平铺白珠无性系组培快繁的方法与流程

本发明涉及生物，特别涉及平铺白珠的组织培养技术。

背景技术：

1、平铺白珠（ gaultheria procumbens）隶属于杜鹃花科（ericaceae）越橘亚科（vaccinioideae）白珠树属（ gaultheria）植物，又称匍匐白珠，是一种多年生常绿匍匐灌木，原产于美国和加拿大，其果实观赏价值极高，有白、粉、红等颜色，挂果期长，能保持整个冬季，已被开发成观果园艺植物，成为了近年来国际流行的盆栽观果植物，经济效益可观，我国已引入栽培。

2、平铺白珠的果实富含水杨酸和花青素，在北美的药用价值堪比滇白珠在我国的地位，具有止痛、消炎、治疗风湿等功效，是美国镇痛药“icy hot”的主要成分。同时平铺白珠的叶子还是提取冬青油的主要原料，被广泛用于生产牙膏、口香糖、杀虫剂等产品，其工业价值也十分显著。平铺白珠通常通过种子和扦插进行繁殖，播种苗性状分离严重，导致商品性状不稳定；扦插苗不整齐，难以满足标准化生产需求。因此，组培快繁是实现平铺白珠种苗标准化生产的重要途径。已有的有关平铺白珠组培快繁技术，是通过种子无菌播种获得快繁体系实现，其本质仍然是有性繁殖，其种苗性状分离也同样严重，制约了成品的标准化生产。因此，通过无性材料进行组培快繁是解决种苗标准化生产的技术关键。

技术实现思路

1、平铺白珠无性系组培快繁的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

2、步骤1，选取植株当年生幼嫩的茎段为外植体；

3、步骤2，外植体去叶，切成带腋芽的4-5 cm的小段；

4、步骤3，清洁外植体；

5、步骤4，对外植体进行消毒；

6、步骤5，对消毒后的外植体进行初代培养；

7、步骤6，初代无菌苗继代培养；

8、步骤7，继代培养后的不定芽进行生根培养；

9、所述步骤5采用的初代培养基配方为：mrm +蔗糖25-30 g/l + tdz1-1.4 mg/l +活性炭0.6-1 g/l；

10、所述步骤6采用的继代培养基配方为：mrm+蔗糖25-30 g/l + 2-ip7.5-12.5 mg/l+ naa0.08- 0.1 mg/l +活性炭0.6-1 g/l；

11、所述步骤7采用的生根培养基为：1/2mrm+蔗糖25-30 g/l + iba0.3 mg/l + naa0-0.6 mg/l +活性炭0.6-1 g/l。

12、所述步骤4采用的消毒方法是先用75%酒精消毒30-35 s，然后用0.1%升汞浸泡消毒11-12min，最后用无菌水漂洗。

13、所述mrm培养基配方记载于公开文献indian journal of biotechnology vol11,april 2012,pp 197-204, in vitro plant regeneration of wintergreen(gaultheria fragrantissima wall.): assessment of multiplenutrientformulations and cytokinin types。具体如下表所示：

14、 母液成分 mrm定量(mg/l) 1/2mrm定量(mg/l) <![cdata[nh₄no₃]]> 400 200 <![cdata[kno₃]]> 480 240 <![cdata[cacl_2•2h₂o]]> 440 220 <![cdata[mgso_4•7h₂0]]> 370 185 <![cdata[nah₂po_4•2h₂o]]> 380 190 <![cdata[h₃bo₃]]> 6.2 3.1 <![cdata[mnso_4•h₂o]]> 16.9 8.45 <![cdata[namoo_4•2h₂o]]> 0.25 0.13 <![cdata[cuso_4•5h₂o]]> 0.025 0.01 <![cdata[cocl_2•6h₂o]]> 0.025 0.01 <![cdata[znso_4•7h₂o]]> 8.6 4.3 <![cdata[feso_4•7h₂o]]> 27.8 13.9 <![cdata[na₂-edta]]> 37.3 18.65 肌醇 1 0.5

15、本发明的快繁方法，可建立起平铺白珠无性系快繁体系，为解决平铺白珠种苗标准化生产提供技术支撑，解决了平铺白珠传统育苗方式中种苗性状不稳定的问题。