便携式植物花粉生活力测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物培育技术领域，尤其涉及一种便携式植物花粉生活力测定方法。
【背景技术】
[0002]花粉生活力，又称花粉活力，是指花粉具有存活、生长、萌发或发育的能力，其受自身遗传特性和外界因素的影响。在育种工作中，珍贵、稀有遗传种质的贮备很重要，由于成熟花粉包含着植物的全部遗传信息，其贮藏是有效利用珍稀种质的简捷、高效途径，而植物花粉生活力检测是植物育性研究的一个重要内容。植物花粉生活力的测定是反映植物自然育性的一个重要指标，在濒危植物的保育工作中取到重要作用，因此，在植物花粉育种时都需要对花粉生活力进行检测。现有植物花粉生活力测定方法较多，如碘一碘化钾法、TTC法、无机酸法、荧光染色法、培养基法等，但是以上方法都是针对已采集好、储存好的花粉进行花粉生活力测定，不适用于野外对自然条件下植物花粉生活力的直接检测。
[0003]上述现有技术中针对野外自然条件下植物花粉生活力的测定中存在以下缺点:一方面除培养基法外，其他测定方法的实验药品以液体为主不易于野外携带；另一方面，现有技术中的植物花粉均需要在短暂时间温箱培养后使用显微镜进行观察统计，而野外实验无法携带温箱，也不便于携带显微镜；此外现有检测方法均是直接采集花粉进行储运后在实验室进行测定，这一过程将对自然条件下的数据的真实度有很大的影响。
【发明内容】
[0004]针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种便携式植物花粉生活力测定方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明的技术方案如下:
[0006]—种便携式植物花粉生活力测定方法，包括如下步骤:
[0007]准备固体培养基，具体为将配置好的固体培养基在溶化状态下，均匀涂布在在载玻片上；
[0008]存放载玻片，具体为将涂布有固体培养基的载玻片存放于便携式冷藏箱中；
[0009]植物花粉的储存，具体为取出冷藏箱中的载玻片，将采集到的植物花粉涂布于载玻片上的固体培养基上后，将涂布有植物花粉的载玻片继续放入所述便携式冷藏箱中冷藏；
[0010]实验室生活力检测，具体为取出冷藏后涂布有植物花粉的载玻片，对其进行温箱培养和视野观察。
[0011]现有技术在花粉贮藏过程中，一般是将采集到的花粉直接冷藏后，再在实验室进行花粉涂布和检测，其中花粉的贮藏温度条件对花粉生活力影响最大，而单纯的低温贮藏能够延长花粉寿命但会降低花粉萌发率，可能是由于低温会使细胞脱水从而影响花粉生活力；但本发明将植物花粉先涂布在培养基上，再进行冷藏，会最大程度地减少细胞脱水，而后再提供适合植物花粉生活的微环境，使其萌发，能够更真实地反映植物花粉野外自然萌发状态，且延长了植物花粉的寿命。
[0012]较佳地，所述固体培养基包括蔗糖、硼酸、琼脂和水，其用量和其它成分还可根据不同植物和不同的实验要求进行调整。
[0013]较佳地，所述固体培养基在所述载玻片上的厚度为1.5?2_。
[0014]较佳地，所述便携式冷藏箱为带有冰袋的植物花粉采集箱或车载移动冰箱。
[0015]较佳地，所述存放载玻片具体为将涂布有固体培养基的所述载玻片排列于玻片架上后，将所述玻片架固定于所述便携式冷藏箱中；将所述载玻片存放于玻片架上，使其相互隔离，防止载玻片上的培养基沾粘，影响后续的植物花粉的生活力测定。
[0016]较佳地，所述便携式冷藏箱中的温度为O?6°C。
[0017]较佳地，所述“将涂布有植物花粉的载玻片继续放入所述便携式冷藏箱中冷藏”中的冷藏时间为O?48h，考虑到冷藏时间越长，对植物花粉的萌发影响越大，为更真实准确地检测到植物花粉生活力，因此，建议冷藏时间小于48小时，但在特殊情况下，也可以超过48小时，需根据具体情况进行选择。
[0018]较佳地，所述温箱培养具体为将涂布有植物花粉的载破片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在20?35°C培养箱中，培养2min?24h。
[0019]较佳地，所述视野观察具体为将温箱培养后的植物花粉在显微镜下选取视野，统计该视野中的植物花粉萌发率。
[0020]本发明针对野外自然条件下植物花粉生活力测定的要求，在培养基法的基础上进行改进，将其涂布在载玻片上后冷藏，而方便在野外采集植物花粉后，直接涂布在载玻片上，继续冷藏，在野外采集完成后，再进行实验室内的植物花粉生活力检测，使其可便携于野外进行测定。上述检测方法操作简单、使用方便，不但延长了植物花粉的寿命，且更真实地反映野外植物花粉自然萌发状态。
【附图说明】
[0021]图1、本发明实施例的视野观察图；
[0022]图2、本发明对比例的视野观察图。
【具体实施方式】
[0023]下面通过与现有技术中的培养基法相比较，对本发明的【具体实施方式】作进一步的详细说明。
[0024]在此选用野外红树植物角果木的花粉为植物花粉样品，实施例选用本发明的测定方法，而对比例选用现有技术中固体培养基法来进行测定。
[0025]首先准备固体培养基，实施例和对比例选用同样的培养基，其配方为10%的蔗糖，3%的琼脂，0.02%的硼酸，其余为水，其中配方量单位均为g/ml ;其中蔗糖10g、琼脂3g、硼酸0.02g和水10mL,在沸水浴中将上述琼脂溶化在水中后与蔗糖和硼酸混合后，加水至10mL后冷却备用。
[0026]实施例
[0027]首先将配置好的固体培养基溶化，在其溶化状态下，将培养基均匀涂布在在载玻片上，使之固化，其中固体培养基在载玻片上的厚度范围为1.5?2mm ;
[0028]随后将涂布有固化好的培养基的载玻片按序排列于玻片架上后，再玻片架固定于便携式冷藏箱中；将所述载玻片存放于玻片架上，使其相互隔离，防止载玻片上的培养基沾粘，影响后续的植物花粉的生活力测定；其中本实施例中的便携式冷藏箱为带有冰袋的植物花粉采集箱，其至少可以保持O?6°C的微环境8h，也可以选用车载小冰箱来存放，其温度更稳定，且可以长期保持该温度；
[0029]接着采集红树植物角果木的花粉，并对其储存，具体为取出冷藏箱中的载玻片，将采集到的植物花粉涂布于载玻片上的固体培养基上后，将涂布有植物花粉的载玻片继续放入便携式冷藏箱中冷藏，一般可冷藏O?24h，本实施例中红树植物角果木的花粉冷藏Sh ;
[0030]最后进行实验室生活力检测，取出冷藏后涂布有植物花粉的载玻片，将其放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在30°C的培养箱中培养12h后，进行显微镜检测，其红树植物角果木的花粉萌发率为34.5%，其中一视野如图1所示。
[0031]对比例
[0032]首先将配置好的固体培养基溶化，在其溶化状态下，将培养基均匀涂布在在载玻片上，使之固化，其中固体培养基在载玻片上的厚度范围为1.5?2mm ;;接着取野外采集的红树植物角果木的花粉，该花粉在试管中冷藏贮存8h，将在试管中冷藏的花粉直接涂布载玻片的培养基上；随后同实施例相同，将该载破片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在30°C的培养箱中培养12h后，进行显微镜检测，其红树植物角果木的花粉萌发率为8.6%，其中一视野如图2所示。
[0033]由于花粉的贮藏温度条件对花粉生活力影响最大，而单纯的低温贮藏能够延长花粉寿命但会降低花粉萌发率，可能是由于低温会使细胞脱水从而影响花粉生活力；而本发明将植物花粉先涂布在培养基上，再进行冷藏，会最大程度地减少细胞脱水，而后再提供适合植物花粉生活的微环境，使其萌发，能够更真实地反映植物花粉野外自然萌发状态，且延长了植物花粉的寿命。
[0034]上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡以本发明权利要求所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围之内。
【主权项】
1.一种便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于，包括如下步骤: 准备固体培养基，具体为将配置好的固体培养基在溶化状态下，均匀涂布在载玻片上; 存放载玻片，具体为将涂布有固体培养基的载玻片存放于便携式冷藏箱中； 植物花粉的储存，具体为取出冷藏箱中的载玻片，将采集到的植物花粉涂布于载玻片上的固体培养基上后，将涂布有植物花粉的载玻片继续放入所述便携式冷藏箱中冷藏；实验室生活力检测，具体为取出冷藏后涂布有植物花粉的载玻片，对其进行温箱培养和视野观察。2.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述固体培养基包括蔗糖、硼酸、琼脂和水。3.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述固体培养基在所述载玻片上的厚度为1.5?2mm。4.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述便携式冷藏箱为带有冰袋的植物花粉采集箱或车载移动冰箱。5.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述存放载玻片具体为将涂布有固体培养基的所述载玻片排列于玻片架上后，将所述玻片架固定于所述便携式冷藏箱中。6.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述便携式冷藏箱中的温度为O?6°C。7.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述“将涂布有植物花粉的载玻片继续放入所述便携式冷藏箱中冷藏”中的冷藏时间为O?48h。8.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述温箱培养具体为将涂布有植物花粉的载破片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在20?35°C培养箱中，培养2min?24h。9.根据权利要求1所述的便携式植物花粉生活力测定方法，其特征在于:所述视野观察具体为将温箱培养后的植物花粉在显微镜下选取视野，统计该视野中的植物花粉萌发率。
【专利摘要】本发明涉及植物培育技术领域，尤其涉及一种便携式植物花粉生活力测定方法，首先准备固体培养基，将配置好的固体培养基在溶化状态下，均匀涂布在载玻片上；随后存放载玻片，将涂布有固体培养基的载玻片存放于便携式冷藏箱中；接着进行植物花粉的储存，取出冷藏箱中的载玻片，将采集到的植物花粉涂布于载玻片上的固体培养基上后，将涂布有植物花粉的载玻片继续放入所述便携式冷藏箱中冷藏；最后进行实验室植物花粉生活力检测；本发明操作简单、使用方便，不但延长了植物花粉的寿命，并且能够更真实地反映植物花粉野外自然萌发状态。
【IPC分类】C12Q1/02
【公开号】CN105132516
【申请号】CN201510597870
【发明人】张颖
【申请人】海南师范大学, 张颖, 严延良
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月18日