一种用于卵巢组织片玻璃化冷冻的载体的制作方法

1.本发明涉及医疗器械技术领域，尤其是涉及一种用于卵巢组织片玻璃化冷冻的载体。


背景技术：

2.随着医疗水平的进步，使越来越多的年轻肿瘤患者得以长期生存，但与此同时，育龄期或青春期前女性肿瘤患者在接受放化疗药物治疗的同时会严重损害生育能力，故此生育力的保存受到越来越多的关注。女性生育力保存常用3种方式：卵子冷冻、胚胎冷冻、卵巢组织冷冻。而目前卵巢组织冷冻主要有慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻两种方法。程序化冷冻所需冷冻保护剂的浓度较低，对组织和细胞的直接毒性小，但需昂贵的冷冻设备且耗时较长，冷冻时易产生细胞内冰晶致细胞损伤。玻璃化冷冻使细胞在高浓度冷冻保护剂作用下迅速降温形成“玻璃态”，可避免冰晶形成造成的细胞死亡。程序化冷冻因易形成冰晶、仪器设备昂贵、保护剂长期接触产生毒性等问题逐渐被玻璃化冷冻取代。随着玻璃化冷冻技术的运用，玻璃化冷冻载杆被开发并加以应用，进一步提高了玻璃化冷冻的效果。
3.然而专门用于卵巢组织冷冻的载杆比较少。现有技术中，实际使用的卵巢组织玻璃化冷冻载体生产自日本加藤公司。如图8所示，其中冷冻载杆是由四根针管平行固定而成，针管后端连接与冻存管的管帽，卵巢组织被放到针管上进行冷冻；然而由于承载段固定在管帽上，将卵巢组织放到针管时需要双手使用镊子进行操作，该过程要求操作要迅速；所以操作困难；并且当卵巢组织被放到针管上后，沿针管方向阻力小，在进行冷冻过程卵巢组织容易脱落，同时如图9所示在对组织片进行解冻过程时，其中步骤s1受其冷冻载杆结构的影响，需要使用更多解冻液体量；其价格也较昂贵。
4.目前国内也有少量对卵巢组织冷冻的载体研究；其中针刺式冷冻载体并不实用，并且会破坏卵巢组织，对于非针刺式冷冻载体，存在以下问题：1、承载段对卵巢组织的大小有一定要求；对不同大小的卵巢组织进行冷冻时，无法做到同一规格冷冻载体同时满足不同大小卵巢组织块，特别是在对动物卵巢组织冷冻，由于动物卵巢组织小，所以进行冷冻过程其卵巢组织容易脱落；2、如何更加方便医护人员使用问题也未得到有效解决；3、冻存管与载片适配性低。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出了一种用于卵巢组织片玻璃化冷冻的载体。
6.根据本发明第一方面实施例的一种用于卵巢组织片玻璃化冷冻的载体，包括：
7.冻存管和载片；使用时所述载片放置于所述冻存管内；所述载片设置有夹镊段远离夹镊段的所述载片一端设置有承载段；所述承载段设置有网格通孔；且所述承载段横竖方向线性分布至少两个所述网格通孔；
8.所述冻存管包括管身和管盖；所述管身与所述管盖可拆卸连接；所述管身外表面
设置有标签部；所述管身管内依次设有螺纹段及容纳段，所述螺纹段与所述容纳段位于同一轴线；所述管盖底部表面设有密封垫片。
9.根据本发明实施例的一种用于卵巢组织片玻璃化冷冻的载体，通过在所述承载段设置相同大小的网格通孔，网格通孔均匀分布在所述承载段，同时网格通孔之间形成十字框架部分；对于大的卵巢组织块，直接放置所述承载段处，卵巢组织受自身重力影响，卵巢组织与网格通孔的接触面呈凹凸不平形状，冷冻定型后，网格通孔有效防止所述卵巢组织块脱落，对于动物的小卵巢组织块直接放置所述承载段十字框架处，卵巢组织受自身重力影响，在网格通孔处的卵巢组织块部分形变；从而达到有效防止所述卵巢组织块脱落；使同一规格冷冻载体同时满足不同大小卵巢组织块进行冷冻过程；所述载片与冻存管分离式设计，在进行解冻过程中，解冻第一步过程，可使用医用镊子将载有卵巢组织片的载片直接放入解冻皿中，由于所述载片为扁平状设计，极大节约了解冻第一步过程使用的解冻液用量，载片大小与所述容纳段的大小设计相适配，使载片放置所述容纳段后，载片两侧都留有空隙，方便镊子夹取转移。
10.根据本发明的一些实施例，所述网格通孔为矩形状；承载段上设置的相邻网格通孔之间的最短距离相等，且所述最短距离为0.3mm至1mm；所述网格通孔的长度范围为1mm至3.5mm，所述网格通孔的宽度范围为1mm至2.5mm。通过设置相邻网格通孔最短距离控制在0.3mm至1mm；冷冻定型时使卵巢组织块与所述网格通孔贴合更加紧凑；防止冷冻过程中卵巢组织块脱落；网格通孔的宽度范围为1mm至2.5mm；宽度取值过大，卵巢组织块可能从网格通孔脱落，取值过小，不方便冷冻液对卵巢组织块渗透过程。
11.根据本发明的一些实施例，所述载片材质使用医用304不锈钢材料；所述载片长度范围为15mm至25mm，所述载片宽度范围为10mm至15mm；所述载片厚度范围为2mm至4mm。所述承载段的长度范围为10mm至20mm；所述夹镊段的双表面都设置有相同形状大小防滑带牙；所述夹镊段的长度范围为5mm至10mm。使用医用304不锈钢材料可保护生物安全性，限制载片的尺寸在一定范围，使在满足使用要求同时，节约所述载片的用料，降低生产成本。所述夹镊段的设置方便医护人员对所述载片的夹取，防止所述载片在转移过程脱落医用镊子。
12.根据本发明的一些实施例，所述容纳段的内径尺寸是所述载片宽度的1倍至1.5倍；所述容纳段的长度尺寸是所述载片长度的1倍至1.5倍；对所述容纳段的尺寸与所述载片宽度相联系设计；使所述载片放置所述容纳段后，所述载片承斜立状态；使两侧都留有空隙，方便镊子夹取；同时也进一步限制了所述载片在所述容纳段内出现晃动；所述管盖还包括捏持段和连接段,所述捏持段表面设置有防滑纹理，所述连接段表面设有连接螺纹；所述连接螺纹与所述管身上螺纹段可进行螺纹连接，所述密封垫片为橡胶材质，所述密封垫片的面积与连接段的纵切面积相等。所述捏持段的设计方便医护人员使用；减少操作过程的失误，缩短冷冻或者解冻过程的时间，所述连接段和所述密封垫片的设置提高了所述冷存管的密封性，防止保存在所述冷存管内的卵巢组织块受污染。
13.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
14.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附
图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
15.图1是根据本发明实施例的载片结构示意图；
16.图2是根据本发明实施例的载片的俯视图；
17.图3是根据本发明实施例的冷存管的结构示意图；
18.图4是根据本发明实施例冷存管的管盖结构示意图；
19.图5是根据本发明实施例载片放置在冷存管内结构示意图；
20.图6是根据本发明实施例对卵巢组织块解冻过程流程图；
21.图7是根据本发明实施例载片替代方案的结构示意图；
22.图8是加藤公司生产的冷冻载体的结构示意图；
23.图9是使用加藤公司生产的冷冻载体进行解冻过程流程图；
24.附图标记：
25.100、载片；
26.110、夹镊段；120、承载段；121、网格通孔；
27.200、冷存管；
28.210、管盖；211、捏持段；212、连接段；213、密封垫片；
29.220、管身；221、螺纹段；222、容纳段；223、标签部；
30.300、第一载片；310、第一夹镊段；320、第一承载段；321、第一网格；322第二网格；323、第三网格；324、第四网格；325、第五网格；
31.400、卵巢组织。
具体实施方式
32.下面详细描述本发明的实施例，参考附图描述的实施例是示例性的，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本技术，并不用于限定本技术。
33.需要说明的是，当元件被称为“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。
34.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
35.实施例1
36.请参阅图1至图4，本实施例提供一种用于卵巢组织片玻璃化冷冻的载体，包括：
37.冻存管和载片100；使用时所述载片100放置于所述冻存管内；如图1和图2所示，所述载片100包括：夹镊段110和承载段120；所述夹镊段110设置于所述载片100一端，远离所述夹镊段110的所述载片100一端设置有所述承载段120；所述夹镊段110在其双面都设置有相同形状防滑带牙；所述载片100材质使用医用304不锈钢材料；所述载片100长度范围为15mm至25mm，所述载片100宽度范围为10mm至15mm；所述载片100厚度范围为2mm至4mm。当所述载片100的整体尺寸为20mm
×
10mm
×
0.6mm；所述夹镊段110在所述载片100一端分布区域
为6mmx10mm；所述夹镊段110双面设置防滑带牙使载片100不用区分正反方面；双面都可以用于放置卵巢组织；方便医护人员使用所述载片100；节省卵巢组织玻璃化冷冻操作时间；所述承载段120的分布区域大小为14mm
×
10mm，所述承载段120设置有网格通孔121；所述网格通孔121为矩形状；承载段120上设置的相邻网格通孔121之间的最短距离相等，且所述最短距离为0.3mm至1mm；所述网格通孔121在所述承载段120规律性分布，其中竖直方向设置三个所述网格通孔121，水平方向设置四个所述网格通孔121，每个所述网格通孔121的尺寸可设置为(1mm～2.5mm)
×
(1mm～3.5mm)；所述网格通孔121的设置使冷冻/解冻液体充分渗透卵巢组织，在进行人体卵巢组织冷冻过程中，其卵巢组织的大小包括10mm
×
10mm
×
1mm；将冷冻液渗透过卵巢组织放置承载段120,在所述网格通孔121上方的卵巢组织受自身重力影响，卵巢组织与网格通孔121接触面呈凹凸不平形状，将卵巢组织及载片100放入液氮冷冻定性；使得卵巢组织与载片100阻力增大；更加有效防止卵巢组织的脱落。
38.对于动物卵巢组织进行冷冻实验过程中，由于动物卵巢组织一般比较小，有的甚至小于所述网格通孔121的大小，可将冷冻液渗透过后的动物卵巢组织放置所述网格通孔121间的十字框架部分，位于所述网格通孔121中的部分卵巢组织受重力影响，形成包裹十字框架状，将卵巢组织及载片100放入液氮冷冻定性，使得卵巢组织与载片100阻力增大更加有效防止脱落；相比于现有技术，所述承载段120中的网格通孔设置解决对于不同大小的卵巢组织进行冷冻过程防脱落问题；同时方便冷冻/解冻液对卵巢组织渗透所述载片100材质使用医用304不锈钢材料。医用304不锈钢材料对生物组织友好；不对生物组织安全造成威胁；同时其成本低，容易加工成型；所述载片100的结构特征都是在同一片医用304不锈钢体现，该设置更加方便所述载片100生产。
39.如图3和图4所示，所述冷存管200包括管身220和管盖210；所述管盖210呈倒凸状，所述管盖210大圆柱体表面设置有捏持段211，所述管盖210小圆柱表面设置有连接段212，所述管盖210靠近所述连接段212的底部端面设置有安装孔，所述安装孔用于密封垫片213的安装；所述密封垫片213为橡胶材质，所述密封垫片213的面积与连接段212的纵切面积相等。密封垫片213的设置提高其密闭性，有效保护了管内的卵巢组织，所述捏持段211高度范围为10mm至15mm，所述连接段212高度与所述螺纹段211高度相同。
40.所述管身220包括：螺纹段221、容纳段222及标签部223；所述标签223部设置于所述管身220外表面，所述标签223用于对装有卵巢组织进行冷冻的冷存管200进行编号；以区别装有不同卵巢组织的冷存管200；所述容纳段222设置于所述管身220内部，所述管身220管口内设置所述螺纹段221；所述螺纹段221与所述容纳段222同轴线；所述容纳段222的内径尺寸是所述载片100宽度的1倍至1.5倍；所述容纳段222的长度尺寸是所述载片100长度的1倍至1.5倍。所述螺纹段221与所述连接段212相适配，所述螺纹段221的设置用于连接所述冻存管和载片100，同时提高在连接后其密闭性更好；在进行解冻过程也更加方便冷存管200打开。所述容纳段222呈圆柱体状，当载片100尺寸为20mmx10mmx0.6mm，所述容纳段222内径为11mm-15mm；高度为20mm-25mm；所述容纳段222的尺寸设置与所述载片100尺寸相配合，使所述载片100放置容纳段222后保证小角度倾斜，使放置后的所述载片100两侧都留有空间，在进行解冻过程，将所述载片100取出时，更加有利于镊子夹取所述载片100；所述载片100的高度小于所述容纳段222高度，防止所述载片100阻碍所述管盖210密封过程。
41.实施例2
42.请参阅图5和图6，本实施例提供一种用于卵巢组织片玻璃化冷冻的载体使用方法；包括如下内容：
43.冷冻过程：
44.步骤1：用医用镊子将切割为10mm
×
10mm
×
1mm大小的组织切片，依次放入含有第一冷冻液的冷冻皿中室温平衡5分钟。
45.步骤2：然后手持医用镊子，将组织从第一冷冻液中捞出，并用无菌滤纸将组织片上多余的第一冷冻液液吸附后，依次将组织放入含有第二冷冻液的冷冻皿中室温平衡5分钟。
46.步骤3：再次手持医用镊子，将组织从第二冷冻液中捞出，并用无菌滤纸将组织片上多余的第二冷冻液吸附后，放入含有第三冷冻液的冷冻皿中室温平衡15分钟。平衡时间完成后，手持医用镊子，将组织放置于载片100的网格承载段120，展开并最大化其表面积，随后用另一镊子夹住载片100的夹镊段于液氮中，左右摇晃，除去其周围的空气，最后在将承载卵巢组织的载片100置于冷存管200中，如图5所示为放置有卵巢组织未封盖的冷存管200，最后将密封的冷存管200投入液氮罐中保存。
47.如图6所示解冻过程：
48.步骤s1：在液氮中，左手用医用镊子夹住冷存管，右手持另一镊子慢慢旋开冷存管管帽，迅速将承载卵巢组织块400的冷冻载片100从冷存管内取出，直接放入含有第一解冻液并已预温至37℃的解冻皿内中1分钟。值得注意的是，与现有的技术操作步骤相比，本中心发明的卵巢组织冷冻载片100能明显减少该步操作中第一解冻液的所需液体使用量，进一步降低试剂盒的成本。
49.步骤s2：在室温下，手持医用镊子将卵巢组织块400从载片100的承载段取下，将其放入含有第二冷冻液的解冻皿中3分钟，
50.步骤s3：再手持医用镊子将卵巢组织块400从第二冷冻液转移至第三冷冻液的解冻皿中5分钟。随后将复苏后的组织片放入组织培养液中，在37℃培养2小时后，待移植。
51.实施例3
52.请参阅图7，本实施例提供一种所述载片100的可替代方案，其中，
53.所述第一载片300包括：第一夹镊段310和第一承载段320；所述第一夹镊段310设置于所述第一载片100一端，远离所述第一夹镊段310的第一载片300一端设置有所述第一承载段320；第一夹镊段310在其双面都设置有相同形状防滑带牙；所述第一载片300的整体尺寸为20mm
×
10mm
×
0.6mm；所述第一夹镊段310在所述第一载片300一端分布区域为6mmx10mm；第一夹镊段310双面设置防滑带牙使所述第一载片300不用区分正反方面；双面都可以用于放置卵巢组织；方便医护人员使用所述第一载片300；节省卵巢组织玻璃化冷冻操作时间；所述第一承载段320的分布区域大小为14mm
×
10mm，所述第一承载段320设置有第一网格通孔321、第二网格通孔322、第三网格通孔323、第四网格通孔324和第五网格通孔325；从所述第一网格通孔321至所述第五网格通孔325其大小依次增大；所述第一网格通孔321尺寸可设置为(1mm～3mm)
×
(1mm～3mm)；各网格通孔在竖直方向规律性设置3个；对于尺寸大的卵巢组织块，可将其放置所述第一承载段320大网格通孔部分，解决其冷冻/解冻液体渗透问题，同时又能有效防止卵巢组织块脱落；对于动物的尺寸小的卵巢组织块，可将其放置所述第一承载段320小网格通孔部分，解决其冷冻/解冻液体渗透问题，同时又能有
效防止卵巢组织块脱落；同样可解决同一规格载片满足不同大小卵巢组织块冷冻防脱落问题。
54.在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”、“轴向”、“径向”、“周向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对发明的限制。
55.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。
56.显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或者特性可以包含在本实施例申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或是备选的实施例。本领域技术人员可以显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
57.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。