受狗尾草侵染的高粱植物的影响。表5示出了27天后的结果。
[0140][0141][0142]
表5
[0143]
在所有情况下，植物毒性均显著降低，并且在所有情况下，在常规的喹禾灵施用水平下没有观察到植物毒性。这些结果是令人惊讶的，特别是考虑到同时还保持了对杂草的控制；在一些情况下，甚至稍有增加(参见表3中的x-1和x-2结果)。