专利名称：母猪饲料添加剂和母猪饲料的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于母猪饲料的添加剂及掺有这种饲料添加剂的母猪饲料。所说添加剂含具有增加母猪血浆中还原形式的叶酸的量的作用及由此而提高母猪配种效能的作用的还原形叶酸作为活性成份。
叶酸是一种参予蛋氨酸、丝氨酸和谷氨酸等氨基酸的合成及构成DNAS核酸嘌呤碱合成的辅酶。对怀孕妇女流行病调查和怀孕豚鼠实验证实在孕期需要增加叶酸，母体血浆中叶酸的浓度会降低[Pritchard J.A.等人，Am.J.obst.Gynecol.，104卷P388(1969)和Habibzadeh H.C.等人，Br.J.Nutr.,55卷，P23(1986)]。
也已证明，对于猪，家畜而言，在孕期母猪血浆中还原形叶酸的量会要降低[Natsubori等人，Final Program and Abstracts Book of the 10th International Symposium:“Chemistry and Biology of pteridines and Flates”P196(1993)]。还已证明可通过用肌肉注射的办法对怀孕猪施用氧化形叶酸来提高配种效能[Matte J.J.等人，J.Anim.Sci.,67卷,P426(1989)和FriendshipR.M.等人，Can vet.J.32卷，P564(1991)]，这说明了对怀孕猪(母猪)使用叶酸的重要性。
然而，用分子内注射的办法给母猪使用叶酸特别麻烦，如果能通过将叶酸加到饲料中(即口服)来提高配种效能则是十分优选的。业已进行了许多研究工作来通过口服提高其配种效能。一些研究工作考虑到了这种给药效果[Thaler R.C.等人，J.Anim.Sci.，67卷，P3360(1989)，Lindemann M.D.等人，J.Anim.Sci.，67卷，P459(1989)和Lindemann M.D.等人，J.Anim.Sci.，71卷，P239(1991)]，而另一些研究工作则对这种效果持怀疑态度[Easter R.A.等人，Nutrition Reports International，28卷，P945(1983)和Matte J.J.等人，Livestock production science，33卷。P131(1992)]。由此已知，关于口服还原叶酸的效果问题目前尚未有一个肯定的结论。
叶酸一般是用化学方法合成的。化学合成的叶酸是氧化形态的，此氧化形态叶酸事实上不起辅酶作用。在体内吸收后，一般通过二氢叶酸脱氢酶将其转化为7，8-二氢叶酸，然后经酶还原为表达辅酶作用的四氢叶酸(THF)或5-甲基四氢叶酸一类还原形叶酸。因此可通过测定血浆中THF或5MF的量的办法来测定使用叶酸的效果。然而，不可能用现有技术中的测定方法选择性地单独测定还原形叶酸，因为这种方法是基于放射性配体技术来进行的，这样当然就不可能准确获得血浆中所含的还原叶酸的量。由于还原形叶酸具有生理活性，所以本说明书中称之为“活性型叶酸”，而氧化形叶酸不具生理活性。所以将其称为“非活性型叶酸”。
为了对猪使用叶酸后的效果进行分析，近来已通过用高效液色谱用电化学检测仪测定血浆中活性型叶酸的含量来研制了高效液相色谱一电化学检测仪法(HPLC-ECD)，且用此方法对猪经静脉注射氧化形叶酸。肌肉注射或口服氧化形叶酸后血浆中的THF和5MF的含量范围进行了研究。具体讲，根据拉丁方格法对体重25kg左右的4支猪分别进行静脉内注射(其量为每公斤体重1mg(氧化形叶酸)、肌肉注射(每公斤体重1mg(氧化形叶酸)、小剂量口服给药(氧化型叶酸)(每公斤体重1mg)和大剂量口服给药(50mg/kg体重)(氧化型叶酸，并进行实验。结果发现，上述4支猪中，除小剂量口服给药(氧化形叶酸)外，其他三种情况的猪的血浆中的THF和5MF的浓度均增加了。因此，据认为所使用的氧化形叶酸被吸收了，且在肝中转化成了活性形叶酸，等。此外，在口服小剂量的氧化形叶酸的猪血浆中并未发现THF和5MF。对于上述情况，请参见Eilchi Kokne等人，“Abstract Book of thd 113th Convention of Japan veterinary Society,”P112(1992)。对于大鼠而言，众所周知，即使用小剂量的氧化形叶酸，还原形叶酸的浓度也会迅速增加[Tsunematu K.等人，Cong.Anom.，30卷，P113(1990)]。
从上述实验中可知，猪具有将非活化型叶酸转化为活化型叶酸的能力，但从消化渠道吸收非活化型叶酸的能力远比大鼠低。还发现，为了通过口服非活化型叶酸来增加血浆中活化型叶酸的含量，必须对其使用极大量的非活化型叶酸。本发明正是针对现有技术中的上述问题提出的。本发明的目的是提供一种用于母猪的能增加血浆中还原型叶酸浓度和由此能提高配种效能的饲料添加剂及提供一种同这种添加剂一道加的能提高配种效能的母猪饲料。为解决上述问题，本发明人已进行了深入研究，经研究发现在饲料中加入还原形叶酸且让母猪吃这种饲料即可增加猪血浆中还原形叶酸的浓度，本发明人正是基于这一发现完成了本发明。
因此，本发明涉及一种经口服还原形叶酸来提高母猪配种效能的方法。下面将详细地予以介绍。
首先，本发明涉及一种母猪饲料添加剂，其特征在于所含的还原形叶酸作为提高配种效能的活性成份。
众所周知，母猪子宫受精后一般产生多胚胎。然而，这样产生的所有多胚胎并非均能安全分娩。从控制猪配种的角度看，希望产生的所有多胚胎均能安全分娩是十分自然的。在本发明中所说的“母猪配种效能的提高”其含义与母猪吃了含本发明的饲料添加剂或其用本发明的饲料饲养后，安全分娩的胚胎同产生的总胚胎数之比，与其未用这种饲料添加剂或未用这种饲料饲养的母猪的其分娩胚胎数之比的增加。
本说明书中所用术语“还原形叶酸”不仅意指狭义的还原形叶酸[蝶酰(一)谷氨酸]，也意指其他各种还原形叶酸(广意叶酸)。应该指出的是还原形叶酸的定义包括其生理功能同狭义还原形叶酸相类似的还原形叶酸。
因此，本发明所说的还原形叶酸包括其中叶酸的蝶啶环被还原的7，8-二氢叶酸(H2叶酸)；H4叶酸，如5，6，7，8-四氢叶酸(H4叶酸)，5-甲酰基-H4-叶酸，如甲酰四氢叶酸[L-(-)-5-甲酰基-5，6，7，8-四氢叶酸]、5，10-亚甲基-H4-叶酸、5-甲基-H4-叶酸、10-甲酰基-H4-叶酸、5-甲基-H4-叶酸、5-亚氨甲基-H4-叶酸等；和其衍生物，如各H4叶酸的聚r谷氨酸衍生物(已知为肝中的贮藏形叶酸)。不言而喻，本发明中所说的还原形叶酸也包括肝粉中及微生物破裂细胞或细胞抽提物中所含的还原形叶酸。
还需指出的是，肝是各种维生素在其中进行新陈代谢的器官，众所周知肝中所含的活性型叶酸的含量是相当高的。然而，没有一篇公知技术报导用如冷冻-干燥的制的肝粉(猪或牛的)和研磨的猪或牛的肝粉给母猪吃来提高其配种效能。所以将肝粉掺入饲料中来提高猪血浆中的THF和5MF的浓度是本发明的一新的发现。
正如对微生物破裂细胞或细胞抽提物所作的解释那样，串酵母一类酵母已用作饲料的维生素源。然而仅仅吸收细胞中所含的维生素是贫乏的，因为一般所用的维生素细胞壁来破裂。
鉴于上述原因，本发明人经深入研究发现，口服微生物破裂细胞或细胞抽提物，即口服对微生物细胞进行机械破裂处理、或酶消化处理、或自溶等处理来使还原形叶酸成为易吸收的状态而制的产品即可提高猪血浆中的THF和5MF的量。所以对怀孕母猪吃所说产品即可提高配种效能。
任何微生物均可作制备破裂细胞或细胞抽提物的原料。其条件是只要所制得的产品(机械破裂细胞或酶破裂细胞)具有高含量的还原形叶酸。具体的例子包括细菌，如以前称作短颈酶乳杆菌的棒状谷氨酸菌(Corynebacterium glutamicum)(ATCC 13,869等)、以前称作短颈棒状杆菌的棒状杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)(ATCC 6,871等)、Brevibacterium flavum(ATCC13,826等)、棒状谷氨酸菌(ATCC(13，032，ATCC13，060等)枯草杆菌ATCC]13，952，IFO 3，009，IFO 13，169等)、Lactococcus lactis Subsp.Cremoris (ATCC 19，25)，等)等；酵母，如发面酵母(IFO 2，044、IFO 2，375等)、以前称作酿母的假丝酵母(ATCC，9226等)等，和真菌，如米曲霉(IFO 30，104等)、黑曲霉(IFO 4，414等)等。
任何培养基均可作培养这些微生物的培养基，其条件是其中含有可被这些微生物同化的营养素。例如，一般所用的适当加有下述物质的培养基，碳源，如碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖等、醇，如乙醇、丙三醇等；有机酸，如乙酸、丙酸等；豆油和其混合物；含氮有机或无机营养素，如酵母膏、胨、肉膏、谷物浸渍液、硫酸铵、氨等；无机营养素，如磷酸盐、镁、铁、锰、钙等；维生素，如生物素、纤生素等。
一般可使用培养这些微生物的条件来进行培养，而勿需作任何变更。例如可在20-40℃、pH为4.0-9.5的营养素基中培养20小时至5天。
可在培养基中加入对一氨基苯甲酸、氧化形叶酸和/或核酸来增加通过培养后获得的微生物细胞中产生的还原形叶酸的量。所使用的叶酸含鸟嘌泠苷、肌甙、黄嘌呤、5′-guanilic酸、5′-肌苷酸、5′-黄苷酸、鸟嘌呤苷-5-二磷酸酯和鸟嘌呤苷-5′-三磷酸酯。应按同不加添加剂相比，所加的添加剂应能使细胞中产生的还原形叶酸的量有所增加这样一种要求来加入添加剂。例如，每升饲料1mg-1g添加剂，优选每升10-100mg、如加入的添加剂量大小，则起不到增加还原形叶酸的量的作用，但如加入量太多，则会抑制微生物的生长。
把用此种培养方法获得的细胞用适当方法从培养液中分离出来后进行破裂或抽提处理。但是如培养基的成份可给母猪吃且不影响该破裂处理的性能时，可将培养液直接进行破裂或抽提处理或在浓缩后进行破裂或抽提处理。且欲破裂或抽提处理的细胞可为活细胞或死细胞。
对于破裂细胞的方法无特殊限制，例如可用迄今为止所已知的机械方法及利用酶的方法来进行细胞的破裂。事实上可利用本领域的公知机械方法，如用玻璃粒珠搅拌来对细胞进行破裂，如Biospec公司制的珠粒搅拌器(Beads Beater)，或加压来进行此破裂，或用超声波破裂机来进行。如用酶来对微生物细胞进行破裂，事实上这也是一种公知的方法。例如，将培养的细胞进行加热消毒处理后，向其中加入消化细胞壁的酶分解该微生物的细胞壁。能消化和破裂细胞壁的任何酶均可用于这种分解。已知的酶，如溶菌酶、蛋白酶、发酵酶等则是具有这种能力的酶的例子。可在已知的条件下进行这种酶处理。
对于抽提细胞的方法也无特殊要求，例如可用自溶或在90-120℃的温度范围内的热水加热细胞来进行抽提。
可将这样制得的破裂细胞或细胞抽提物直接喂猪或将其浓缩或干燥后喂猪或与适当的添加剂混合后以混合物的形式喂猪。由于叶酸几乎不存在于细胞壁中，所以可从破裂细胞中去除存在的细胞壁碎片。当然，将破裂的细胞或细胞抽提物加到饲料中并用这种饲料喂母猪是各种可能的口服方法中的一种方法。
不言而喻，各种还原形叶酸可单独使用，也可将其中的两种或多种合并起来使用。
为了使用方便，可将根据本发明的母猪饲料添加剂作成各种适宜的剂形，如浓缩剂、干粉剂、丸剂等，其中可加或不加适宜的载体等。
此外，本发明还涉及一种母猪饲料，其特征在于其中加有根据本发明的母猪饲料添加剂。
制备本发明的母猪饲料并不特别困难，除了向其中加入本发明的饲料添加剂外，可按已知的惯常方法来生产配方饲料。
下面将对加入本发明的母猪饲料添加剂时应予考虑的要点进行说明，即为添加的量。本发明的用于母猪的饲料添加剂的用量至少应能见到其效果出现。例如，每天每公斤体重母猪摄入0.1-100μg还原形叶酸，如加的量太少。则得不到效果，如果加入的量超过其上限，其效果不会因此而增加，所以这样是无用的。
本发明还提供了一种提高母猪配种效能的方法，其特征在于用本发明的饲料添加剂喂母猪，或用本发明的饲料喂母猪。
这种提高配种效能的方法是相当容易的。除母猪每公斤体重摄取0.1-100μg还原形叶酸外，所有配种的条件均是众所周知的。
在本发明的配种方法中，对母猪食用或喂的持续期如下由于让母猪摄取还原形叶酸的目的是要使在母猪子宫中受精产生的多胚胎尽可能多的安全分娩，如有可能，当然全部最好，所以，为安全起见，应在交配前及交配后的两个月间的时期，开始直至确认多胚胎或胎已发育到安全分娩的程度，如交配后两个月或发育到分娩时为止。
本发明将用下面的实施例来作进一步解释。
实施例1使用甲酰四氢叶酸的效果用体重各为15公斤的0.7年龄的Gettingen小型猪进行实验，其中一头作对比用。
实验前将猪禁食一天，然后用一细软管向实验猪胃强制饲喂0.75%的甲酰四氢叶酸(Sinma公司产)悬浮水液，其量为每公斤体重50mg。为比较起见，除用叶酸(氧化形，Kongo Kagaku公司产)代替甲酰四氢叶酸外，用完全相同的方法进行强制饲喂。
强制饲喂实验物质后1、3、6、9和24小时收集血样，对猪血浆中含的两种活性型叶酸，即四氢叶酸(THF)和5-甲基四氢叶酸(5MF)进行定量分析。收集血样后立即强制饲喂实验物质，对收集的血进行同样的定量分析以作对比。
定量分析的详细情况如下。于收集的0.2ml血样中加入0.5M高氯酸0.2ml，于5，000克下对所得混合物离心2分钟以除去蛋白质。对所得的100μl悬浮液进行高效液相色谱分析，用“苯基-键合相柱4.6mmΦ×150mm”(Irica公司产)进行分析。用乙酸钾缓冲液(20mM，pH3.6)及乙腈所组成的混合物(97.5∶2.5体积比)作移动相，流速为0.8ml/分，用Irica公司产E502型电化学检测仪进行测定，电压达-300mv下进行测定。
测定结果列于下表1中[表1] 从上表1中可以清楚地看出，使用甲酰四氢叶酸以后血浆中THF的浓度立即增加了，然后5MF的浓度也增加了。由于甲酰四氢叶酸，在生物体内新陈代谢变为THF，然后再变为5MF是众所周知的，所以两种活性型叶酸在血中的行为是完全可以理解的。在血浆中THF的浓度在1小时内增加的事实指出甲酰四氢叶酸在体内吸收进行得十分平稳。另一方面，在作对比的使用(经口)非活化型叶酸的实验组中，未观察到血浆中叶酸的浓度值有变化。
实施例2[使用7，8-二氢叶酸的效果]用两支体重约为20公斤的2年龄猪(同样大的，Gettingen小型猪)进行实验。
对实验猪禁食一天后，强制饲喂7，8-二氢叶酸(Sigma公司产)的0.2%抗坏血酸钠溶液，其饲喂量为每公斤体重1或0.2mg。饲喂后收集血样，用与实施例1相同的方法对血浆中含的活性型叶酸进行定量分析。
两支猪血浆中THF和5MF浓度的变化列于下表2中。
如表2所示，虽然5MF的浓度减少到了某种程度，但在饲喂所说量的7，8-二氢叶酸的两支猪均导致了THF浓度显著增加。
实施例3[使用肝粉的效果]除用5个50%肝粉悬浮水液作猪肝粉(含氧化形和还原形叶酸共0.08mg)代替甲酰四氢叶酸悬浮水液对猪强制饲喂外，重复实施例1的步骤，其中所用实验动物也相同。这里也用实施例1的比较实验结果。
其结果列于表3。 从表3中可清楚地看出，在饲喂肝粉的实验中，THF的浓度迅速增加了，5MF的浓度也增加了。据推测这是由于肝粉中含有大量的5MF所致。另一方面，在如实施例1的对比组中，血浆中未观察到5MF的浓度有所增加。当然，即使考虑到5g肝粉中含有0.08g叶酸(包括非活化型叶酸)，体内对叶酸的吸收也是十分好的。
实施例4(制备微生物破裂细胞)(a)培养微生物于500ml烧瓶中倒入50ml培养基，每种培养基均有列于下表4中的组成。经加热消毒后，将列于表5的每种微生物细胞的铂金圈-所用的细菌预先于30℃下的肉汤琼脂培养基上培养24小时，在30℃下，用麦芽汁琼脂培养基，对所用的酵母及霉菌培养48-72小时-在所说培养基中接种，边振动边于30℃下培养24-78小时，培养后，用离心分离法收集细胞。
<p>[表5]
(b)制备微生物破裂细胞把按上述(a)收集的微生物悬浮于同培养基等体积的生理盐水中，然后于100℃下热处理(消毒)10分钟，再用离心法收集细胞。将此细胞按10%(湿重计)浓度悬浮于25mM磷酸盐缓冲(pH7.0)中。
就用细菌制备破裂细胞液而言，于上述制备的细胞悬浮液中，加入0.1%(重量计)蛋白溶菌酶(Sigma公司产)和0.2%(重量计)木瓜蛋白酶(Amano Pharmaceutical公司产)，把此混合物温度维持在37℃下12小时对细胞壁进行消化和破裂以制备破裂细胞液。就用酵母菌制备破裂细胞液而言，加入0.2%(重量计)“Zymolyase 20T”酵母细胞壁消化酶(Seikagaku Kogyo K.K.产)，把此混合物温度维持在37℃下12小时对细胞壁进行消化和破裂得破裂细胞液。用霉菌制备而言，向细胞悬浮液中加入同样量(体积计)直径为Ф0.75mm玻璃珠，用此玻璃珠搅拌器(Beads Beater，Biospec公司产)对细胞破裂处理5次，倾析后除去玻璃珠得悬浮液。
用冷冻-干燥法将这样获得的每种细菌，酵母和霉菌破裂细胞液和悬浮液进行冷冻-干燥得粉剂(根据本发明的母猪饲料添加剂的一种分布形式)。
(c)测定叶酸含量用肠道球菌ATCC 8043，生物检测法测定这样获得的每100g干粉中的叶酸含量。结果列于下表5中。用生物检测法同时对活化型叶酸(还原形)及非活化型叶酸(氢化形)进行测定得其总量。然而，由于在此干粉中所含的叶酸来自微生物，所以这样测得的值主要是基于活性型叶酸。
实施例5机械制备微生物破裂细胞用类似实施例3的方法，培养棒状谷氨酸菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13869和Corynebacterium glutanicum ATCC 13060)，收集其细胞并按10%(重量计)悬浮于20mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)中制细胞悬浮液。
将此细胞悬浮液与相同量的Ф0.1mm玻璃珠混合，用“珠粒搅拌器”重复10次破裂处理，每次1分钟以彻底破裂细胞，其后把所得产品进行离心分离把细胞浆部分分成离心悬浮液和把细胞壁部分分成离心残存物。
把上面所得的每一部分进行冷冻-干燥，用如实施例4的生物检测法测定100g干品中存在的叶酸量。结果列于下表6中。 从表6中可知，叶酸存在于细胞浆部分中。
实施例6(外加叶酸前体进行培养)
按类似实施例4的办法，用棒状谷氨酸酶(Corynebacterium glutamicum ATCC 13869或Corynebacterium glutamicum ATCC 13060)处理所说细胞制备消化细胞产品(破裂产品)。
外加100mg/升对氨基苯甲酸、10mg/升叶酸(氧化形)100mg/升鸟苷培养上述细菌得上述所用细胞。
100g干粉中的叶酸含量列于表7。
实施例7(饲喂微生物破裂细胞的效果)用类似实施例1的方法实验饲喂下述(1)、(2)、和(3)的效果(1)实验例4制备的棒状谷氨酸酶的酶消化产品；(2)实施例4制备的发面酵母IFO 2044酶消化产品；(3)棒状谷氨酸酶ATCC 13869酶消化产品(于培养基中加入对一氨基苯甲酸培养的细胞)。
用4支Gettingen小型同样大小的体重可30公斤的1年龄猪作实验，用量为每1公斤体重50mg(作无水品)。按每1公斤体重用50mg非活性型叶酸进行同样实验以作比较(此叶酸Kongo Kagaku K.K.产)。
结果列于下表8中。
表8中，THF和5MF的量是毫微克/毫升表示的。
从表8中可以看出同对比组(饲喂前)比，酶消化的产品(1)、(2)和(3)中，均观察到血浆中的THF值有所增加。在产品(1)和(2)的情形中，饲喂后THF的浓度迅速增加。同(1)和(3)的产品比，产品(2)中THF浓度增加的速率缓慢。从THF浓度增加的程度看，(3)的产品大于(1)，所以(3)更加有效。非活性型叶酸(对比组)无增加血浆中THF和5MF浓度的作用。
实施例8(牧场实验)用Landrace猪和Large yorkshire猪杂交的60支(其中20支作对比)体重150-200kg的1.5-4年龄杂交母猪进行实验。用实施例4制的棒状谷氨酸酶ATCC 13869破裂细胞(酶消化细胞干品)和实施例5制的相同菌株的破裂细胞(细胞浆部分无水品)作含活性型叶酸产品。
配种前2个月开始连续对20支母猪按300mg/天/母猪的量饲喂加入实施例4制备的含叶酸破裂品的饲料。配种60天后，按实施例1的方法测定血浆中THF和5MF的浓度(实验Ⅰ)。
用实施例5制备的破裂细胞进行类似实验(实验Ⅱ)。用未加任何破裂细胞(对比)的进行类似实验以作对比。
结果列于表9。从该表中可以看出，和对比组相比，用含叶酸的产品(实验Ⅰ和Ⅱ)进行饲喂的实验组血浆中THF和5MF的含量变高了。
在上述每一实验中，饲喂微生物破裂细胞形中的叶酸一直到分娩。
交配后约114天，实验母猪全部分娩，结果如下实验饲喂酶消化细胞组中(实验Ⅰ)，平均分娩11.6支猪崽，在饲喂细胞浆部分干品的实验中(实验Ⅱ)，平均分娩11.8支猪崽。而在对比组中，平均分娩10.8支猪崽。这些结果证明，可通过对母猪饲喂酶消化的细胞和细胞浆部分的干品(本发明的)来提高母猪血浆中THF和5MF的浓度，因此表明这可以提高配种效能。根据本发明，可通过饲喂还原形叶酸来提高母猪血浆中所含的活性型叶酸的浓度，可据此来容易提高配种效能。这可在很大程度上来控制配种。
权利要求
1.一种母猪饲料添加剂，其特征在于所含的还原形叶酸作提高配种效能的活性成份。
2.一种根据权利要求1的母猪饲料添加剂，其特征在于所说还还形叶酸是7，8-二氢叶酸、甲酰四氢叶酸、肝粉、和/或微生物的破裂细胞或细胞抽提物形的。
3.一种根据权利要求2的母猪饲料添加剂，其特征在于所说微生物破裂细胞或细胞抽提物是由其中加有对一氨基苯甲酸、氧化形叶酸、和/或核酸的培养基中培养的细胞制备的。
4.一种母猪饲料，其特征在于所说饲料中含有1-3项权利要求任一项的饲料添加剂。
5.一种提高母猪配种效能的方法，其特征在于向母猪饲喂1-3项权利要求任一项的饲料添加剂或权利要求4中的所说饲料。
全文摘要
本发明涉及一种提高母猪配种效能的方法，提供了一种含7，8-二氢叶酸、甲酰四氢叶酸、肝粉、微生物破裂细胞或细胞抽提物等还原形叶酸作活性成分的母猪饲料添加剂；掺有这种添加剂的母猪饲料；用这种添加剂或掺有这种添加剂的饲料饲喂母猪来提高母猪配种效能的方法。
文档编号A23K1/17GK1105820SQ94118638
公开日1995年8月2日 申请日期1994年10月5日 优先权日1993年10月5日
发明者大西几正, 取出恭彦, 上原章敬, 小久江荣一 申请人:味之素株式会社