一种款冬花的快速繁育方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药材育苗技术领域，具体地涉及一种款冬花的快速繁育方法。
【背景技术】
[0002]款冬(Tussilago farfara)，另Ij名冬花、蜂斗菜或款冬蒲公英，属于菊科款冬属植物。花蕾入药，性味辛温，具有润肺下气，化痰止嗽的作用。在《本经》中记载:对“寒束肺经之饮邪喘、嗽最宜”。气味虽温，润而不燥，则温热之邪，郁于肺经而不得疏泄者，亦能治之。故外感内伤、寒热虚实的咳嗽，皆可应用。特别是肺虚久咳不止，最为适用。款冬花蕾通常在10月下旬至12月下旬花尚未出土时采挖。
[0003]随着中药材市场的发展及款冬的现代药理学研宄的深入，款冬的需求量将会不断增加，因此有必要对款冬的人工栽培种植进一步研宄，以适应市场的发展。传统的种植方法育苗数量少，幼苗成活率低，大大降低了款冬花种植业的进步。因此有必要进一步深入研宄与开发种苗栽培技术。由于组织培养法繁殖植物的明显特点是快速，每年可以数以百万倍速度繁殖，因此对一些繁殖系数低，不能用种子繁殖的植物品种的繁殖，尤为意义重大，如发明专利CN103141395B公开的一种山绿茶种苗的快速繁育方法，包括外植体灭菌、初代诱导、继代增殖、生根移栽等技术环节，使山绿茶迅速增殖，短时间内生产大量优质种苗；CN102511396B明公开了一种药用植物玛咖离体快速繁育的方法，主要通过培养基的配制、无菌苗制备、芽簇诱导和生根培养过程实现的；CN103688857B公开了一种快速繁育铁皮石斛的方法。诸如此类的组织培养技术表明植物离体培养可实践性很强，寻求特别适宜于款冬花的组织培养技术可大大提高繁育效率。
【发明内容】
[0004]本发明针对款冬花根状茎繁殖效率低，限制了款冬花产业的快速发展的问题，提供一种款冬花的快速繁育方法，该方法适用于款冬花种苗繁育，推动了款冬花的大面积规模化栽培。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现:
[0006]一种款冬花的快速繁育方法，包括以下步骤:
[0007]⑴在秋末冬初季节，选择粗壮多花、颜色较白，且没有病虫害的款冬根状茎，用清水洗净附着泥土，用0.1 %的升未溶液滴加数滴吐温80浸泡lOmin，再用无菌水冲洗三次，每次2-5min，切成l_2cm的小段作为外植体，将外植体接种于诱导培养基在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得丛生芽；所述诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，大量元素减半，并添加浓度为15-25g/L的蔗糖、浓度为2-5g/L的琼脂、浓度为0.5-1.5mg/L的6-BA、浓度为 0.3-lmg/L 的 NAA ；
[0008]⑵将步骤⑴所得丛生芽转接至增殖培养基在光照条件下进行丛生芽继代增殖培养，获得继代增殖丛生芽；所述增殖培养基以MS(1/3NH4N03)培养基作为基本培养基，并添加浓度为15-25g/L的蔗糖、浓度为3-6g/L的琼脂、浓度为l_3mg/L的6-BA、浓度为2-3.5mg/L的NAA，所述MS (1/3NH4N03)培养基中硝酸铵的浓度为MS培养基中硝酸铵浓度的1/3，其余组分及其浓度与MS培养基相同；
[0009]⑶当步骤⑵所得继代增殖丛生芽生长至3_4cm高时，将丛生芽切成单芽，转接至生根培养基在光照条件下进行生根培养，获得试管苗；所述生根培养基以1/2MS培养基作为基本培养基，并添加浓度为15-20g/L的蔗糖、浓度力3.5-6g/L的卡拉胶、浓度为0.2-0.3mg/L的细胞激动素、浓度为0.35-0.55mg/L的NAA、浓度为0.1-0.3mg/L的GA，所述1/2MS培养基所含组分种类与MS培养基相同，但各组分的浓度仅为MS培养基中浓度的1/2 ；
[0010]⑷将步骤⑶所得试管苗移栽入体积比为3:1:6的珍珠岩、蛭石、泥炭土混合基质中培养，即得脱毒组培种苗。
[0011]进一步，步骤⑴-⑶所述培养温度为26±1°C，光照强度为1000-15001UX，光照时间为每天10-14小时；
[0012]进一步，步骤⑴-⑶所述光照强度为12501UX，光照时间为每天12小时；
[0013]进一步，步骤⑵是将丛生芽分割至含有2-3个芽丛，再将其茎基部0.5cm以上部分切除，形成微型团块转接至增殖培养基，接种时先弃去培养基表面的水层，并使芽切口露出培养基表面。
[0014]本发明的有益效果:本发明系统地进行了款冬花根状茎丛生芽诱导、丛生芽继代增殖、生根培养和试管苗移栽等研宄工作，得到的幼苗移栽成活率高达87.5以上％，且芽苗健壮，生长快；周期短，成本低，完全能满足款冬花大面积规模化栽培的需要，具有良好的应用前景。
【具体实施方式】
[0015]结合实施例对本发明进一步阐述，不构成对本发明的范围限制。
[0016]实施例1
[0017]在秋末冬初季节，选择粗壮多花、颜色较白，且没有病虫害的款冬根状茎，用清水洗净附着泥土，用0.1 %的升汞溶液滴加数滴吐温80浸泡lOmin，再用无菌水冲洗三次，每次2min，切成Icm的小段作为外植体，将外植体接种于诱导培养基在光照条件下进行丛生芽诱导培养，获得丛生芽；所述诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，大量元素减半，并添加浓度为15g/L的蔗糖、浓度为2g/L的琼脂、浓度为0.5mg/L的6-BA、浓度为0.3mg/L的NAA。丛生芽转接至增殖培养基在光照条件下进行丛生芽继代增殖培养，获得继代增殖丛生芽；所述增殖培养基以MS(1/3NH4N03)培养基作为基本培养基，并添加浓度为15g/L的蔗糖、浓度为3g/L的琼脂、浓度为lmg/L的6-BA、浓度为2mg/L的NAA，所述MS (1/3NH4N03)培养基中硝酸铵的浓度为MS培养基中硝酸铵浓度的1/3，其余组分及其浓度与MS培养基相同。继代增殖丛生芽生长至3cm高时，将丛生芽切成单芽，转接至生根培养基在光照条件下进行生根培养，获得试管苗；所述生根培养基以1/2MS培养基作为基本培养基，并添加浓度为15g/L的蔗糖、浓度力3.5g/L的卡拉胶、浓度为0.2mg/L的细胞激动素、浓度为0.35mg/L的NAA、浓度为0.lmg/L的GA，所述1/2MS培养基所含组分种类与MS培养基相同，但各组分的浓度仅为MS培养基中浓度的1/2。试管苗移栽入体积比为3:1:6的珍珠岩、蛭石、泥炭土混合基质中培养，即得脱毒组培种苗。统计结果显示，生根率90%，增殖倍数11.6，移栽