in后，每隔lmin分别对进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘进行统计，并 累计20min内进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘数量。结合体视显微镜，通过 观察新生幼潘的第一触角特征区分雌雄。
[0028] 4)步骤3)的统计结果如下：左边三支试管4中的30只雄性幼潘全部进入B体系； 而右边三支试管4中的30只雌性幼潘全部进入A体系。
[0029] 实施例2
[0030] 一种快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，包括以下步骤：
[0031] 1)诱导简易装置左边三支试管4分别放置有5只24h内4°C诱导产生的新生雄性 幼潘和5只24h内4°C诱导产生的新生雌性幼潘。向试管4内加入16. 5cm高的GFID培养 基，新生幼潘在GFID培养基中适应lh，将试管4底部以上2. 5cm部分称为B体系，试管4液 面以下14cm部分称为A体系，其中GFID培养基包括浓度分别为192mg/L、120mg/L、120mg/ L、8mg/L 的 NaHC03、CaS04 ·2Η20、]\%504、Κ(：1，其 pH 值和硬度分别为 7· 6 ~8· 0、160 ~180mg CaC03/L ；
[0032] 2)将步骤1)中的试管4放置于诱导简易装置的试管架2上，把诱导简易装置在光 照强度为30 μΕΛπι2. s)、温度为20°C条件下放置24h ;
[0033] 3)利用诱导简易装置的黑色塑料膜3将经过步骤2)处理的新生幼潘置于黑暗环 境中5min后，每隔lmin分别对进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘进行统计，并 累计20min内进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘数量。结合体视显微镜，通过 观察新生幼潘的第一触角特征区分雌雄。
[0034] 4)步骤3)的统计结果如下：无论哪只试管4,所有的雄性幼潘全部进入B体系，所 有雌性幼潘全部进入A体系。
[0035] 实施例3
[0036] 一种快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，包括以下步骤：
[0037] 1)诱导简易装置左边三支试管4分别放置有10只24h内压裂返排液诱导产生的 新生雄性幼潘，右边三支试管4分别放置有10只24h内压裂返排液诱导产生的新生雌性幼 潘。向试管内加入16. 5cm高的GFID培养基，新生幼骚在GFID培养基中适应lh，将试管4 底部以上2. 5cm部分称为B体系，试管4液面以下14cm部分称为A体系，其中GFID培养基 包括浓度分别为 192mg/L、120mg/L、120mg/L、8mg/L 的 NaHC03、CaS04 · 2H20、MgS04、KC1，其 pH值和硬度分别为7· 6~8· 0、160~180mg CaC03/L ;
[0038] 2)将步骤1)中的试管4放置于诱导简易装置的试管架2上，把诱导简易装置在光 照强度为30 μΕΛπι2. s)、温度为20°C条件下放置24h ;
[0039] 3)利用诱导简易装置的黑色塑料膜3将经过步骤2)处理的新生幼潘置于黑暗环 境中5min后，每隔lmin分别对进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘进行统计，并 累计20min内进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘数量。结合体视显微镜，通过 观察新生幼潘的第一触角特征区分雌雄。
[0040] 4)步骤3)的统计结果如下：左边三支试管4中的30只雄性幼潘全部进B体系； 而右边三支试管4中的30只雌性幼潘全部进入A体系。
[0041] 实施例4
[0042] 一种快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，包括以下步骤：
[0043] 1)诱导简易装置左边三支试管4分别放置有5只24h内压裂返排液诱导产生的新 生雄性幼潘和5只24h内压裂返排液诱导产生的新生雌性幼潘。向试管4内加入16. 5cm 高的GFID培养基，新生幼潘在GFID培养基中适应lh，将试管4底部以上2. 5cm部分称为B 体系，试管4液面以下14cm部分称为A体系，其中GFID培养基包括浓度分别为192mg/L、 120mg/L、120mg/L、8mg/L 的 NaHC03、CaS04 · 2H20、MgS04、KC1，其 pH 值和硬度分别为 7. 6 ~ 8. 0、160 ~180mg CaC03/L ;
[0044] 2)将步骤1)中的试管4放置于诱导简易装置的试管架2上，把诱导简易装置在光 照强度为30 μΕΛπι2. s)、温度为20°C条件下放置24h ;
[0045] 3)利用诱导简易装置的黑色塑料膜3将经过步骤2)处理的新生幼潘置于黑暗环 境中5min后，每隔lmin分别对进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘进行统计，并 累计20min内进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘数量。结合体视显微镜，通过 观察新生幼潘的第一触角特征区分雌雄。
[0046] 4)步骤3)的统计结果如下：无论哪只试管4,所有的雄性幼潘全部进B体系，所有 雌性幼潘全部进入A体系。
[0047] 表1大型潘有性生殖的诱导参数
[0050] 注：培养液为M4培养液，所述M4培养液包括浓度分别为2. 8595mg/L Η3Β03、 0.3605mg/L MnCl2.4H20、0.306mg/L LiCl、0.071mg/L RbCl、0.152mg/L SrCl2.6H20、 0.016mg/L NaBr、0.063mg/L Na2Mo04.2H20、0.01675mg/L CuCl2.2H20、0.013mg/L CaCl2· 2H20、0.Olmg/L ZnCl2、0. 00325mg/L CoCl2· 6H20、0. 00219mg/L KI、0. 000575mg/ L Na2Se03、2. 5mg/L NH4V03、0. 9955mg/L Na2EDTA · 2H20、293. 8mg/L FeS04 · 7H20、123. 3mg/ L MgS04 · 7H20、5. 8mg/L KC1、64. 8mg/L NaHC03、10mg/L Na2Si03 · 9H20、0. 274mg/L KH2P04、 0· 143mg/L NaN03、0. 184mg/L K2HP04、0.075mg/L 盐酸硫胺、0.001mg/L 氰钴胺、0.00075mg/L 钙长石。
[0051] 其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描 述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经 创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
【主权项】
1. 一种快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 将待鉴定的新生雌性和/或雄性幼潘放置于诱导简易装置中的试管内，向试管内加 入16. 5cm高的GFID培养基，新生雌性和/或雄性幼骚在GFID培养基中适应lh，将试管底 部以上2. 5cm部分称为B体系，试管液面以下14cm部分称为A体系，其中GFID培养基包括 浓度分别为192mg/L、120mg/L、120mg/L、8mg/L的NaHC03、CaS04·2H20、MgS04、KC1，其pH值 和硬度分别为7. 6~8. 0、160~180mgCaC03/L; 2) 将步骤1)中的试管放置于诱导简易装置的试管架上，把诱导简易装置在光照强度 为30 μΕ/(ηι2. s)、温度为20°C条件下放置24h ; 3) 利用诱导简易装置的黑色塑料膜将经过步骤2)处理的新生幼潘置于黑暗环境中 5min后，每隔lmin分别对进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘进行统计，并累计 20min内进入A体系或B体系中的雄性幼潘与雌性幼潘数量； 4) 步骤3)的统计结果为所有雌性幼潘进入A体系，所有雄性幼潘进入B体系。2. 根据权利要求1所述的快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，其特征在于：所述步骤1) 中，待鉴定的新生雄性幼潘是大型潘在温度为4°C、种群密度为10只/100mL培养液、喂食浓 度为0. 2mg (V (潘· d)、光照周期为12h、黑暗处理时间为12h的诱导条件下进行有性生殖 得到的。3. 根据权利要求1所述的快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，其特征在于：所述诱导简 易装置包括光照培养箱（1)，所述光照培养箱（1)内放置有试管架（2)，在所述试管架（2) 周围包裹有黑色塑料膜（3)，所述试管架（2)上放置有6支的试管（4)，所述光照培养箱（1) 在试管（4)上方处设置有光照强度可以调整的光源（5)。4. 根据权利要求3所述的快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，其特征在于：所述试管（4) 是口径为2. 5cm、长为20cm的玻璃试管。5. 根据权利要求3所述的快速鉴别大型潘幼潘性别的方法，其特征在于：所述光源（5) 设置在试管（4)顶端上方15cm处。
【专利摘要】本发明公开了一种快速鉴别大型溞幼溞性别的方法，将新生幼溞放置于诱导简易装置中的试管内，向试管内加入16.5cm高的GFID培养基，新生幼溞在GFID培养基中适应1h，将试管底部以上2.5cm部分称为B体系，试管液面以下14cm部分称为A体系；把诱导简易装置在光强为30μE/(m2.s)、温度为20℃条件下放置24h，置于黑暗环境中5min后，每隔1min分别对进入A体系或B体系中的雄溞与雌溞进行统计，计数20min，并累计该时段内进入A体系或B体系的雄溞或雌溞数量，结果为所有雌溞进入A体系，所有雄溞进入B体系。本发明可以快速鉴别新生幼溞的性别，解决新生幼溞性别鉴别工作量大、耗时过长的问题。
【IPC分类】A01K67/033, G06F19/00
【公开号】CN105284740
【申请号】CN201510708475
【发明人】贺美, 许玫英, 梅承芳, 高亮
【申请人】长江大学, 广东省微生物研究所
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月27日