一种检测肉苁蓉种子生活力的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其是一种检测肉苁蓉种子生活力的方法。
【背景技术】
[0002]肉灰蓉(Cistanchedeserticola Y.C.Ma)为列当科(Orobanchaceae)肉灰蓉属(Cistanche)多年生全寄生草本植物。目前《中国植物志》将我国肉灰蓉属植物确定为五个种和一个变种，即肉灰蓉、沙灰蓉(C.sinensis G.Beck)、盐生肉灰蓉[C.salsa(C.A.Mey.)G.Beck]、管花肉灰蓉[C.tubulalosa (Schenk) Winht]和兰州肉灰蓉(C.1anzhouensisZ.Y.Zhang)，存疑种为蒙古肉灰蓉(C.mongoIica)。
[0003]肉苁蓉属根茎类药材，是用途非常广泛的珍贵中药材植物，自古以来一直被用作强壮滋补的中草药。肉苁蓉在我国有1800多年的药用历史，享有“沙漠人参”之美誉。据《中华人民共和国药典》记载，肉苁蓉的医药作用主要是“补肾阳、益精血、润肠通便，用于阳痿、不孕、腰膝酸软、筋骨无力，肠燥便秘”。
[0004]肉灰蓉为多年生寄生性种子植物，寄生于藜科小乔木梭梭[HaloxylonammodendronBunge (C.A.Mey.)Bunge])根部，是我国西北干旱区特有的传统名贵中药材，已被收入《国际野生植物保护名录》和濒危野生动植物种国际贸易公约(CITES)附录二。我国也将肉苁蓉列为二级保护植物并对肉苁蓉实施了专营管理制度。近几十年来，随着我国改革开放与对外交流的加强以及人们生活水平的提高和保健意识的增强，国内市场和国际市场对肉苁蓉的需求量迅速增加。然而，由于国内肉苁蓉人工种植规模有限、接种率普遍较低，野外现存肉苁蓉资源遭到无节制采挖，肉苁蓉产量与国内外市场需求之间仍存在着很大的差距。
[0005]近年来，内蒙古、新疆、宁夏等省区纷纷结合生态建设进行肉苁蓉人工种植和野生抚育，但种源紧缺、种子质量不高已成为制约肉苁蓉种植产业发展的瓶颈。因此，研究肉苁蓉种子质量评价方法，对节约用种、保证种子质量及提高接种率意义重大。
[0006]肉苁蓉生长在条件恶劣的沙漠、荒漠中，生长周期长，繁殖能力弱，野生资源稀少，导致肉苁蓉种子资源紧缺，价格昂贵。野生种源质量较差，加之肉苁蓉种子萌发率较低，且萌发的种子胚根必须在有限的时间和空间范围内与寄主根部维管束连接，才能顺利完成寄生。目前所采用的人工栽培上往往是通过盲目加大用种量的方法来提高接种率，不仅造成种源浪费，还增加了种植成本。种子生活力是种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力，肉苁蓉种子是否具有健康的种胚是决定种子质量的重要因素。
[0007]针对肉苁蓉种子生活力的测定，国内学者往往通过在特定温度光照条件下，利用TTC法(氯化三苯四氮唑法)对肉苁蓉种子生活力进行测定。高生活力的种子可以大大提高田间接种率，低生活力种子不宜在生产上使用。采用TTC染色法测定种子活力的原理是利用无色的TTC进入细胞，在去氢酶作用下，使H+成为还原态的红色沉淀物TTCH，根据TTCH的形成量，特别是它在种胚器官组织上的分布状况来判断种子的生活力水平。然而，这种利用生化原理检测肉苁蓉种子生活力的方法，不仅化学试剂成本昂贵，而且检测周期较长、检测条件和操作复杂，不适用于人工接种前大批量肉苁蓉种子的质量评估。
[0008]选择高生活力的肉苁蓉种子进行人工播种，是提高肉苁蓉接种率和药材产量所必需解决的关键技术措施之一。因此，研发出一种快速、简便、低成本的肉苁蓉种子生活力检测方法是保证肉苁蓉种子质量、提高肉苁蓉接种率和产量的关键生产环节。
【发明内容】
[0009]本发明的一个目的是提供一种检测某批次肉苁蓉种子是否为有效种子批的方法。
[0010]本发明提供的方法，包括如下步骤:
[0011]I)从某批次肉苁蓉种子中选取具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子；
[0012]所述具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子满足如下1)_4)全部条件:
[0013]I)种子直径为 0.5-1.0mm ；
[0014]2)种子具有椭圆形黄色胚乳；
[0015]3)种子具有椭圆形白色种胚；
[0016]4)种子的种胚挤压后饱满且坚实不破碎；
[0017]2)计算所述具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子百分数，若所述具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子百分数等于或大于77.50 %，则该批次种子为或候选为有效种子批；若所述具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子百分数小于77.50%,则该批次种子不为或候选不为有效种子批；
[0018]所述具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子百分数为所述具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子数量与所述某批次种子总数量的百分比；
[0019]所述有效种子批为在田间的预期接种率等于或大于40 %的种子批。
[0020]上述方法中，
[0021]所述从某批次肉苁蓉种子中选取具有生活力的直径为0.5-1.0mm的种子的方法包括如下步骤:
[0022]A、从某批次肉苁蓉种子中选取直径为0.5-1.0mm的种子；
[0023]B、将所述直径为0.5-1.0mm的种子均去除种皮，观察胚乳，选取具有椭圆形黄色胚乳的种子；
[0024]C、将所述具有椭圆形黄色胚乳的种子均在距胚乳种孔端1/3处挤压，观察种胚，选取具有椭圆形白色种胚的种子；
[0025]D、挤压所有所述具有椭圆形白色种胚的种子的种胚，观察种胚，选取种胚饱满且坚实不破碎的的种子，得到有生活力肉苁蓉种子。
[0026]上述方法中，所述挤压均采用解剖针，挤压为轻轻挤压。
[0027]上述方法中，所述步骤A)和步骤B)之间还包括如下步骤:将所述直径为0.5-1.0mm的种子吸水至饱和状态。
[0028]上述方法中，所述吸水时间大于等于6min。
[0029]本发明第二个目的是提供一种检测待测肉苁蓉种子是否具有生活力的方法。
[0030]本发明提供的方法，包括如下步骤:依次检测待测肉苁蓉种子的直径、胚乳、种胚及种胚活力，若待测种子满足如下1)-4)全部条件，则所述待测种子具有或候选具有生活力，若待测种子不满足如下全部条件，则所述待测种子不具有或候选不具有生活力；
[0031]所述条件为:
[0032]I)所述待测种子直径为0.4-1.0mm ；
[0033]2)所述待测种子具有椭圆形黄色胚乳；
[0034]3)所述待测种子具有椭圆形白色种胚；
[0035]4)所述待测种子的种胚挤压后饱满且坚实不破碎。
[0036]上述方法中，
[0037]所述检测待测肉苁蓉种子的直径方法为测量待测肉苁蓉种子的直径；
[0038]所述检测待测种子的胚乳方法为将所述待测种子去除种皮，观察胚乳形状颜色；
[0039]所述检测待测种子的种胚方法为将所述待测种子在距胚乳种孔端1/3处挤压，观察种胚形状颜色；
[0040]所述检测待测种子的种胚活性方法为挤压所述待测种子的种胚，观察种胚是否饱满且坚实不破碎；
[0041]所述挤压均具体采用解剖剖针。
[0042]上述方法中，在检测所述待测种子的直径和检测所述待测种子胚乳之间还包括如下步骤:将所述直径为0.4-1.0mm的种子进行吸水至饱和状态；所述吸水时间具体大于等于 6min ；
[0043]所述直径为0.4-1.0mm的种子为直径为0.5-1.0mm的种子。
[0044]上述方法在筛选或选育或培育高生活力肉苁蓉种子或高生活力肉苁蓉种子批中的应用也是本发明保护的范围；
[0045]或上述方法在肉苁蓉种子质量检测中的应用也是本发明保护的范围。
[0046]所述肉苁蓉种子采集于肉苁蓉成熟花序。
[0047]本发明以肉苁蓉种子的采收和接种前种子质量的评估为目的，通过从收集的一批次种子中扦样，并采用对充分吸水后的样本种子进行形态解剖观察与统计分析相结合的方法，有效判断出了一批次肉苁蓉种子是否为有效的种子批。该发明提供了一种肉苁蓉种子质量评估的方法和标准，为肉苁蓉高产、高效人工种植提供技术支持。
[0048]本发明证明，⑴肉灰蓉成熟花序中种子直径范围为0-1.0mm，直径低于0.4mm的种子均为无生活力的肉苁蓉种子。因此，在肉苁蓉种子采收后，可立即去除直径低于0.4mm的种子；(2)肉苁蓉种子经充分吸水和形态解剖后，若具有乳白色、饱满、坚实的胚，则为具有生活力的肉苁蓉种子；(3)若一批次肉苁蓉种子内，直径在0.5-1.0mm种子的具有生活力胚的种子百分数的平均值等于或大于77.50%，则该批次种子为有效的种子批。因此，在肉苁蓉种植生产实践中，可采用上述方法和标准可实现对大批量肉苁蓉种子质量的快速检测。
[0049]本发明提出了一种快速评估肉苁蓉产业规模化种植过程中种子质量的方法和标准，为肉苁蓉的高产、高