扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及植物组织培养技术领域，特别是设及扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方 法。
【背景技术】
[0002] 扁桃斑鸠菊(Vernonia amygdalina Del.)又名桃叶斑鸠菊、杏叶斑鸠菊、神奇树、 苦树、南非树、南非叶，为菊科斑鸠菊属植物，原产于非洲。扁桃斑鸠菊叶子可W安全食用， 在尼日利亚等地被当作一种蔬菜。其叶片具有独特的气味和苦涩感，因而常被称为苦叶，可 入药，在治疗肿瘤尤其是防治乳腺癌、降血压方面极具潜力。
[0003] 扁桃斑鸠菊在东南亚及台湾等地民间应用较多，而中国大陆则相对比较陌生，近 年来两广地区陆续有引进，但母本数量和相关应用研究较少。采用组织培养技术建立其无 性快繁技术体系，可W提高其繁殖系数、实现周年生产、保障种苗的品质，并且有利于种质 资源保存，加快推进其产业化和标准化生产，也为更深层次的研究提供了技术平台。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法，该方法具有种苗繁殖 速度快、生产不受季节影响、移栽成活率高、种苗一致性好等优点，为扁桃斑鸠菊的规模化 和标准化生产提供了工艺方法。
[0005] 本发明所述的扁桃斑鸠菊的组培快繁育苗方法，包括W下步骤：
[0006] 1)外植体采集:采集幼嫩的茎段，去除叶片，清水冲洗后作为外植体备用；
[0007] 2)外植体消毒:对步骤1)得到的外植体进行浸泡消毒，并用无菌水冲洗；
[000引3)初代培养:将步骤2)得到的消毒处理好的外植体接种于诱导培养基中进行培 养；
[0009] 4)继代培养:将步骤3)诱导培养基中形成的不定芽分离切割，转接入继代培养基 中进行培养；
[0010] 5)生根培养:选取步骤4)得到的生长健壮的增殖苗转入生根培养基中进行培养；
[0011] 6)移栽:待根系发育完成并炼苗后，洗去基部培养基，移栽入羟基质中。
[0012] 本发明步骤1)所述的采集幼嫩的茎段，是指选取生长健壮、无病虫害的优良植株， 剪取木质化程度较轻的当年生嫩枝为外植体。
[0013] 步骤2)所述的外植体消毒，优选将步骤1)得到的外植体截成长1.2-1.5cm的带节 小段，剪去叶片，只保留叶柄基部（长约0.5cm)，流水冲洗20min备用；在超净工作台上，用 75%(v/v)酒精浸泡1〇3,0.1%升隶溶液振荡消毒8111111，再用无菌水冲洗5次洗去残留药液， 用无菌滤纸吸干水分后，切去茎段两端和叶柄上部少许(保留长度约0.2cm)，备用。
[0014] 步骤3)所述的初代培养，即诱导无菌芽，在超净工作台上将步骤2)得到的外植体 茎段接种于诱导培养基上，诱导培养基为MS基本培养基附加6-节氨基腺嚷岭(6-BA)0.5mg/ L和糞乙酸(NAA)0.05mg/L，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L，薦糖和琼脂粉添加量分别为 每L培养基30g、6g，灭菌前培养基pH调整为6.0,培养室溫度为（23±2)°C，光照强度1500-25001X，光照时间为12h/d。
[0015] 在诱导培养基中，侧芽易于诱导且生长迅速，诱导率可达70%，W春夏季消毒效果 更佳；初代培养3周时，侧芽可高达3-4cm，具3张 W上叶片，可转入继代培养基进行继代培 养。
[0016] 步骤4)所述的继代培养，待无菌芽生长至3-4cm时，将其分段切割，逐段转入继代 培养基进行培养，每3周左右继代转接一次;培养室光照时间为16h/d，其他培养条件同初代 培养；
[0017] 继代培养基为 MS-Z+6-BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+PP333 (多效挫）0.05mg/L，所述的 MS-Z培养基每升中所含的组分及浓度(mg/L)如下：
[0018] 大量元素:硝酸钟1900、硝酸锭412.5、二水氯化巧880、屯水硫酸儀370、憐酸二氨 钟170、屯水硫酸亚铁27.8、乙二胺四乙酸二钢37.3;
[0019] 微量元素：四水硫酸儘22.3、屯水硫酸锋8.6、棚酸3.1、二水钢酸钢0.25、舰化钟 0.83、五水硫酸铜0.025、六水氯化钻0.025;
[0020] 有机物:肌醇100.0、甘氨酸2.0、盐酸化唉醇(VB6)0.5、烟酸0.5、盐酸硫胺素(VBl) 0.1;
[0021] 其它:琼脂8000、薦糖40000、pH 6.0;
[0022] 扁桃斑鸠菊每个继代周期增殖系数可达4.0,且试管苗生长较快，培养时间超过4 周即易出现黄叶和小芽死亡的情况，影响增殖效率。试管苗对激素较为敏感，6-BA浓度超过 0.3mg/L时容易出现玻璃化现象，当浓度达到0.5mg/L时，玻璃化现象尤为严重，因此培养过 程中需严格控制激素浓度。光照强度为1500-25001X时，光照时间优选16h。
[0023] 步骤5)所述的生根培养，优选选取叶片数4片W上、高度2cmW上的增殖苗转入生 根培养基进行培养，生根培养基选用1/2MS作为基本培养基(仅大量元素减半），附加吗I噪下 酸IBAO.lmg/L，即l/2MS+IBA0.1mg/L，光照时间为每天16h，W促使植株健壮;生根培养2周 时，生根率可达100%，株高5cm左右，植株生长健壮，根系发达;培养基中附加激素浓度IBA 超过0.15mg/L，会造成植株徒长，节间过长;NAA浓度超过0.05mg/L极易出现愈伤组织，影响 生根质量和移栽成活率。
[0024] 步骤6)所述的移栽，优选生根培养2周并在炼苗棚炼苗10天后，移栽入羟基质容器 中，羟基质为泥炭上和珍珠岩的混合基质（泥炭±:珍珠岩= 3:1)，移栽前一天先用0.5% (w/w)高儘酸钟溶液消毒备用，移栽后加强管理，待苗高30cm时即可供大田栽培或山坡造 林，移栽成活率可达95 % W上。
[0025] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0026] 1、首次采用组织培养技术进行扁桃斑鸠菊的种苗繁殖，建立了一套高效的组培快 繁技术体系，该方法能快速大量繁殖试管种苗，不受季节限制，也有利于种质资源的保存。
[0027] 2、本发明中的技术工艺体系完全适合扁桃斑鸠菊的试管苗繁殖。扁桃斑鸠菊试管 苗对激素较为敏感，对6-BA和NAA浓度非常敏感，在继代培养中易发生玻璃化，6-BA浓度超 过0.3mg/L时容易出现玻璃化现象，当浓度达到0.5mg/L时，玻璃化现象尤为严重，因此培养 过程中需严格控制激素浓度。生根培养基中附加激素浓度IBA超过0.15mg/L，会造成植株徒 长，节间过长，NAA浓度超过0.05mg/L极易出现愈伤，影响生根质量和移栽成活率。本发明在 大量试验摸索的基础上，对继代培养基配方、生根培养基配方和各环节培养条件均做了大 量的试验，得到本发明的方法。
[0028] 3、通过本发明中的技术流程，得到的扁桃斑鸠菊组培瓶苗和移栽袋苗植株健壮、 成活率高、一致性好，便于进行标准化生产，便于实现产业化。生根培养2周时，生根率可达 100 %，株高5cm左右，植株生长健壮，根系发达;移栽成活率可达95 % W上。