黄瑞香种子生活力的测定方法
【专利摘要】本发明公开了属于中药材种子质量鉴定及栽培领域的一种黄瑞香种子生活力的测定方法。该方法包括：扦种、净度处理、种子消毒、种子预浸泡、硬实破除、种皮处理、染色、生活力测定。本发明的方法能快速有效的对黄瑞香种子进行生活力测定，减少其他测定方法对黄瑞香种子的损伤及致死，减少操作过程中的作业危险，简便易行，原理可靠，工作效率高，重复性好。本发明中黄瑞香种子的生活力为94.5%。
【专利说明】黄瑞香种子生活力的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药材种子质量鉴定及栽培领域，特别涉及一种黄瑞香种子生活力的测定方法。
技术背景
[0002]黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)属瑞香科瑞香属植物,别名打结花、结香。分布在我国陕西、甘肃、青海、河南等省份，甘肃省主要分布在祁连山等海拔2000~2600m的山坡灌丛、林缘、沟谷地带。黄瑞香的根皮和茎皮，为民间治疗风湿和止痛的常用中药，俗称祖师麻，具有降血脂、抗溶血活性、抗肿瘤活性和强镇痛等作用，也可用于治疗关节炎、镇痛、消炎、手术麻醉等。植物黄瑞香目前为野生资源，是中药材祖师麻的原植物，使用部位是根皮和茎皮，过度的不合理连根采挖方式，使植物资源受到严重破坏，导致祖师麻原植物极度紧缺；又由于黄瑞香种子具有硬实性和休眠性，发芽率非常低，很难满足生产需求；而种子生活力是种子的重要特性，种子生活力对预测休眠种子的发芽力和快速预测种子发芽率具有重要意义，鉴定种子的生活力直接影响到种子的质量和植物材料使用者的经济效益；现有技术中并没有对黄瑞香种子生活力测定的报道，提供一种黄瑞香种子生活力的测定方法是当务之急。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种简便易行、原理可靠、可重复性好的测定黄瑞香种子生活力的方法，这种方法可快速测定黄瑞香种子的生活力、工作效率高、重复性好。
[0004]下面对本发明的内容及步骤做具体的说明:
[0005]本发明黄瑞香种子生活力的测定方法，首先扦取黄瑞香种子，然后对所述黄瑞香种子进行如下后续处理步骤:
[0006]a)净度处理步骤:是将所述黄瑞香种子去除果皮，并清选，得到净种子；
[0007]b)消毒步骤:将所述净种子消毒；
[0008]c)预浸泡处理步骤:将消毒后的净种子置于盛有蒸馏水的烧杯中，浸泡6_18h ；
[0009]d)硬实破除步骤:随机抽取步骤c)获得的浸泡后的种子，用砂纸打磨坚硬的种皮，进行若干次重复实验；
[0010]e)种皮处理步骤:在不伤及种胚的情况下，对步骤d)获得的种皮进行破皮处理，得破皮后种子，然后将破皮后种子置于试管中；
[0011]f)染色步骤:将分析纯2，3，5-三苯基氧化四唑用pH为7.8的磷酸缓冲液配制成质量分数为0.4-0.8%的TTC溶液，并加入到步骤e)中装有破皮后种子的试管中，所述TTC溶液完全淹没种子；然后将试管置于水浴锅中，恒温水浴；
[0012]g)生活力测定步骤:从经染色步骤f)得到的种胚中挑选出深红色的种胚，作为有生活力的种子，并计算有生活力种子的百分率。
[0013]本发明的“生活力”是用“有生活力种子的百分率”来表示的，即有生活力种子占供检种子的百分率。
[0014]本发明的黄瑞香种子的测定方法，是依据生物体内的酶促反应进行的TTC染色反应，是用2，3，5-三苯基氧化四唑(TTC)的无色溶液作为指示剂，当TTC进入种子胚的活细胞后，活细胞呼吸作用中产生的还原态辅脱氢酶将其还原为红色的、稳定而不扩散的TTF，可根据种子染色部位的大小和颜色的深浅来确定种子有无生活力。
[0015]现有技术中，并没有对黄瑞香种子生活力进行测定的方法报道，更没有使用TTC法对黄瑞香种子生活力进行测定的报道，本发明的对黄瑞香种子生活力的TTC测定方法，简单易行、容易操作、可重复率高，对黄瑞香种子的发芽率提供了依据，有利于黄瑞香植物的育种和繁殖。
[0016]测定中所采用的黄瑞香种子，优选的为当年采收的种子。
[0017]本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤a)，是将所述黄瑞香种子以挤压的方法去除果皮，并清洗干净，获得净种子。
[0018]挤压法相对其他方法处理干净、不损伤种子，更能保证种子的完整性。
[0019]本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤b)，是将所述净种子用质量分数为1-5%的高猛酸钾浸泡5分钟进行消毒。
[0020]对种子进行消毒可以防止种子的病虫害、及细菌污染，妨碍对其生活力测定的准确性。
[0021 ] 本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤c)，所述浸泡过程是在自然光条件下25°C恒温浸泡12小时。
[0022]本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤e)中，所述破皮处理是用解剖针刺破种皮。
[0023]种皮会阻碍TTC溶液的渗透，刺破种皮有利于TTC溶液进入而对种胚进行染色，提高种子生活力测定的准确性。
[0024]本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤e)中，所述破皮处理是先用解剖刀沿种子腹背之间纵向割破种皮，然后用镊子轻轻剥出种胚，并将种胚置于试管中。
[0025]完全去除种皮、取出种胚进行染色，对种子生活力的测定更准确、迅速。
[0026]优选，本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤f)，所述TTC溶液的质量分数为0.5%。
[0027]质量分数为0.5%的TTC溶液，既能较好地染色，又不伤种胚，在这个浓度对黄瑞香种子生活力进行测定，既可保证对种子生活力测定的准确性，又能保证种子的发芽率。
[0028]本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤f)，所述恒温水浴是在15-55°C条件下进行l_24h。
[0029]优选，本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，所述步骤f)，所述恒温水浴是在45°C条件下进行6h。
[0030]进一步优选，本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法，包括如下步骤:
[0031]a)扦种步骤:扦取黄瑞香种子；
[0032]b)净度处理步骤:是将所述黄瑞香种子用挤压法去除果皮，并清洗干净，获得净种子；
[0033]c)消毒步骤:是将所述净种子用3%的高锰酸钾浸泡5分钟进行消毒；[0034]d)预浸泡处理步骤:将消毒后的净种子置于盛有蒸馏水的烧杯中，在自然光条件下25°C恒温浸泡12小时；
[0035]e)硬实破除步骤:随机抽取步骤d)获得的浸泡后的种子，用砂纸打磨坚硬的种皮，进行若干次重复实验；
[0036]f)种皮处理步骤:在不伤及种胚的情况下，先用解剖刀沿种子腹背之间纵向割破种皮，然后用镊子轻轻剥出种胚，并将种胚置于试管中；
[0037]g)染色步骤:将分析纯2，3，5-三苯基氧化四唑，用pH为7.8的磷酸缓冲液配制成质量分数为0.5%的TTC溶液，并加入到步骤f)中装有种胚的试管中，所述TTC溶液完全淹没种子；然后将试管置于水浴锅中，45°C恒温水浴6h ；
[0038]h)生活力测定步骤:从经染色步骤g)得到的种胚中挑选出深红色的种胚，作为有生活力的种子，并计算有生活力种子的百分率。
[0039]本发明的黄瑞香种子生活力的测定方法的有益效果为:提供了一种用TTC法对黄瑞香种子的生活力进行测定的方法。这种方法可直接根据种胚的染色情况判断种子生活力，相较其他方法，简便易行，原理可靠，对种子无损伤，可重复性好；黄瑞香种子的生活力为 94.5%ο
【具体实施方式】
[0040]下面结合实施例对本发明作进一步说明:
[0041]实施例1·[0042]黄瑞香种子生活力的测定方法，包括如下步骤:
[0043]a)扦种步骤:扦取黄瑞香种子500g ；
[0044]b)净度处理步骤:将所述黄瑞香种子用挤压法去除果皮，并清洗干净，获得净种子;
[0045]c)消毒步骤:是将所述净种子用3%的高锰酸钾浸泡5分钟进行消毒；
[0046]d)预浸泡处理步骤:将消毒后的净种子置于盛有蒸馏水的烧杯中，在自然光条件下25°C恒温浸泡12小时；
[0047]e)硬实破除步骤:随机抽取步骤d)获得的浸泡后的种子，用砂纸打磨坚硬的种皮，进行若干次重复实验；
[0048]f)种皮处理步骤:在不伤及种胚的情况下，先用解剖刀沿种子腹背之间纵向割破种皮，然后用镊子轻轻剥出种胚，并将种胚置于试管中；
[0049]g)染色步骤:将分析纯2，3，5-三苯基氧化四唑，用pH为7.8的磷酸缓冲液配制成质量分数为0.5%的TTC溶液，并加入到步骤f)中装有种胚的试管中，所述TTC溶液完全淹没种子；然后将试管置于水浴锅中，45°C恒温水浴6h ；
[0050]h)生活力测定步骤:从经染色步骤g)得到的种胚中挑选出深红色的种胚，作为有生活力的种子，并计算有生活力种子的百分率。
[0051]测定结果:黄瑞香种子的生活力为94.5%。
[0052]实施例2
[0053]黄瑞香种子生活力的测定方法，包括如下步骤:
[0054]a)扦种步骤:扦取黄瑞香种子500g ；[0055]b)净度处理步骤:将所述黄瑞香种子用搅拌法去除果皮，并清洗干净，获得净种子;
[0056]c)消毒步骤:是将所述净种子用1%的高锰酸钾浸泡5分钟进行消毒；
[0057]d)预浸泡处理步骤:将消毒后的净种子置于盛有蒸馏水的烧杯中，在自然光条件下25°C恒温浸泡6小时；
[0058]e)硬实破除步骤:随机抽取步骤d)获得的浸泡后的种子，用砂纸打磨坚硬的种皮，进行若干次重复实验；
[0059]f)种皮处理步骤:在不伤及种胚的情况下，用解剖针刺破种皮，并将破皮后种子置于试管中；
[0060]g)染色步骤:将分析纯2，3，5-三苯基氧化四唑，用pH为7.8的磷酸缓冲液配制成质量分数为0.8%的TTC溶液，并加入到步骤f)中装有破皮后种子的试管中，所述TTC溶液完全淹没种子；然后将试管置于水浴锅中，55°C恒温水浴Ih ；
[0061]h)生活力测定步骤:从经染色步骤g)得到的种胚中挑选出深红色的种胚，作为有生活力的种子，并计算有生活力种子的百分率。
[0062]测定结果:黄瑞香种子的生活力为91.5%。[0063]实施例3
[0064]黄瑞香种子生活力的测定方法，包括如下步骤:
[0065]a)扦种步骤:扦取黄瑞香种子500g ；
[0066]b)净度处理步骤:将所述黄瑞香种子用挤压法去除果皮，并清洗干净，获得净种子;
[0067]c)消毒步骤:是将所述净种子用5%的高锰酸钾浸泡5分钟进行消毒；
[0068]d)预浸泡处理步骤:将消毒后的净种子置于盛有蒸馏水的烧杯中，在自然光条件下25 °C恒温浸泡18小时；
[0069]e)硬实破除步骤:随机抽取步骤d)获得的浸泡后的种子，用砂纸打磨坚硬的种皮，进行若干次重复实验；
[0070]f)种皮处理步骤:在不伤及种胚的情况下，先用解剖刀沿种子腹背之间纵向割破种皮，然后用镊子轻轻剥出种胚，并将种胚置于试管中；
[0071]g)染色步骤:将分析纯2，3，5-三苯基氧化四唑，用pH为7.8的磷酸缓冲液配制成质量分数为0.4%的TTC溶液，并加入到步骤f)中装有种胚的试管中，所述TTC溶液完全淹没种子；然后将试管置于水浴锅中，15°C恒温水浴24h ；
[0072]h)生活力测定步骤:从经染色步骤g)得到的种胚中挑选出深红色的种胚，作为有生活力的种子，并计算有生活力种子的百分率。
[0073]测定结果:黄瑞香种子的生活力为93%。
【权利要求】
1.一种黄瑞香种子生活力的测定方法，首先进行扦取黄瑞香种子步骤，其特征在于，所述测定方法还包括对所述黄瑞香种子进行如下后续处理步骤: a)净度处理步骤:是将所述黄瑞香种子去除果皮，并清选，得到净种子； b)消毒步骤:将所述净种子消毒； c)预浸泡处理步骤:将消毒后的净种子置于盛有蒸馏水的烧杯中，浸泡6-18h； d)硬实破除步骤:随机抽取步骤c)获得的浸泡后的种子，用砂纸打磨坚硬的种皮，进行若干次重复实验； e)种皮处理步骤:在不伤及种胚的情况下，对步骤d)获得的种皮进行破皮处理，得破皮后种子，然后将破皮后种子置于试管中； f)染色步骤:将分析纯2，3，5-三苯基氧化四唑用pH为7.8的磷酸缓冲液配制成质量分数为0.4-0.8%的TTC溶液，并加入到步骤e)中装有破皮后种子的试管中，所述TTC溶液完全淹没种子；然后将试管置于水浴锅中，恒温水浴； g)生活力测定步骤:从经染色步骤f)得到的种胚中挑选出深红色的种胚，作为有生活力的种子，并计算有生活力种子的百分率。
2.根据权利要求1所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤a)，是将所述黄瑞香种子以挤压的方法去除果皮，并清洗干净，获得净种子。
3.根据权利要求1所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤b)，是将所述净种子用质量分数为1-5%的高锰酸钾浸泡5分钟进行消毒。
4.根据权利要求1所述的 黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤C)，所述浸泡过程是在自然光条件下25°C恒温浸泡12小时。
5.根据权利要求1所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤e)中，所述破皮处理是用解剖针刺破种皮。
6.根据权利要求1所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤e)中，所述破皮处理是先用解剖刀沿种子腹背之间纵向割破种皮，然后用镊子轻轻剥出种胚，并将种胚置于试管中。
7.根据权利要求1所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤f)，所述TTC溶液的质量分数为0.5%。
8.根据权利要求1所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤f)，所述恒温水浴是在15-55°C条件下进行l_24h。
9.根据权利要求6所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，所述步骤f)，所述恒温水浴是在45 °C条件下进行6h。
10.根据权利要求1所述的黄瑞香种子生活力的测定方法，其特征在于，包括如下步骤: a)扦种步骤:扦取黄瑞香种子； b)净度处理步骤:是将所述黄瑞香种子用挤压法去除果皮，并清洗干净，获得净种子； c)消毒步骤:是将所述净种子用3%的高锰酸钾浸泡5分钟进行消毒； d)预浸泡处理步骤:将消毒后的净种子置于盛有蒸馏水的烧杯中，在自然光条件下25°C恒温浸泡12小时； e)硬实破除步骤:随机抽取步骤d)获得的浸泡后的种子，用砂纸打磨坚硬的种皮，进行若干次重复实验； f)种皮处理步骤:在不伤及种胚的情况下，先用解剖刀沿种子腹背之间纵向割破种皮，然后用镊子轻轻剥出种胚，并将种胚置于试管中； g)染色步骤:将分析纯2，3，5-三苯基氧化四唑，用pH为7.8的磷酸缓冲液配制成质量分数为0.5%的TTC溶液，并加入到步骤f)中装有种胚的试管中，所述TTC溶液完全淹没种子；然后将试管置于水浴锅中，45°C恒温水浴6h ； h)生活力测定步骤:从经染色步骤g)得到的种胚中挑选出深红色的种胚，作为有生活力的种子，并 计算有生活力种子的百分率。
【文档编号】A01C1/02GK103703890SQ201310705225
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月19日 优先权日:2013年12月19日
【发明者】王勤礼, 闫芳, 毛著鸿, 吕彪, 高松, 许耀照 申请人:甘肃凯源生物技术开发中心