一种免疫细胞低温冻存液及其应用的制作方法

本发明涉及细胞冻存液领域，具体为一种免疫细胞低温冻存液及其应用。

背景技术：

1、免疫治疗技术在未来医疗方向表现出巨大的潜力，其中哺乳动物免疫细胞，例如t细胞、γδt细胞、nk细胞或293t细胞，其在同种异体环境中出现抗宿主病的风险较低，在临床治疗中具有极大优势。但其中应用的细胞在长期保存方面仍存在客观上的延迟凋亡现象，使其在低温保存复苏后表现出延迟的细胞凋亡，这种凋亡现象导致近半数的免疫细胞无法应用于后续的临床治疗。

2、现有的免疫细胞冻存液利用高浓度（10%）dmso和血清（fbs）冻存细胞从而达到降低细胞复苏后细胞凋亡比例的目的。但这些物质的添加配比引入外源血清，增加了后续免疫治疗时存在的临床风险，同时高浓度的dmso也增加了对细胞及人体的毒害作用。此外现有的冻存液在冻存免疫细胞时，存在细胞复苏后延迟凋亡率高的现象，免疫细胞在冻存后复苏24小时、48小时细胞活率较低。因此，急需开发一种免疫细胞在复苏后24小时、48小时的延迟凋亡现象显著降低的细胞冻存液。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明开发了一种免疫细胞低温冻存液及其应用，以降低免疫细胞延迟凋亡现象。本发明的目的在于提供一种免疫细胞低温冻存液及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

3、一种免疫细胞低温冻存液，由基础冻存液和添加组分组成，

4、所述的基础冻存液为依科赛uc000-n056细胞冻存液；

5、所述的添加组分，具体为：60g/l的葡聚糖、3g/l的甘露醇、5g/l的异亮氨酸、20μg/l的白藜芦醇、0.2g/l的抗坏血酸磷酸半镁盐、0.5g/l的羟丙基纤维素。

6、优选的，上述免疫细胞低温冻存液用于哺乳动物免疫细胞的低温冻存。

7、优选的，所述的哺乳动物免疫细胞为t细胞、γδt细胞、nk细胞或293t细胞中的任意一种。

8、与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：

9、本发明的免疫细胞低温冻存液，与市场上现有的冻存液相比，成分简单明确，成本低廉、且不含外源异体成分，临床安全，显著降低了免疫细胞冻存复苏后发生的延迟凋亡现象，并维持了细胞较高的增殖能力。

10、低温冻存液是一种可降低细胞内降温时冰晶的凝结状态，并对细胞低温冻存时产生的过量活性氧进行清除，从而从两方面对免疫细胞在降温过程中以及低温保存过程中进行保护，使其在复苏后延迟凋亡现象得以改善。

11、本发明提供的一种可以低温（-196℃）保存免疫细胞的低温冻存液，也可在-80℃保存，成分简单明确，不引入任何动物源或人源成分，临床安全，成本低廉，冻存复苏后可以降低免疫细胞的延迟凋亡比例，并保持复苏后良好的细胞增殖能力。

12、本发明的细胞冻存液，在依科赛（excell）uc000-n056细胞冻存液的基础上，添加了其他设计组分：葡聚糖、异亮氨酸、甘露醇等，其相互作用可改变细胞内冰晶凝结状态，减少冻存时冰晶形成对免疫细胞的损伤；添加了白藜芦醇、抗坏血酸磷酸半镁盐，用作抗氧化剂，可清除细胞内产生的过量自由基，同时对免疫细胞内的细胞器具有一定的保护效果；添加了羟丙基纤维素作为冻存时的增粘剂，降低冻存过程中细胞内冰晶的形成，减少对细胞的冻存损伤。通过上述原料的配比组合，能够最大程度上维持免疫细胞低温冻存的细胞状态，降低免疫细胞复苏后延迟凋亡的比例。使用本发明的免疫细胞冻存液，与现有的其他商业化产品比较，显著降低了免疫细胞复苏后的活率和延迟凋亡现象。

技术特征：

1.一种免疫细胞低温冻存液，其特征在于，由基础冻存液和添加组分组成，

2.根据权利要求1所述的一种免疫细胞低温冻存液的应用，其特征在于，该免疫细胞低温冻存液用于哺乳动物免疫细胞的低温冻存。

3.根据权利要求2所述的一种免疫细胞低温冻存液的应用，其特征在于，所述的哺乳动物免疫细胞为t细胞、γδt细胞、nk细胞或293t细胞中的任意一种。

技术总结
本发明公开了一种免疫细胞低温冻存液及其应用，该低温冻存液包括下述组分：基础冻存液、葡聚糖、异亮氨酸、甘露醇、白藜芦醇、羟丙基纤维素。本发明免疫细胞低温冻存液补充体系成分简单明确，无引入外源组分，降低了后续免疫治疗时存在的临床风险以及对人体的毒害作用；同时用本发明的冻存液冻存免疫细胞无需进行梯度冻存，并且冻存的免疫细胞在复苏后24小时、48小时的延迟凋亡现象显著降低。

技术研发人员：牛馨钰,商春华,孙芳,陈旭,陈刚
受保护的技术使用者：苏州依科赛生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15