一种大苞水竹叶的组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种植物繁殖方法，特别是一种大巷水竹叶组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 大巷水竹叶，为大巷水竹叶科植物大巷水竹叶(Euphorbia pekinensis Rupr.)， 多年生常绿草本。根圆柱状，长20-30厘米。花期5-8月，果期6-9月。广布于全国（除台湾、云 南、西藏和新疆），北方尤为普遍。生于山坡、灌丛、路旁、荒地、草丛、林缘和疏林内。根入药， 具有较高的药用价值，约100元/公斤，具有逐水通便，消肿散结，主治水肿，并有通经之效， 用于治疗慢性肾炎，治疗晚期血吸虫病腹水或其他肝硬变腹水等症。近年来其资源遭到了 严重破坏，且对生长环境要求苛刻，随着市场需求量的不断增加，野生大巷水竹叶资源溯临 枯竭了，生产上难W实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术，可W有效快速地提高大 巷水竹叶种苗的繁殖速度和质量，实现大巷水竹叶优质种苗的工厂化育苗，W满足生产上 的需要。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种大巷水竹叶组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出 大量适合移栽的优良大巷水竹叶种苗。
[0004] 本发明通过W下技术方案达到上述目的：一种大巷水竹叶组织培养快速繁殖方 法，包括W下步骤： (1) 外植体的选择与消毒:取大巷水竹叶顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡 5~lOmin、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 S、添加了2-3滴吐溫-20的 0.1% Hgcb消毒8~lOmin、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体， 其中无菌水为经高压灭菌的蒸馈水； (2) 顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基中， 在培养溫度为23~26°C，光照强度1400~20001UX，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30 天，侦踩分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0. . 4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的6-BA、1.0 ~2. Omg/L的NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的抑值为5.8; (3) 丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养 溫度23~26°C，光照强度1400~20001UX，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健 壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的抑值为5.8; (4) 健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养溫 度23~26°C，光照强度1400~20001UX，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根 的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦 糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的抑值为5.8。
[0005] 采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量大巷水竹 叶的优质种苗，有效解决了大巷水竹叶的规模化育苗问题。
【具体实施方式】
[0006] 下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0007] -种大巷水竹叶组织培养快速繁殖方法，包括W下步骤： (1) 外植体的选择与消毒:取大巷水竹叶顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡 5~lOmin、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2(添加了2~3 滴吐溫-20)消毒8~lOmin、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体， 其中无菌水为经高压灭菌的蒸馈水； (2) 顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基中， 在培养溫度为23~26°C，光照强度1400~20001UX，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30 天，侦踩分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0. . 4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的6-BA、1.0 ~2. Omg/L的NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的抑值为5.8，观察发现，培养 基中6-BA和NAA浓度增加，大巷水竹叶丛生芽数均增加；结果，在培养基中添加0.2mg/L的 KT、2. Omg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA丛生芽效果最好。
[0008] 表1不同激素对大巷水竹叶组织培养快速繁殖效果的影响
注:芽增殖倍数=(30天后芽数一接种时芽数)/接种时芽数 (3) 丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养 溫度23~26°C，光照强度1400~20001UX，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健 壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的抑值为5.8，观察发现，培养基中添加1. Omg/L的6-BA和0.6mg/ L的IAA时壮苗效果最好，株高达到5.37cm。
[0009] 表2不同激素水平对大巷水竹叶丛生芽壮苗效果的影响
(4)健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养溫 度23~26°C，光照强度1400~20001UX，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根 的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦 糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的抑值为5.8，观察发现，培养基中IAA浓度增加，组培苗的 生根率也增加；培养基中添加2 . Omg/L的IBA和1. Omg/L的IAA生根效果最好，生根率达 93.1%，平均根长达到4.49畑1。
[0010] 表3不同激素水平对大巷水竹叶组培苗生根效果的影响
备注:6-BA(6-节氨基嚷岭），NAA(糞乙酸），KT(激动素），IAA(吗I噪乙酸），AC(活性 炭)。
【主权项】
1. 一种大苞水竹叶组织培养快速繁殖方法，其特征在于:该方法包括以下步骤： (1) 外植体的选择与消毒:取大苞水竹叶顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡 5~lOmin、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、添加了2-3滴吐温-20的 0.1 % H g c 12消毒8~10 m i η、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体， 其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水； (2) 顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基中， 在培养温度为23~26° C，光照强度1400~20001ux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30 天，侧芽分化后获得丛生芽;其中MS培养基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的6-BA、1.0 ~2 · Omg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3 · 8~4 · 8g/L的琼脂，培养基的pH值为5 · 8; (3) 丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养 温度23~26° C，光照强度1400~20001ux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健 壮植株;其中MS壮苗培养基中含0 · 5~1 · Smg/l的6-BA、0 · 2~0 · 6mg/L的IAA、20~30g//L蔗糖和 3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8; (4) 健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温 度23~26°C，光照强度1400~20001ux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根 的完整植株;其中MS生根培养基中含0 · 5~1 · Smg/l的IAA、1 · 0~2 · 0 mg/L的IBA、25~30g/L蔗 糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
【专利摘要】一种大苞水竹叶组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：取大苞水竹叶顶芽作为外植体进行消毒；将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量大苞水竹叶的优质种苗，有效解决了大苞水竹叶的规模化育苗问题。<b />
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105660413
【申请号】CN201610108545
【发明人】张占江, 李翠, 赵以民, 缪剑华, 韦莹, 韦坤华, 李林轩, 王一诺, 肖冬
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月29日