成活率87.5%。
[0018]实施例2
[0019]在秋末冬初季节，选择粗壮多花、颜色较白，且没有病虫害的款冬根状茎，用清水洗净附着泥土，用0.1 %的升汞溶液滴加数滴吐温80浸泡lOmin，再用无菌水冲洗三次，每次5min，切成2cm的小段作为外植体，将外植体接种于诱导培养基在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得丛生芽；所述诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，大量元素减半，并添加浓度为25g/L的蔗糖、浓度为5g/L的琼脂、浓度为1.5mg/L的6-BA、浓度为lmg/L的NAAo丛生芽转接至增殖培养基在光照条件下进行丛生芽继代增殖培养，获得继代增殖丛生芽；所述增殖培养基以MS(1/3NH4N03)培养基作为基本培养基，并添加浓度为25g/L的蔗糖、浓度为6g/L的琼脂、浓度为3mg/L的6-BA、浓度为3.5mg/L的NAA，所述MS(1/3NH4N03)培养基中硝酸铵的浓度为MS培养基中硝酸铵浓度的1/3，其余组分及其浓度与MS培养基相同。继代增殖丛生芽生长至4cm高时，将丛生芽切成单芽，转接至生根培养基在光照条件下进行生根培养，获得试管苗；所述生根培养基以1/2MS培养基作为基本培养基，并添加浓度为20g/L的蔗糖、浓度力6g/L的卡拉胶、浓度为0.3mg/L的细胞激动素、浓度为0.55mg/L的NAA、浓度为0.3mg/L的GA，所述1/2MS培养基所含组分种类与MS培养基相同，但各组分的浓度仅为MS培养基中浓度的1/2。试管苗移栽入体积比为3:1:6的珍珠岩、蛭石、泥炭土混合基质中培养，即得脱毒组培种苗。统计结果显示，生根率94%，增殖倍数13.4，移栽成活率89.3%。
[0020]实施例3
[0021]在秋末冬初季节，选择粗壮多花、颜色较白，且没有病虫害的款冬根状茎，用清水洗净附着泥土，用0.1 %的升汞溶液滴加数滴吐温80浸泡lOmin，再用无菌水冲洗三次，每次3min，切成l-2cm的小段作为外植体，将外植体接种于诱导培养基在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得丛生芽；所述诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，大量元素减半，并添加浓度为20g/L的蔗糖、浓度为3.5g/L的琼脂、浓度为1.2mg/L的6-BA、浓度为0.6mg/L的NAA。丛生芽转接至增殖培养基在光照条件下进行丛生芽继代增殖培养，获得继代增殖丛生芽；所述增殖培养基以MS(1/3NH4N03)培养基作为基本培养基，并添加浓度为20g/L的蔗糖、浓度为5g/L的琼脂、浓度为2mg/L的6-BA、浓度为3mg/L的NAA，所述MS(1/3NH4N03)培养基中硝酸铵的浓度为MS培养基中硝酸铵浓度的1/3，其余组分及其浓度与MS培养基相同。继代增殖丛生芽生长至3.5cm高时，将丛生芽切成单芽，转接至生根培养基在光照条件下进行生根培养，获得试管苗；所述生根培养基以1/2MS培养基作为基本培养基，并添加浓度为18g/L的蔗糖、浓度力4.5g/L的卡拉胶、浓度为0.25mg/L的细胞激动素、浓度为0.45mg/L的NAA、浓度为0.2mg/L的GA，所述1/2MS培养基所含组分种类与MS培养基相同，但各组分的浓度仅为MS培养基中浓度的1/2。试管苗移栽入体积比为3:1:6的珍珠岩、蛭石、泥炭土混合基质中培养，即得脱毒组培种苗。统计结果显示，生根率92%，增殖倍数12.7，移栽成活率88.3%。
【主权项】
1.一种款冬花的快速繁育方法，其特征在于:包括以下步骤: ⑴在秋末冬初季节，选择粗壮多花、颜色较白，且没有病虫害的款冬根状茎，用清水洗净附着泥土，用0.1 %的升汞溶液滴加数滴吐温80浸泡lOmin，再用无菌水冲洗三次，每次2-5min，切成l_2cm的小段作为外植体，将外植体接种于诱导培养基在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得丛生芽；所述诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，大量元素减半，并添加浓度为15-25g/L的蔗糖、浓度为2-5g/L的琼脂、浓度为0.5-1.5mg/L的6-BA、浓度为 0.3-lmg/L 的 NAA ； ⑵将步骤⑴所得丛生芽转接至增殖培养基在光照条件下进行丛生芽继代增殖培养，获得继代增殖丛生芽；所述增殖培养基以MS(1/3NH4N03)培养基作为基本培养基，并添加浓度为15-25g/L的蔗糖、浓度为3-6g/L的琼脂、浓度为l_3mg/L的6-BA、浓度为2_3.5mg/L的NAA,所述MS (1/3NH4N03)培养基中硝酸铵的浓度为MS培养基中硝酸铵浓度的1/3，其余组分及其浓度与MS培养基相同； ⑶当步骤⑵所得继代增殖丛生芽生长至3-4cm高时，将丛生芽切成单芽，转接至生根培养基在光照条件下进行生根培养，获得试管苗；所述生根培养基以1/2MS培养基作为基本培养基，并添加浓度为15-20g/L的蔗糖、浓度力3.5-6g/L的卡拉胶、浓度为0.2-0.3mg/L的细胞激动素、浓度为0.35-0.55mg/L的NAA、浓度为0.1-0.3mg/L的GA，所述1/2MS培养基所含组分种类与MS培养基相同，但各组分的浓度仅为MS培养基中浓度的1/2 ； ⑷将步骤⑶所得试管苗移栽入体积比为3:1:6的珍珠岩、蛭石、泥炭土混合基质中培养，即得脱毒组培种苗。
2.根据权利要求1所述的一种款冬花的快速繁育方法，其特征在于:步骤(I)-⑶中，培养温度为26±1°C，光照强度为1000-15001UX，光照时间为每天10-14小时。
3.根据权利要求2所述的一种款冬花的快速繁育方法，其特征在于:步骤⑴-⑶中，所述光照强度为12501ux，光照时间为每天12小时。
4.根据权利要求1所述的一种款冬花的快速繁育方法，其特征在于:步骤⑵是将丛生芽分割至含有2-3个芽丛，再将其茎基部0.5cm以上部分切除，形成微型团块转接至增殖培养基，接种时先弃去培养基表面的水层，并使芽切口露出培养基表面。
【专利摘要】本发明公开了一种款冬花的快速繁育方法，包括茎尖丛生芽诱导、丛生芽继代增殖、生根培养和试管苗移栽共四个步骤。该方法得到的款冬花幼苗移栽成活率高，且芽苗健壮，生长快。本发明方法周期短，成本低，完全能满足款冬花大面积规模化栽培的需要，具有良好的应用前景。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104839029
【申请号】CN201510299195
【发明人】秦孜昌
【申请人】秦孜昌
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月3日