一种毛叶铁线蕨的组培繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及藤类植物的繁殖方法，具体是一种毛叶铁线藤的组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 铁线藤属(Adiantum)植物有200多种，主要分布于热带和溫带。此属植物中许多具 有较高的观赏价值，其性耐阴，可作庭园绿化阴湿处点缀，也可作室内切叶或盆栽观赏，毛 叶铁线藤为其中一种，其高约20~40cm，叶簇生，叶柄深栗色，有光泽，密被栋色长柔毛，顶 端分裂成2枝W上，小叶暗绿色，新叶黄绿色至浅红色，四季常绿，耐阴性极强，可在立体绿 化背阴面及室内绿化应用，具有良好的市场开发价值。
[0003] 目前关于铁线藤属植物繁殖的研究多见于铁线藤、扇叶铁线藤W及荷叶铁线藤， 未见关于毛叶铁线藤组培繁殖的研究。而组培繁殖是藤类生产的主要途径，其具有不受季 节限制，繁殖速度快、数量巨大的优势，许多铁线藤属植物的抱子离体培养研究只能获得大 量原叶体，难W获得幼抱子体。因此，建立毛叶铁线藤的组培繁育技术体系将有助于规模化 生产，W促进其在园林绿化中的广泛应用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种能简易快速繁殖毛叶铁线藤的方法。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用W下技术方案： 一种毛叶铁线藤的组培繁殖方法，所述方法包括W下步骤： 51、 收集毛叶铁线藤抱子，进行消毒； 52、 毛叶铁线藤抱子用无菌水配成悬浮液，加入到抱子萌发培养基中，培养化~35d，抱 子萌发并发育成片状原叶体； 53、 将片状原叶体转接至增殖培养基中培养25~35d，再转入抱子体诱导培养基中培养 30~40d，形成幼抱子体； 54、 将幼抱子体团分离成单株幼抱子体或具4~5株幼抱子体的小丛，与多菌灵消毒液 混合，然后将混合液均匀倒入±壤基质中培养。
[0006] 进一步地，所述步骤Sl的消毒具体为:将毛叶铁线藤抱子用滤纸包好，在无菌水里 浸泡3~5min，再在升隶溶液中浸泡3~4min，最后用无菌水漂洗干净。
[0007] 进一步地，所述抱子萌发培养基每升含6~7g琼脂、20~25g薦糖，其余为MS或Knop 培养基，pH为5.8~6.0。
[000引进一步地，所述步骤S2、S3的培养条件都是：溫度25~30°C，光照强度2000~ 25001X，光照时间 12h/d。
[0009] 进一步地，所述增殖培养基每升含0.2~Img 6-BA、0.1~0.5mg NAA、6~7g琼脂、 20~25g薦糖，其余为MS培养基，抑为5.8~6.0。
[0010] 6-BA是6-苄基腺嚷岭，NAA是糞乙酸。
[0011] 进一步地，所述抱子体诱导培养基每升含6~7g琼脂、20~25g薦糖，其余为MS培养 基，pH 为 5.8 ~6.0。
[0012] 进一步地，所述±壤基质由泥炭±、珍珠岩和赔石按体积比1:1:1混合得到。
[0013] 进一步地，所述步骤S4的混合液为每200mL浓度为O.lwt%的多菌灵消毒溶液中含2 块幼抱子体团的分离物。
[0014] 可W按照W下步骤繁殖毛叶铁线藤： (1) 抱子采集及消毒处理:收集毛叶铁线藤抱子用滤纸包好，在无菌水里浸泡3~5min， 再在Ig/L升隶溶液中浸泡3~4min，最后用无菌水漂洗干净，最好漂洗4~5次，备用； (2) 抱子接种及诱导萌发:消毒过的毛叶铁线藤抱子用无菌水配成悬浮液，加入到抱子 萌发培养基中，培养25~35d后，抱子萌发，并从绿色丝状体再发育成大约0.3~0.4cm的片状 原叶体;培养条件是:溫度为25~30°C，光照强度2000~25001X，光照时间12h/d;抱子萌发 培养基每升含6~7g琼脂、20~25g薦糖，其余为MS或Knop培养基，抑为5.8~6.0; (3) 原叶体增殖培养:将片状原叶体转接至增殖培养基中培养25~35d，所得增殖原叶体 团直径为Icm左右;培养条件是:溫度为25~30°C，光照强度2000~25001X，光照时间12h/d; 所述增殖培养基每升含0.2~Img 6-BA、0.1~0.5mg NAA、6~7g琼脂、20~25g薦糖，其余为 MS培养基，pH为5.8~6.0; (4) 幼抱子体诱导：将增殖原叶体转入抱子体诱导培养基中培养30~40d，形成幼抱子 体，且生长1~3片幼抱子叶;培养条件是:溫度为25~30°C，光照强度2000~25001X，光照时 间12h/d;所述抱子体诱导培养基每升含6~7g琼脂，20~25g薦糖，其余为MS培养基，抑为 5.8~6.0; 巧)组培苗移栽管理:将幼抱子体团从瓶内取出，分离成单株幼抱子体或具4~5株幼抱 子体的小丛，与多菌灵消毒液混合，混合液为每200血浓度为O.lwt%的多菌灵消毒溶液中含 2块1~1.5cm幼抱子体团的分离物，然后将混合液均匀倒入±壤基质中培养，并覆盖薄膜保 湿，栽植后15d内保持覆膜，W后可打开薄膜透气，30d后可完全掲开薄膜，但每天喷雾保湿； 上壤基质由泥炭上、珍珠岩和赔石按体积比1:1:1混合得到，并用O.lwt%多菌灵消毒液诱 透。
[0015] 本发明具有W下有益效果： 本发明通过将消毒过的毛叶铁线藤抱子在抱子萌发培养基中进行培养得到片状原叶 体，然后将片状原叶体在增殖培养基中进行激素刺激诱导，再转回不含激素的抱子体诱导 培养基中培养，即可获得大量幼抱子体苗，随后出瓶移植。全过程只需要转接两次，无需抱 子体继代培养和生根培养两个阶段，缩短了培养周期，从抱子萌发到幼抱子体形成只需90d 左右;本发明投入少，培养基成分简单，短时间内获得大量毛叶铁线藤种苗，且炼苗和移栽 同步进行，幼抱子体苗成活率可达100%，可使毛叶铁线藤成为优良观叶植物。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明： W下实施例所用MS培养基，1L培养基里包含NH4NO3 1650mg，KN〇3 1900 mg，K出P〇4 170 mg，MgS〇4 ? 7也0 370 mg'C^Cb ? 2也0 440 mg，MnS〇4 ? 4也0 22.3 mg，ZnS〇4 ? 7也0 8.6 mg， H3BO3 6.2 mg，KI 0.83 mg，Na2Mo〇4 ? 2也0 0.25 mg，CuS〇4 ? 5也0 0.025 mg，CoCl2 ? 6也0 0.025 mg，FeS〇4*7也0 27.8 mg，Na2邸TA 37.3 mg，甘氨酸2 mg，VBi 0.4 mg，VB6 0.5 mg， 烟酸0.5 mg，肌醇100 mg。
[0017]所用Knop培养基，1L培养基里包含KN03 125 mg，K此P〇4 125 mg，MgS〇4 ? 7此0 125 mg，(MN〇3)2 ? 4出0 500 mg。
[001引实施例1 按照W下步骤繁殖毛叶铁线藤： (1)抱子采集及消毒处理：当毛叶铁线藤的抱子囊开始呈现褐色，将其抱子叶剪下，于 室内阴惊，待抱子散落收集待用。收集毛叶铁线藤抱子用滤纸包好，在超净工作台上用无菌 水里浸泡3min，再在Ig/L升隶溶液中浸泡3min，最后用无菌水漂洗4次，备用。
[0019] (2)抱子接种及诱导萌发:将MS培养基、6g琼脂和20g薦糖配制成抑5.8~6.0的抱 子萌发培养基IL，分装至200mL培养瓶中，每瓶约加入培养基20mL，室溫冷却后待用。将消毒 过的毛叶铁线藤抱子用无菌水配成悬浮液，用无菌的移液枪吸取ImL加入到准备好的培养 瓶中，轻微晃动培养瓶，使抱子均匀分布在萌发培养基上。培养条件是:溫度为25~30°C，光 照强度2000~25001X，光照时间12h/d。培养7d后抱子开始萌发，培养基显绿，抱子形成绿色 丝状体，培养30d后从绿色丝状体发育成致密的、大约0.3~0.4cm的片状原叶体。
[0020] (3)原叶体增殖培养:将MS培养基、6g琼脂、20g薦糖、0.2mg 6-BA、0.1mg NAA配制 成抑5.8~6.0的增殖培养基IL，分装至200mL培养瓶中，每瓶约加入培养基20mL，室溫冷却 后待用。将片状原叶体转接至增殖培养基，培养条件是:溫度