下接种到生根培养基中，在培养室内培养4周，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长7cm，生根数为4根，根长5cm，其中，生根培养基为:1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.2 ;培养室内条件与步骤(3)中一致；
(5)炼苗移栽:将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外5天后，炼苗8天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内的温度为26°C，空气湿度为72%，其中:移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:2.5。
[0019]所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养5周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活，再过2周，调查花叶红叶石楠的成活率，成活率为82%。
[0020]实施例3:—种花叶红叶石楠的组培快繁方法，它包括以下步骤:
(I)外植体灭菌:采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗33min，洗涤剂浸泡lOmin，清水冲洗4次，放置在超净工作台上，用73%酒精灭菌20s，0.13%升汞处理6min，用无菌水冲洗5次；(2)初代培养:将灭菌后的幼嫩茎段切割成2.3cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养16天，腋芽伸长2.8cm，其中:初代培养基为:1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L + 蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.0 ;培养室内条件为:光照强度2900LX，光照时间16h/d，温度24°C ；
(3)继代培养:将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室中培养24天，植株的叶腋处丛生芽生成，其中:继代培养基为:NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0 ;培养室内条件与步骤(2)中一致；
(4)生根培养:将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养24天，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6.3cm，生根数为3根，根长3.8cm，其中，生根培养基为:1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.0 ;培养室内条件与步骤
(3)中一致；
(5)炼苗移栽:将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外3天后，炼苗7天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内的温度为24°C，空气湿度为68%，其中:移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:1.8。
[0021]所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养4周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活，再过2周，调查花叶红叶石楠的成活率，成活率为81.5%。
[0022]实施例4:一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，它包括以下步骤:
(I)外植体灭菌:采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗36min，洗涤剂浸泡llmin，清水冲洗5次，放置在超净工作台上，用76%酒精灭菌22s，0.18%升汞处理7min，用无菌水冲洗5次；(2)初代培养:将灭菌后的幼嫩茎段切割成
2.8cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养18天，腋芽伸长3.5cm，其中:初代培养基为:1/2WPM+ IAA0.3mg/L + GA0.5mg/L + 蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.0 ;培养室内条件为:光照强度3100LX，光照时间16h/d，温度25°C ；
(3)继代培养:将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室中培养26天，植株的叶腋处丛生芽生成，其中:继代培养基为:NN69+ZT0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂5g/L, pH 6.0 ;培养室内条件与步骤(2)中一致；
(4)生根培养:将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养26天，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6.8cm，生根数为4根，根长4.5cm，其中，生根培养基为:1/4WPM+NAA0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.0 ;培养室内条件与步骤
(3)中一致；
(5)炼苗移栽:将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外4天后，炼苗7天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内的温度为25°C，空气湿度为70%，其中:移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1:2.2。
[0023]所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养4周后，见到新叶开始生长，表明移栽的花叶红叶石楠成活，再过2周，调查花叶红叶石楠的成活率，成活率为80.9%。
[0024]从实施例1?4得出:本发明利用组织培养技术，建立组培快繁体系，能在短时间得到大量的花叶红叶石楠无菌组培苗，经炼苗移栽后，成活率达到80%以上。
【主权项】
1.一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，它包括以下步骤: (1)外植体灭菌:采集无病虫害的花叶红叶石楠当年生幼嫩茎段，去掉叶片，用清水冲洗30?40min，洗涤剂浸泡8?12min，清水冲洗3?5次，放置在超净工作台上，用70?80%酒精灭菌18?25s，0.1?0.2%升未处理5?8min，用无菌水冲洗4?6次； (2)初代培养:将灭菌后的幼嫩茎段切割成2?3cm茎段，接种到初代培养基中，在培养室内培养2?3周，腋芽伸长2?4cm ; (3)继代培养:将腋芽切下家中到继代培养基中，在培养室中培养3?4周，植株的叶腋处丛生芽生成； (4)生根培养:将生成的丛生芽切下接种到生根培养基中，在培养室内培养3?4周，得到健壮的生根花叶红叶石楠无菌组培苗，植物生长6?7cm，生根数为2?4根，根长3?5cm ； (5)炼苗移栽:将生根强壮的花叶红叶石楠无菌组培苗置于室外2?5天后，炼苗6?8天，洗掉花叶红叶石楠无菌组培苗上的培养基，移栽到大棚苗床上，控制大棚内的温度为22?26°C，空气湿度为65%?72%。
2.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的初代培养基为 1/2WPM+ IΑΑ0.3mg/L + GA0.5mg/L + 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5g/L, pH 5.8 ?6.2。
3.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的继代培养基为 ΝΝ69+ΖΤ0.2mg/L+CPPU 0.5mg/L+0.3g/L 水解酪蛋白 + 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5g/L，pH 5.8 ?6.2ο
4.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的生根培养基为 1/4WPM+NAA0.3mg/L + 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5g/L, pH 5.8 ?6.2。
5.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)中所述的培养室内条件为:光照强度2800LX?3200LX，光照时间14?18h/d，温度 22 ?26。。。
6.根据权利要求1所述的一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，其特征在于，所述的移栽过程中移栽基质为珍珠岩和腐殖土混合，两者重量比为1: 1.5?2.5。
【专利摘要】本发明公开了一种花叶红叶石楠的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域，它包括外植体灭菌，初代培养，继代培养，生根培养和炼苗移栽的步骤。本发明建立了组培快繁体系，培养流程明了，操作简便，经济高效，不受季节气候变化及自然灾害的影响，为花叶红叶石楠的工业化育苗提供了技术支持；经炼苗移栽后，花叶红叶石楠的成活率高，达到80%以上。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104663434
【申请号】CN201510064318
【发明人】马建华, 沈香兰, 王小辉, 赵玲, 马良良, 朱晓菲, 杨小霞
【申请人】巴中七彩林业科技有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月9日