酶法解离紫菜营养细胞育苗方法

专利名称:酶法解离紫菜营养细胞育苗方法
内容本发明属于经济海藻育苗技术。
在已有的技术中，公知的紫菜人工育苗方法是，果孢子采集、丝状体培育和壳孢子采苗三个步骤〔註1〕，这一采苗方法，仅丝状体培育就需要5～6个月，需要专用的育苗室和培养设备，丝状体培养中时有病害发生，壳孢子释放易受环境条件的制约，育苗技术难度大，不易掌握，成本高。高产的坛紫菜在北方壳孢子采苗困难而不能推广养殖。
为了克服已有的紫菜有性生殖育苗技术上的缺点，提高紫菜育苗技术和紫菜养殖的经济效益，根据酶法可以解离紫菜叶状体营养细胞再生植株的原理〔註2〕，设计了紫菜无性繁殖的营养细胞育苗方法。
本发明的构思是，从食藻性海螺的软体部分制备含有多种消化酶的复合酶，并加入葡萄糖或蔗糖配成营养细胞解离液，将冷藏保存在-20℃的紫菜叶状体，剪碎放入解离液中，在25～30℃下使营养细胞解离。解离后，以清洁海水洗涤单细胞以清除多余的酶和糖，离心收集单细胞。将制备的营养细胞在育苗设备中加营养海水培养10～15天，然后置入采苗器具进行采苗1～2天，然后移至海上养殖。
本发明的最佳实施例是1、紫菜营养细胞解离液的制备采集新鲜的粒嵘螺在海水中饥饿囚养2～3天，洗涤后将海螺壳破碎，加海螺重量2倍的蒸馏水搅拌提取10分钟，用纱布过滤除去渣滓，过滤液离心(10，000转/分)30分钟。上清液加入盐酸调pH沉淀去杂蛋白，离心(10000转/分)30分钟。上清液加入1.8克分子的葡萄糖配成解离液。(为了长期保持酶的活性，可按文献〔註3〕中所提供的方法制成酶干粉保存。)2、营养细胞的制备置于-20℃的冷冰设备中保存的条斑紫菜叶状体在常温海水中培养2天，切成小块，放置于细胞解离液中25℃保温3小时，然后用300目筛绢过滤，滤液在10000转/分下离心3分钟。沉淀下来的细胞用海水洗涤三次，每次洗涤后，用同样离心方法去除洗涤液，收集单细胞。
3、单细胞培养及采苗将解离制备的单细胞置入育苗设备中，加入加营养盐海水含氮8ppm，磷1ppm，以及二价铁离子1ppm，光照培养(光强2000Lux左右)。温度16～22℃，培养14天后，便有大量可供采苗的孢子放散，放入采苗器具，充气采苗36小时后，移至海上养殖。
〔註1〕中国科学院海洋研究所藻类实验生态组、藻类分类组，1978，条斑紫菜的人工养殖，科学出版社。
〔註2〕唐延林，1982，紫菜营养细胞和原生质体的分离和培养，山东海洋学院学报，第12卷第4期，37～50。
〔註3〕刘万顺，唐延林，刘学武，方宗熙，1983，海螺酶制备和性质的研究，第11届国际海藻学术讨论会论文集，319～320。
权利要求
1.本发明属于经济海藻育苗技术，一种使用酶法解离紫菜属(Porphyra)叶状体以获得单个营养细胞，用于紫菜人工育苗的方法，本发明的特征在于将食藻性海螺的软体部分经匀浆、调整PH，去除杂蛋白质和有害酶类制得酶溶液，酶溶液加入1.5--2克分子的糖类配成紫菜营养细胞解离液，营养细胞在酶的作用下即可解离，解离的单细胞经过洗涤并培养10～15天后，以采苗器具采苗1～2天，然后移入海上养殖，本方法简便易行、便于推广，是一种无性繁殖育苗方法；
2.根据权利要求
1所述的育苗方法，可以由粒嵘螺、锈凹螺、单齿螺制备营养细胞解离液;
3.根据权利要求
1所述的育苗方法可以用于紫菜属的条斑紫菜(P.yezeonsis)和坛紫菜(P.haitanensis);
4.根据权利要求
1所述的育苗方法，采苗器具可以是维尼纶纤维绳网、塑料纤维绳网和植物纤维绳网。
专利摘要
一种酶法解离紫菜属营养细胞育苗方法。食藻性海螺类经匀浆，调整pH，加葡萄糖或蔗糖配成紫菜营养细胞解离液。紫菜叶状体置解离液中制取营养细胞，并在海水中培养10～15天，进行人工采苗。改变紫菜有性生殖育苗技术为无性繁殖的营养细胞育苗。本发明的优点在于(一)紫菜育苗期由6个月缩短到15天左右；(二)本方法解决了坛紫菜在北方育苗的困难，使坛紫菜可在北方养殖；(三)本方法是紫菜育种的一种手段。
文档编号A01G33/02GK85104059SQ85104059
公开日1986年11月26日 申请日期1985年5月26日
发明者方宗熙, 戴继勋, 唐延林, 刘万顺, 包振民 申请人:山东海洋学院