杂种落叶松微扦插育苗方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种杂种落叶松微扦插育苗方法，属于林业遗传育种领域。
【背景技术】
[0002] 落叶松是松科的落叶乔木，主要分布在我国东北、内蒙古林区以及华北、西南的高 山地区，是我国重要速生用材树种和生态造林树种，具有适应性强、早期速生、成林快、病虫 害少等优点。日X长杂种落叶松由于聚合了日本落叶松母本的速生性和长白落叶松父本 的环境适应性，从而在生长、抗性等方面表现出明显的超亲杂种优势。但受种间花期不遇、 种子丰欠年等因素影响，通过人工制备杂种种子方式无法满足生产需要。
[0003]国内外对华北（L.principis-rupprechtiiMayr)、长白（L.olgensisHenry)、兴 安（L.gmelinii(Rupr. )Rupr.)、日本（L.kaempferiLamb.Carr.)等落叶松的体胚发生、芽 增殖和植株生根等组织离体培养技术进行了研究（吕守芳，2005;吴克贤，1996;齐力旺， 1996 ;Ewald，2007 ;Lin，2004)，而培养材料的基因型和培养基成分是影响落叶松组培成功 与否的关键。以芽为外植体的直接发生途径获得的植株具有遗传稳定性好、自然变异频率 低、适应性强和移栽成活率高等优点。但芽增殖系数和不定根诱导率低一直是制约落叶松 器官直接再生途径一一组织培养的主要因素。
[0004] 无性繁殖技术的发展，为杂种利用开辟了一条高效新途径，并形成了以人工控制 授粉有性配制目标杂种为基础、采穗圃经营为主体、扦插繁殖利用为手段的落叶松杂种利 用技术体系（王笑山，2000)，突破落叶松插穗生根困难的技术瓶颈，实现了落叶松无性扦 插繁殖。但落叶松扦插需要用当年生半木质化嫩枝作插穗，目前生产中的技术应用只能在 每年的6月下旬至7月初进行一次性户外扦插，受到树龄、部位、季节和取材数量等多种因 素的限制，扦插育苗数量无法满足市场对于落叶松良种种苗的需求。
[0005]因此，需要开发一种新的落叶松扦插育苗方法，提高不定根诱导率和芽增殖系数， 从而大量培育具有超亲杂种优势的落叶松种苗，满足市场需求。
【发明内容】
[0006] 根据上述领域存在的不足和需求，本发明提供一种杂种落叶松微扦插育苗方法， 该方法提高了嫩枝的不定根生根率，有效缩短了育苗周期。
[0007] 本发明请求保护的技术方案如下：
[0008] -种杂种落叶松微扦插育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0009] (1)准备扦插材料：从日本落叶松X长白落叶松杂种无性系植株上采集当年生嫩 枝，灭菌；
[0010] (2)诱导生根：采用两步生根法进行，S卩：将灭菌后的嫩枝在含有生长素的改良L9 培养基中进行生根诱导后，再将嫩枝转入不含生长素的改良"培养基中进行生根培养，整 个过程在光照培养箱中进行；
[0011] 所述含有生长素的改良L9培养基的配方为：NAA2.Omg/L、IBAO. 25mg/L、 ΚΝ03633· 33mg/L、NH4N03550mg/L、ΚΗ2Ρ0456· 67mg/L、CaCl2 · 2H20 110. 67mg/L、MgS04 · 7H20 60. 18mg/L、FeNaEDTA36. 70mg/L、H3B036. 20mg/L、ZnS04 ·Η20 8. 60mg/L、MnS04 ·Η20 16. 90mg/ L、Na2M〇04 · 2H20 0· 25mg/L、KI0· 83mg/L、CuS04 · 5H20 0· 025mg/L、CoCl2 · 6H20 0· 025mg/ L、谷氨酸5mg/L、半胱氨酸5mg/L、甘氨酸25mg/L、鹿糖5000mg/L、琼脂5000mg/L，pH值为 6. 5 ；
[0012] 所述不含生长素的改良L9培养基的配方：ΚΝ0 3633· 33mg/L、NH4N03550mg/L、 ΚΗ2Ρ0456· 67mg/L、CaCl2 · 2H20 110. 67mg/L、MgS04 · 7H20 60. 18mg/L、FeNaEDTA36. 70mg/L、 H3B036. 20mg/L、ZnS04 ·H20 8. 60mg/L、MnS04 ·H20 16. 90mg/L、Na2M〇04 · 2H20 0· 25mg/L、KI 0· 83mg/L、CuS04·5H20 0· 025mg/L、CoCl2·6H20 0· 025mg/L、谷氨酸5mg/L、半胱氨酸5mg/ L、甘氨酸25mg/L、鹿糖5000mg/L、琼脂5000mg/L，pH值为6. 5。
[0013] 所述当年生嫩枝采自日本落叶松X长白落叶松杂种无性系的两年生无性系植 株。
[0014] 所述气候室以白炽灯为光源，光照期为每天16小时，光照强度2000~30001x，温 度23±2°C，空气湿度50%。
[0015] 所述采集当年生嫩枝是指剪取长度为3_8cm的嫩枝作为插穗，并剪去嫩枝基部往 上2cm内的叶片。
[0016] 所述灭菌的步骤如下：先将嫩枝浸入洗涤液摇晃浸泡20-30min，刷洗后流水冲洗 20-30min;然后在无菌条件下用体积百分比为15%的次氯酸钠溶液对嫩枝进行灭菌处理 8- 10min，再用灭菌水清洗嫩枝3次以上。
[0017] 所述诱导生根步骤中，所述嫩枝在含有生长素的改良L9培养基中进行生根诱导的 诱导期为7-10天，在不含生长素的改良L9培养基中进行生根培养的培养期为15天。
[0018]所述光照培养箱昼间培养温度为22°C，光照强度1500~20001x，夜间培养温度为 17°C，光暗周期时长为16/8小时。
[0019] 上述方法，在准备扦插材料之前还包括构建微型采穗圃，以日本落叶松X长白落 叶松无性系为繁殖材料，将两年生无性系植株培养在气候室内，作为采穗母株，构建室内微 型采穗圃。
[0020] 还包括如下移苗步骤：当组培苗根长达2. 0cm~3. 0cm时，将生根苗从光照培养箱 移至育苗室，10-15天后移栽至营养土中培养；有嫩梢长出时，将其移栽到大田；
[0021] 所述营养土的配方为草炭土 ：珍珠岩：干鸡粪=6 :2 :2 ;
[0022] 所述育苗室的培养条件为：光照6000Lx，16h光照，8h黑暗，室温21°C。
[0023] 用于杂种落叶松微扦插育苗的生根培养基，其配方如下：KN03633. 33mg/L、 NH4N03550mg/L、ΚΗ2Ρ0456· 67mg/L、CaCl2 · 2H20 110. 67mg/L、MgS04 · 7H20 60. 18mg/L、 FeNaEDTA36· 7〇mg/L、H3B〇36· 2〇mg/L、ZnS04 ·H20 8. 6〇mg/L、MnS04 ·H20l6· 9〇mg/L、 Na2M〇04 · 2H20 0· 25mg/L、KI0· 83mg/L、CuS04 · 5H20 0· 025mg/L、CoCl2 · 6H20 0· 025mg/L、谷 氨酸5mg/L、半胱氨酸5mg/L、甘氨酸25mg/L、鹿糖5000mg/L、琼脂5000mg/L，pH值为6. 5。
[0024] 本发明在系统总结连续多年的无性系扦插生根试验和连续多年的野外无性系评 比试验的基础上，以中国林科院林业所选育出的生长性状和扦插生根能力兼优的日X长 杂种无性系日永8X长混18-10为研究对象，选取该无性系的嫩枝外植体为材料，进行器官 直接再生组织离体培养技术的研究，摸索适合杂种落叶松嫩枝生长、芽增殖和不定根诱导 的最佳培养基，将杂种落叶松插穗生根率提高至85%以上，有效缩短了优良种植材料的育 苗周期，为构建杂种落叶松高效、稳定的组织培养再生体系，规模化生产杂种落叶松组培苗 木提供