数X 100%。
[0029](3)增殖培养
[0030]选取启动培养得到的芽体为试材。以MS培养基为基本培养基，分别附加如下激素浓度(单位:mg/L)组合:6_苄氨基腺嘌呤0.1+萘乙酸0.1 ；6-苄氨基腺嘌呤0.1+萘乙酸0.2 ；6-苄氨基腺嘌呤0.1+萘乙酸0.3 ；6-苄氨基腺嘌呤0.3+萘乙酸0.1 ；6~苄氨基腺嘌呤0.3+萘乙酸0.2 ；6-苄氨基腺嘌呤0.3+萘乙酸0.3 ；6~苄氨基腺嘌呤0.5+萘乙酸0.1 ;
6-苄氨基腺嘌呤0.5+萘乙酸0.2 ；6-苄氨基腺嘌呤0.5+萘乙酸0.3。每种培养基均添加蔗糖2%、琼脂0.6%,pH5.8。每处理接种30瓶，每瓶接I个，30d后统计增殖系数，并观察不定芽生长情况。增殖系数=不定芽总数/接种的芽体数X 100%。上述培养基的培养条件:光强约15001x，温度(25±2)°C，光照时间12h/d。
[0031]关于上述培养的试验结果:
[0032]研宄结果表明，以0.1%氯化汞消毒Smin效果最好，其成活率为70%;最佳腋芽启动培养基是培养基+6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.3mg/L+蔗糖2% +琼脂0.6%，腋芽萌发率为90% ;最有利于不定芽增殖的培养基是MS培养基+6-苄氨基腺嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.2mg/L+蔗糖2% +琼脂0.6%，培养30d，增殖系数高达4.57。
[0033]其次，本发明所使用的实验材料、实验设计，及实验结果如下:
[0034](I)实验材料
[0035]以地中海荚莲无根组培苗为材料，苗高约3cm，生长健壮，叶色浓绿。
[0036](2)实验设计
[0037]培养基对地中海荚莲组培苗生根的影响:将均匀的地中海荚莲组培苗分别接种到培养基、1/2MS培养基和1/4MS培养基上，培养基中均加入0.6%琼脂和2%蔗糖，pH为5.8，于温度(25±2)°〇，光照1211/(1，光强1500-200011条件下培养(下同)。每处理接种组培苗15个，设置3次重复。记录生根开始时间，培养25d后，计算每处理平均生根率(生根苗数/接种苗数)、平均生根数(生根总数/接种苗数)和根的平均长度。
[0038]吲哚丁酸浓度对地中海荚莲组培苗生根的影响:以1/2MS培养基为基本培养基，在其中分别添加0、0.1,0.5、1.0,1.5,2.0mg/L的吲哚丁酸，灭菌后接种均匀的地中海荚莲组培苗进行培养。每处理接种组培苗15个，设置3次重复。记录生根开始时间，培养25d后，计算每处理平均生根率、平均生根数和根的平均长度。
[0039]活性炭对地中海荚莲组培苗生根的影响:以1/2MS培养基为基本培养基，培养基中加入1.0mg/L的吲哚丁酸溶液，同时在其中分别添加0、0.1%,0.3%和0.5%的活性炭，灭菌后接种均匀的地中海荚莲组培苗进行培养。每处理接种组培苗15个，设置3次重复。记录生根开始时间，培养25d后，计算每处理平均生根率、平均生根数和根的平均长度。
[0040](3)试验结果
[0041]研宄结果表明，采用1/2MS培养基添加1.0mg/L吲哚丁酸和0.3%活性炭，地中海荚莲生根效果最好，平均生根率达95.6 %，平均生根数可达4.53条，根的平均长度为2.67cm0
[0042]最后，对于利用上述方式培育出的地中海荚莲，进行试管苗炼苗及移栽的过程如下:
[0043]将瓶苗直接从组培室移入大棚炼苗3d，再揭开瓶盖，在瓶中加人少量水炼苗2d。将炼苗后的健壮苗从瓶内夹出，洗净培养基后放在0.1 %的多菌灵溶液中浸泡I?2h后，移栽在混合基质(腐质土 60% +炭渣20% +锯木肩20% )上，浇足水，搭设小拱棚，盖好薄膜，定期通风、浇水和防病等管理，成活率在85%以上。
[0044]本发明的有益效果:(I)地中海荚莲的生产可以在人为控制条件下进行，不受季节、气候条件、土壤、病虫害和农药等因素的影响，严格控制地中海荚莲苗木的质量。(2)增殖速度快，生产周期短，设备简单，占地面积少，节省人力和物力等，便于工厂化生产。(3)在组织培养过程中进行了脱毒处理，提高了地中海荚莲苗木的质量，同时该技术方法解决了地中海荚莲快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节，可应用于工厂化生产。(4)可以保存地中海荚莲种质资源，丰富园林绿化树种及其资源。
[0045]本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。
【主权项】
1.一种地中海荚莲的组培繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤101:外植体的选取与处理:选取地中海荚莲带腋芽茎段作为培养材料，用流水冲洗；在超净台上用酒精表面灭菌，无菌水冲洗，接着用氯化汞灭菌，然后用无菌水冲洗，接种于诱导培养基中； 步骤102:诱导培养:使用MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基，将所选取的地中海荚莲带腋芽茎段接种于诱导培养基中； 步骤103:增殖培养:将生长于诱导培养基上的外植体转接于MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基进行连续培养； 步骤104:生根培养:选择1/2MS培养基、B弓I噪丁酸、活性炭、鹿糖、琼脂混合后作为生根培养基； 步骤105:移栽:将已生根的植株取出，移栽到腐质土:炭渣:锯木肩混合基质上。
2.如权利要求1所述的地中海荚莲的组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤101中用水冲洗时间为20-30分钟，酒精比例为70 %，用表面灭菌时间为30秒，氯化汞比例为0.1 %，用氯化汞灭菌的时间为4-12分钟。
3.如权利要求2所述的地中海荚莲的组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤102中6-苄氨基腺嘌呤的比例为0.5-2.0mg/L，萘乙酸的比例为0.1-0.5mg/L，蔗糖比例为2 %，琼脂比例为0.6%，诱导培养基的pH值为5.8。
4.如权利要求3所述的地中海荚莲的组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤103中6-苄氨基腺嘌呤的比例为0.1-0.5mg/L，萘乙酸比例为0.1-0.3mg/L，蔗糖比例为2%，琼脂比例为0.6%。
5.如权利要求4所述的地中海荚莲的组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤104的培养基的培养条件:光强为1500-20001X，温度为23至27°C，光照时间为12h/d，吲哚丁酸比例为0.1-2.0mg/L,活性炭比例为0.1-0.5 %，蔗糖比例为2 %，琼脂比例为0.6%，生根培养基的pH值为5.8。
6.如权利要求5所述的地中海荚莲的组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤105中腐质土:炭渣:锯木肩的比例为3:1:1。
【专利摘要】本发明提供了一种地中海荚蒾的组培繁殖方法，包括：外植体的选取与处理：选取地中海荚蒾带腋芽茎段作为培养材料，用流水冲洗；在超净台上用酒精表面灭菌，无菌水冲洗，接着用氯化汞灭菌，然后用无菌水冲洗，接种于诱导培养基中；诱导培养：使用MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基，将所选取的地中海荚蒾带腋芽茎段接种于诱导培养基中；增殖培养：将生长于诱导培养基上的外植体转接于MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、琼脂混合后作为诱导培养基进行连续培养；生根培养：选择1/2MS培养基、吲哚丁酸、活性炭、蔗糖、琼脂混合后作为生根培养基；移栽：将已生根的植株取出，移栽到腐质土：炭渣：锯木屑混合基质上。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104542281
【申请号】CN201410830457
【发明人】王大平
【申请人】重庆文理学院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月29日