地中海荚蒾的组培繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农学技术领域，更具体而言，特别涉及一种地中海荚莲(Viburnumtinus)的组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002]地中海荚莲树冠呈球形，冠径可达2.5?3米。叶椭圆形，深绿色，叶长10厘米，聚伞花序，单花小，仅0.6厘米，花蕾粉红色，花蕾期很长，可达5个多月，盛开后花白色，整个花序直径达10厘米，花期在原产地从11月直到翌春4月。在上海地区10月初便可见细小的黄绿色花蕾，随着花序的伸长，花蕾越来越密集覆盖于枝顶，颜色也逐步加深呈殷红色，远远望去像一片片红云，飘浮在墨绿色的树冠上，格外引人注目，为冬日增添了暖意和生气。盛花期在3月中下旬，红云般的花蕾绽放成雪白一片，在春日的百花园里大放光彩。果卵形，深蓝黑色，径0.6厘米。地中海荚莲，较容易分化花芽，一到两年生幼树常见开花。如果适当控制营养生长，也可使其在夏季或秋季开花，群植则可在一年中常见有花植株。生长快速，枝叶繁茂，耐修剪，适于作绿篱，也可栽于庭园观赏，是长江三角洲地区冬季观花植物中不可多得的常绿灌木。
[0003]但是目前尚未公开有效的地中海荚莲的快速组培繁殖方法。
【发明内容】
[0004]本发明旨在至少解决【背景技术】中存在的问题之一。
[0005]本发明的目的之一在于提供一种地中海荚莲的组培繁殖方法，包括如下步骤:步骤101:外植体的选取与处理:选取地中海荚莲带腋芽茎段作为培养材料，用流水冲洗；在超净台上用酒精表面灭菌，无菌水冲洗，接着用氯化汞灭菌，然后用无菌水冲洗，接种于诱导培养基中；步骤102:诱导培养:使用MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基，将所选取的地中海荚莲带腋芽茎段接种于诱导培养基中；步骤103:增殖培养:将生长于诱导培养基上的外植体转接于MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基进行连续培养；步骤104:生根培养:选择1/2MS培养基、吲哚丁酸、活性炭、蔗糖、琼脂混合后作为生根培养基；步骤105:移栽:将已生根的植株取出，移栽到腐质土:炭渣:锯木肩混合基质上。
[0006]进一步的，所述步骤101中用水冲洗时间为20-30分钟，酒精比例为70%，用表面灭菌时间为30秒，氯化汞比例为0.1%，用氯化汞灭菌的时间为4-12分钟。
[0007]进一步的，所述步骤102中6-苄氨基腺嘌呤的比例为0.5-2.0mg/L，萘乙酸的比例为0.1-0.5mg/L，蔗糖比例为2 %，琼脂比例为0.6%，诱导培养基的pH值为5.8。
[0008]进一步的，所述步骤103中6-苄氨基腺嘌呤的比例为0.1-0.5mg/L，萘乙酸比例为0.1-0.3mg/L，蔗糖比例为2%，琼脂比例为0.6%。
[0009]进一步的，所述步骤104的培养基的培养条件:光强为1500-20001x，温度为23至27°C，光照时间为12h/d，吲哚丁酸比例为0.1-2.0mg/L，活性炭比例为0.1-0.5%，蔗糖比例为2%，琼脂比例为0.6%，生根培养基的pH值为5.8。
[0010]进一步的，所述步骤105中腐质土:炭渣:锯木肩的比例为3:1:1。
[0011]本发明的有益效果在于:(I)地中海荚莲的生产可以在人为控制条件下进行，不受季节、气候条件、土壤、病虫害和农药等因素的影响，严格控制地中海荚莲苗木的质量。
(2)增殖速度快，生产周期短，设备简单，占地面积少，节省人力和物力等，便于工厂化生产。
(3)在组织培养过程中进行了脱毒处理，提高了地中海荚莲苗木的质量，同时该技术方法解决了地中海荚莲快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节，可应用于工厂化生产。(4)可以保存地中海荚莲种质资源，丰富园林绿化树种及其资源。
【附图说明】
[0012]图1所示为本发明实施例一种地中海荚莲的组培繁殖方法的流程图。
【具体实施方式】
[0013]下文将结合具体实施例详细描述本发明。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。
[0014]图1所示为本发明实施例一种地中海荚莲的组培繁殖方法的流程图。
[0015]本发明实施例提供的地中海荚莲的组培繁殖方法，包括如下步骤:
[0016]步骤101:外植体的选取与处理:选取地中海荚莲带腋芽茎段作为培养材料，用流水冲洗；在超净台上用酒精表面灭菌，无菌水冲洗，接着用氯化汞灭菌，然后用无菌水冲洗，接种于诱导培养基中；
[0017]步骤102:诱导培养:使用MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基，将所选取的地中海荚莲带腋芽茎段接种于诱导培养基中；
[0018]步骤103:增殖培养:将生长于诱导培养基上的外植体转接于MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基进行连续培养；
[0019]步骤104:生根培养:选择1/2MS培养基、吲哚丁酸、活性炭、蔗糖、琼脂混合后作为生根培养基；
[0020]步骤105:移栽:将已生根的植株取出，移栽到腐质土:炭渣:锯木肩混合基质上。
[0021]进一步的，所述步骤101中用水冲洗时间为20-30分钟，酒精比例为70%，用表面灭菌时间为30秒，氯化汞比例为0.1%，用氯化汞灭菌的时间为4-12分钟。
[0022]在本发明中，所述步骤102中6-苄氨基腺嘌呤的比例为0.5-2.0mg/L，萘乙酸的比例为0.1-0.5mg/L，蔗糖比例为2 %，琼脂比例为0.6%，诱导培养基的pH值为5.8。所述步骤103中6-苄氨基腺嘌呤的比例为0.1-0.5mg/L，萘乙酸比例为0.1-0.3mg/L，蔗糖比例为2%，琼脂比例为0.6%。所述步骤104的培养基的培养条件:光强为1500-20001x，温度为23至27°C，光照时间为12h/d，吲哚丁酸比例为0.1-2.0mg/L，活性炭比例为0.1-0.5%，蔗糖比例为2%，琼脂比例为0.6%，生根培养基的pH值为5.8。所述步骤105中腐质土:炭渣:锯木肩的比例为3:1:1。
[0023]下边将举出具体例子进行详细说明:
[0024]首先，对于地中海荚莲离体繁殖的启动和增殖培养的过程如下:
[0025](I)外植体的选取与处理
[0026]从植株上剪取带腋芽的枝条，切成Icm左右带腋芽茎段，用流水冲洗20?30min。在超净台上用70%酒精表面灭菌30s，无菌水冲洗I次，接着用0.1 %氯化汞灭菌，分别处理4、6、8、10、12min，然后用无菌水冲洗5次，接种在MS培养基(含蔗糖2 %、琼脂0.6 %，pH5.8)中，每个处理接种50瓶，每瓶接I个外植体。30d后调查各处理的死亡率、污染率和成活率。死亡率(％ )=死亡的外植体数/接种外植体数X 100%;污染率(％ )=污染的外植体数/接种外植体数X 100%;成活率(％ )=成活的外植体数/接种外植体数X 100%。
[0027](2)启动培养
[0028]选取Icm左右带腋芽茎段为试材。以MS培养基为基本培养基，分别附加如下激素浓度(单位:mg/L)组合:6_苄氨基腺嘌0.5+萘乙酸0.1 ;6_苄氨基腺嘌呤0.5+萘乙酸0.3 ；6-苄氨基腺嘌呤0.5+萘乙酸0.5 ；6-苄氨基腺嘌呤1.0+萘乙酸0.1 ;6_苄氨基腺嘌呤1.0+萘乙酸0.3 ；6-苄氨基腺嘌呤1.0+萘乙酸0.5 ；6-苄氨基腺嘌呤2.0+萘乙酸0.1 ;6-苄氨基腺嘌呤2.0+萘乙酸0.3 ；6-苄氨基腺嘌呤2.0+萘乙酸0.5。每种培养基均添加蔗糖2%、琼脂0.6%，pH5.8。每处理接种50瓶，每瓶接I个外植体，30d后统计腋芽萌发率及芽的生长状况。腋芽萌发率=腋芽萌发的外植体数/接种的外植体